PTEN、Akt与CREB基因在偏头痛大鼠三叉神经节的表达

目的 检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase, Akt)与cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein, CREB)基因在偏头痛模型大鼠三叉神经节的表达情况,探讨其在偏头痛发病机制中的相互关系及作用.方法 通过硝酸甘油(glyceryl trinitrate,GTN)法建立大鼠偏头痛模型,分别在GTN注射后1、4、12和24 h,取三叉神经节通过RT-PCR和免疫组化法对PTEN、Akt和CREB基因在mRNA和蛋白水平进行检测.结果 PTEN的基因与蛋白表达开始呈下降趋势,至GTN 12 h时分别为(0.42±0.07)(0.19±0.02),较对照组(1.00±0.07)(0.36±0.02)有显著降低(P<0.05),但到24 h时基因与蛋白表达量分别为(3.09±0.21)(0.45±0.05),又明显回升(P<0.05);Akt与PTEN呈相反变化趋势,基因与蛋白表达在GTN 4 h(1.38±0.07)(0.23±0.03)和12 h(1.42±0.03)(0.25±0.02)时显著增加(P<0.05),24 h(0.88±0.15)(0.15±0.06)表达又降至正常水平(P＞0.05);而GTN各组的CREB的基因与蛋白表达均较对照组(1.00±0.07)(0.43±0.03)有显著降低(P<0.05),24 h(0.42±0.14)(0.27±0.05)表达量降到最低(P<0.05).PTEN与Akt、CREB的基因表达呈显著负相关,r分别为-0.671,-0.484(P<0.05),蛋白表达也呈显著负相关,r分别为-0.563,-0.430(P<0.05),而Akt与CREB的基因及蛋白表达相关性不显著,r分别为0.272,-0.041(P＞0.05).结论 偏头痛大鼠三叉神经节中PTEN、Akt及CREB在GTN不同时间点表达发生改变,且PTEN调控了Akt与CREB的表达,可能通过影响神经突触可塑性,参与偏头痛的发生发展过程.     

下调PTEN基因对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用研究

目的 探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用.方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组(转染脂质体)、pshGFP组(转染pshGFP质粒)、pshRNApten治疗组(转染pshRNApten质粒),每组20只,各组分别于再灌注后3d(6只)、7d(7只)、14d(7只)三个时间点进行观察.正常对照组与pshGFP组分别注射脂质体与pshGFP质粒,pshRNApten治疗组于海马局部注射pshRNApten质粒.注射2d后,采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型.利用RT-PCR和免疫组化法检测海马神经元PTEN基因的表达;采用HE和Nissl染色检测神经元损伤情况;采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 pshRNApten治疗组海马神经元PTEN基因的mRNA和蛋白表达量均较正常对照组明显下降(P<0.05).pshRNApten治疗组海马神经元损伤和变性程度均明显轻于pshGFP组大鼠,海马TUNEL染色阳性细胞数也明显少于pshGFP组大鼠(P<0.05).结论 下调PTEN能有效缓解由缺血再灌注所致的神经元损伤.     

下调PTEN对血管性痴呆大鼠海马神经元CREB的调节作用

目的探讨PTEN基因对血管性痴呆大鼠海马神经元CREB表达的影响机制。方法 30只大鼠随机分为正常组、AdR-siPTEN干预组、AdRFP阴性对照组,海马CA1区局部注射AdR-siPTEN腺病毒后2 d,采用双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO)法建立血管性痴呆模型,4 w后应用HE染色检测神经元的损伤,RT-PCR和免疫组织化学检测CA1区Akt、CREB mRNA的表达。结果海马部位有PTEN基因红色荧光蛋白表达,并有PTEN基因的mRNA表达量明显下降(P0.01);HE染色显示,AdR-siPTEN组海马神经元损伤和变性程度明显轻于AdRFP阴性对照组大鼠;RT-PCR和免疫组化染色结果显示,与AdRFP组相比,AdR-siPTEN治疗组CA1区Akt、CREB的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论下调PTEN基因可通过Akt增加CREB的表达,从而改善血管性痴呆大鼠神经元突触可塑性,达到减轻神经元损伤、提高学习记忆和神经保护的目的 。     

下调PTEN基因对偏头痛大鼠三叉神经节NMDAR1和一氧化氮的影响

目的:利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphata-se and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达,探讨PTEN基因是否参与偏头痛的病理过程及其对三叉神经节内N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚基(N-methyl-D-aspartate receptor1,NMDAR1,简写NR1)和一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响。方法:SD大鼠分成4组:假手术组(Sham组,n=12);硝酸甘油模型组(NTG组,n=12);PTEN基因下调组(AdR-siPTEN组,n=12);Ad-RFP非特异siRNA处理空载体对照组(Ad-RFP组,n=12)。将重组腺病毒立体定向注射入大鼠三叉神经节内,一周后通过皮下注射NTG建立偏头痛大鼠模型,分别于NTG注射前及注射后15分钟、30分钟、1、2、4小时观察大鼠痛阈变化,同时检测各组大鼠三叉神经节NR1和NO的差异。结果 :AdR-siPTEN腺病毒可下调三叉神经节PTEN基因的表达。与Ad-RFP组相比,AdR-siPTEN组的偏头痛大鼠痛阈明显增高,并且三叉神经节内NR1表达及NO合成明显减少。结论 :PTEN基因参与调节偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可减轻NTG诱导的偏头痛大鼠模型对机械性刺激的反应,其机制可能是下调PTEN引起NR1表达量减低,继而引起NO含量降低所致。