舒洛地特通过抑制NOX4/NLRP3通路减轻高糖诱导的视网膜血管损伤

目的:观察舒洛地特(SDX)在糖尿病状态下对视网膜微血管内皮细胞的保护作用。方法:(1)采用高脂喂养及腹腔注射链脲佐菌素的方法构建C57BL/6小鼠的2型糖尿病模型,对小鼠腹腔注射SDX或等体积生理盐水治疗12周。用伊文思蓝法检测视网膜微血管渗漏及微血管密度改变;用Western blot、免疫荧光等方法检测各组小鼠视网膜中NLRP3炎症小体成分、紧密连接蛋白1(ZO-1)及NADPH氧化酶4(NOX4)的表达情况。(2)用高糖处理人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs),并与梯度浓度的SDX共处理;用腺病毒感染HRMECs以过表达NOX4或者用siRNA转染HRMECs以敲减NOX4,观察NLRP3炎症小体成分、NOX4、ZO-1和VE-钙黏着蛋白(VE-Cad)的表达情况,以及活性氧簇(ROS)的生成情况。结果:(1)SDX处理增加糖尿病小鼠视网膜中ZO-1蛋白的表达,抑制糖尿病小鼠视网膜微血管渗漏,增加糖尿病小鼠视网膜微血管密度和节细胞数量,并抑制NLRP3炎症小体的活化(P<0.05)。(2)在高糖刺激的HRMECs中,SDX处理增加ZO-1和VE-Cad蛋白的表达,显著抑制NLRP3炎症小体活化及NOX4介导的ROS生成(P<0.05)。(3)沉默NOX4可降低高糖刺激下HRMECs的NLRP3炎症小体活化和ROS生成,并抑制高糖刺激诱导的ZO-1和VE-Cad表达下降(P<0.05)。(4)过表达NOX4可明显增加HRMECs中NLRP3炎症小体活化和ROS生成,降低ZO-1和VE-Cad蛋白的表达(P<0.05);过表达NOX4后再予以SDX处理能部分逆转SDX引起的以上改变(P<0.05)。结论:SDX通过抑制NOX4/ROS/NLRP3通路减轻高糖诱导的视网膜血管内皮损伤。     

交叉置钉法双侧单边外固定支架治疗胫腓骨干骺端骨折

目的:观察交叉置钉法双侧单边外固定支架治疗胫腓骨干骺端骨折的临床疗效.方法:2006年1月至2011年12月,采用交叉置钉法双侧单边外固定支架治疗胫腓骨干骺端骨折患者58例,男40例,女18例.年龄21 ～75岁,中位数36岁.左侧26例,右侧32例.胫腓骨近干骺端骨折34例,胫腓骨远干骺端骨折24例.开放性骨折38例,闭合性骨折20例.按照AO骨折分类:4.1.A2型3侧,4.1.A3型23例,4.1.B2型3例,4.1.C1型5例,4.3.A2型6例,4.3.A3型18例.结果:50例患者获得随访,随访时间5 ～31个月,中位数12.5个月;失访8例.45例术后3个月骨痂形成;5例术后3个月骨折无明显愈合征象,行自体髂骨移植后愈合.7例行二次植皮后伤口愈合,5例行局部皮瓣转移修复术后伤口愈合.骨折均获得愈合,愈合时间3 ～10个月,中位数5个月.使用外固定支架时间4.5 ～15个月,中位数7.5个月.12例拆除外固定支架后应用下肢支具辅助行走;1例因原有膝部疾病,膝关节活动欠佳.共285个钉道,发生钉道反应及钉道感染者40个,占14％.其中胫骨近端外侧1个钉道于术后5个月时渗出脓液,去除外固定支架半个月后出现腘窝部脓肿,经切开引流后愈合;胫骨远端外侧1个钉道,在去除外固定支架半个月后形成脓肿,经切开引流并静脉滴注抗生素4d后愈合;其余钉道偶有渗液者,经过钉道护理后治愈,或去除外固定架后愈合.根据Johner-Wruhs胫骨骨折疗效标准评定疗效,优33例,良11例,可3例,差3例,优良率为88％.结论:采用交叉置钉法双侧单边外固定支架治疗胫腓骨干骺端骨折,具有创伤小、固定牢靠、可早期进行功能锻炼、并发症少、疗效好等优点,值得临床推广应用.     

罗格列酮对高糖环境中3T3-L1脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体基因表达的调控作用

目的 研究不同浓度葡萄糖培养环境及罗格列酮干预对分化成熟脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体1（ATIR）和受体2（AT2R）基因表达的影响.方法 取分化成熟的脂肪细胞3T3-L1,分别用含不同浓度葡萄糖（空白对照、5.6、11.2、25.0 mmol/L）的培养基和含不同浓度葡萄糖并添加10 nmol/L罗格列酮的培养基分组培养24 h,Real-time PCR检测3T3-L1脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达.结果 5.6 mmol/L葡萄糖处理组AT1R基因表达明显低于空白对照和11.2、25.0 mmol/L葡萄糖处理组（P〈0.05）;AT2R基因表达随着葡萄糖浓度的升高而明显上调（P〈0.05）.随着葡萄糖浓度的升高,罗格列酮干预组AT1R和AT2R基因表达呈下降趋势.与相应浓度的葡萄糖处理组比较,罗格列酮干预组AT1R表达均显著上调（P〈0.05）.作用随葡萄糖浓度的升高而减弱;AT2R基因表达显著下调（P〈0.05）,作用随葡萄糖浓度的升高而加强.结论 罗格列酮对高浓度葡萄糖导致的脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达变化具有调控作用.     

罗格列酮对高糖环境中3T3-L1脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体基因表达的调控作用

目的 研究不同浓度葡萄糖培养环境及罗格列酮干预对分化成熟脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体1(ATIR)和受体2(AT2R)基因表达的影响.方法 取分化成熟的脂肪细胞3T3-L1,分别用含不同浓度葡萄糖(空白对照、5.6、11.2、25.0 mmol/L)的培养基和含不同浓度葡萄糖并添加10 nmol/L罗格列酮的培养基分组培养24 h,Real-time PCR检测3T3-L1脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达.结果 5.6 mmol/L葡萄糖处理组AT1R基因表达明显低于空白对照和11.2、25.0 mmol/L葡萄糖处理组(P<0.05);AT2R基因表达随着葡萄糖浓度的升高而明显上调(P<0.05).随着葡萄糖浓度的升高,罗格列酮干预组AT1R和AT2R基因表达呈下降趋势.与相应浓度的葡萄糖处理组比较,罗格列酮干预组AT1R表达均显著上调(P<0.05).作用随葡萄糖浓度的升高而减弱;AT2R基因表达显著下调(P<0.05),作用随葡萄糖浓度的升高而加强.结论 罗格列酮对高浓度葡萄糖导致的脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达变化具有调控作用.     

氯化钴体外诱导低氧促进脂肪细胞炎症反应

目的 以氯化钴体外模拟低氧,研究低氧与脂肪细胞炎症的关系,并探讨其可能的作用机制。方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,加入氯化钴处理,体外模拟低氧状态,利用实时荧光定量PCR及Western印迹法检测低氧诱导因子1α( HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(Glut1)、脂肪因子、炎症因子等mRNA和蛋白表达水平及炎症相关信号通路变化。结果 200 μmol/L氯化钴显著上调3T3-L1脂肪细胞HIF-1α及Glut1表达,同时促进内质网应激相关基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白(GRP)78的mRNA表达增加,脂联素的表达水平下降,抵抗素和瘦素的mRNA表达水平增加。另外,环氧合酶2、白细胞介素6等炎症因子基因的mRNA水平表达也明显上调,NF-κB的抑制蛋白IκBα的磷酸化水平增加。结论低氧状态可能通过激活NF-κB炎症信号通路诱导脂肪细胞产生炎症。     

内质网应激激活STING信号通路并降低胰岛β细胞活力

目的：鉴定胰岛β细胞中干扰素基因刺激因子（STING）信号通路相关基因的表达及其与内质网应激的相互作用,研究2个通路间的相互作用对胰岛β细胞活力的影响。方法：通过生物信息学分析来源于人的胰岛单细胞RNA测序数据集,得到STING信号通路相关基因在胰岛β细胞中的表达变化;用免疫荧光法检测并比较野生型小鼠和db/db糖尿病小鼠胰岛β细胞中STING蛋白的表达差异;用STING特异性激动剂5,6-二甲基呫吨酮-4-乙酸（DMXAA）处理3种常用的小鼠胰岛β细胞系（NIT-1、Min6及beta-TC-6）,并通过RT-qPCR和Western blot分别检测其STING信号通路相关蛋白的mRNA和蛋白表达水平变化;用毒胡萝卜素（TG）诱导上述β细胞系内质网应激,通过Western blot检测STING信号通路相关蛋白的表达及磷酸化水平,并通过CCK-8法检测胰岛β细胞活力。结果：人胰岛β细胞中存在STING信号通路主要基因mRNA的表达,但在健康人群和糖尿病患者的表达水平无显著差异。免疫荧光结果表明,野生型小鼠和db/db小鼠胰岛β细胞的STING蛋白均在细胞核周边富集,且在db/db小...