基因芯片分析NES1转染胃癌细胞株后肿瘤相关基因表达的变化

目的：探讨转染正常上皮细胞特异性-1基因（NES1）后,胃癌细胞株SGC-7901基因表达谱的改变。方法：应用脂质体介导的方法,将pcDNA3．1-NES1真核表达载体和pcDNA3．1-vector分别转染胃癌细胞株SGC-7901，再分别提取转染pcDNA3．1-NES1和空载体pcDNA3．1-vector的SGC-7901细胞总RNA。应用基凶芯片技术分析NES1转染后基因表达的变化，并用实时定量PCR检验实验结果。结果：NES1转染胃癌细胞株后引起广泛的基因变化，其中上调及下调2倍以上的共有177个基因，这些基因的功能涉及多个方面，包括信号转导、细胞周期调控、细胞凋亡、细胞增殖及转移等。结论：转染NES1基因后引起胃癌细胞SGC-7901基因广泛的表达变化,推测NES1的抑癌作用可能通过这些基因发挥，为进一步阐明NES1基因与胃癌发生、发展的关系提供了依据。     

激光捕获显微切割结合定量PCR检测NES1 mRNA在胃癌中的表达及其甲基化状态

目的:探讨正常上皮细胞特异性-1基因(NES1)在正常胃组织及胃癌组织中的表达和受甲基化调控的影响。方法:利用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术分离胃癌患者活检组织中的癌细胞和正常上皮细胞,采用荧光定量PCR检测其中NES1 mRNA的表达,甲基化特异性PCR观察NES1基因外显子3 CpG岛甲基化状态。结果:荧光定量PCR结果显示,NES1 mRNA在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃上皮细胞(P＜0．05)。甲基化特异性PCR检测胃癌组织癌细胞中NES1外显子3 CpG岛甲基化状态发现,大部分肿瘤患者NES1外显子3 CpG岛均存在不同程度甲基化,其中完全甲基化7例(33．3%),不完全甲基化12例(57．14%);而正常细胞中存在不完全甲基化仅为1例(5%),其余19例均不存在甲基化(95%)。结论:激光显微切割结合荧光定量PCR技术可较精确地检测NES1在胃癌组织细胞和正常组织细胞中的表达。NES1在胃癌中表达降低,其表达降低与NES1基因外显子3甲基化有关。     

正常上皮特异性-1基因在胃癌中的表达及其临床意义

正常上皮细胞特异性-1（NES1）基因，又称人组织激肽释放酶10（KLK10）基因，是近年来新发现的一种抑癌基因，其编码的蛋白序列34%-42%与丝氨酸蛋白酶高度同源，在调控正常上皮细胞生长，分化等方面起一定作用，最近研究还发现，NES1基因与多种肿瘤的发生有关，其表达产物对肿瘤患者的早期诊断，病情监测，预后估计，疗效评价等具有重要作用。     

大肠癌基因治疗研究进展

大肠癌的基因治疗作为一种新的治疗手段,近年来倍受关注,其很多研究已进入临床阶段.大肠癌基因治疗的研究主要包括:自杀基因治疗、基因修复或置换治疗、反义基因治疗、免疫基因治疗及溶瘤病毒治疗等.此文就近期大肠癌的基因治疗研究结果和存在的问题作一综述.     

大便隐血与大肠疾病关系的研究

目的研究大便隐血与大肠疾病的关系,说明大便隐血检测在大肠疾病诊断中的作用。方法收集2012年3月～2014年3月份在上海市松江区九亭医院内镜室行肠镜检查患者粪便隐血实验结果 ,并与肠镜检查结果结合分析粪便隐血与大肠疾病的关系。结果大便隐血在大肠癌、异型增生、炎症性肠病、腺瘤、非腺瘤息肉、肠道炎症及无异常中的阳性率分别为83.33%、83.33%、66.67%、61.67%、39.22%、33.33%、6.16%。大肠癌大便隐血阳性率分别高于非腺瘤息肉、肠道炎症、正常肠黏膜（P〈0.05）。癌前病变（异型增生、腺瘤）大便隐血阳性率分别高于非腺瘤息肉、肠道炎症、正常肠黏膜（P〈0.05）。结论粪便隐血与大肠癌及癌前病变有重要的关系,因此大便隐血实验对于大肠癌及癌前病变的早期筛查有重要意义。     

NES1蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

正常上皮细胞特异性-1基因(NES1),又称人组织激肽释放酶10(kallikrein10,KLK10)[1],在调控正常上皮细胞生长、分化等方面起一定作用。激肽释放酶(kallikreins,KLK)存在于不同组织和生物液体中,参与多种疾病的发生、发展,具重要的生物学功能[2,3]。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,NES1基因作为一种在上皮细胞中表达的抑癌基因[4],其在胃癌发生、发展中的作用尚不清楚。本研究通过免疫组化的方法分析了NES1在正常胃组织和胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中的作用。材料与方法一、材料1.组织标本收集与制备:收集2005年5月～2006…     

重组杆状病毒载体介导大鼠螺旋神经节细胞基因转染的研究

目的探讨重组杆状病毒（baculovirus，Bac）作为内耳螺旋神经节细胞基因转染载体的可行性及其转染特点。方法应用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统制备携带绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）的杆状病毒载体（Bac—GFP），以不同感染复数（multiplicities of infection，MOI）的病毒和不同浓度的丁酸钠转染大鼠螺旋神经节细胞，通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞转染率和绿色荧光蛋白表达强度，并观察杆状病毒和丁酸钠对螺旋神经节细胞的毒性。结果杆状病毒可以高效转染螺旋神经节细胞，转染效率达77．69％。Bac—GFP转染率和表达强度随着MOI和丁酸钠浓度的提高而提高。GFP在转染后6h开始表达，第2天达到最高。重组杆状病毒MOI小于800以及丁酸钠终浓度小于或等于10mmol／L时，对螺旋神经节细胞没有明显细胞毒性。结论重组杆状病毒可以在体外高效安全转染内耳螺旋神经节细胞。     

重组杆状病毒载体介导新生大鼠耳蜗Corti器体外模型基因转染研究

目的建立新生大鼠耳蜗Corti器体外培养模型,探讨重组杆状病毒作为内耳基因转染载体的可行性及其转染特点。方法应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,建立新生大鼠耳蜗Corti器体外模型,加入携带报告基因的病毒悬液,观察外源基因表达情况。结果耳蜗Corti器体外培养48小时后,培养组织生长良好。Bac-GFP联合丁酸钠可以高效转染毛细胞和螺旋神经节细胞,同时并没有改变Corti器的正常结构。结论新生大鼠离体内耳组织转基因培养法是内耳基因治疗实验研究的一种可行方法。杆状病毒可以在体外高效、安全、快速的转染毛细胞和螺旋神经节细胞,有希望成为内耳基因治疗的新型载体。     

血管紧张素Ⅱ受体1在人胃癌细胞中的表达及其拮抗剂对胃癌荷瘤裸鼠生长的抑制作用

目的：检测血管紧张素Ⅱ受体1（AT1R）在人胃癌细胞株中的表达及其拮抗剂对人胃癌荷瘤裸鼠生长的抑制作用。方法：采用实时定量PCR和蛋白印迹分析法检测AT1R在胃癌细胞株中的表达。建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,分别以2mg/kg和5mg/kgTCV-116（AT1R拮抗剂）每日给荷瘤裸鼠灌胃,观察肿瘤体积的变化并绘制肿瘤生长曲线;以免疫组织化学染色观察胃癌裸鼠移植瘤的微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果：AT1R在人胃癌细胞株中有较高水平的表达。经TCV-116处理的胃癌荷瘤裸鼠移植瘤体积较对照组显著减小,且TCV-116处理组的MVD和VEGF表达水平也较对照组显著降低。结论：选择性AT1R拮抗剂对人胃癌裸鼠移植瘤的生长具抑制作用,其可能是通过抑制肿瘤血管生成的途径产生抑制作用;故阻断血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可能是治疗胃癌的一种新方法。     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的研究5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对人正常上皮特异-1基因（NES1）及人胃癌裸鼠移植瘤的作用,探讨其抗肿瘤效应及可能机制,寻求胃癌治疗的新途径。方法建立人胃癌移植瘤裸鼠模型,用5-aza-CdR处理裸鼠,观察移植瘤生长情况,并用MSP及免疫组织化学技术检测NES1基因的甲基化状态及蛋白表达情况。结果5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,用药组与对照组相比,其抑瘤率为57.44%,移植瘤体积有显著差异（P〈0.01）;5-aza-CdR作用后,可使NES1基因exon3去甲基化,且能使NES1蛋白表达增加。结论5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为它能使因甲基化而失活的抑癌基因NES1再转录,并诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。