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重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
将EcoR1和SalⅠ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)基因cDNA克隆片段与表达载体pGEX-5T重组后转化大肠杆菌,经筛选,增殖和IPTG诱导,阳性克隆SDS-PAGE结果证实表达一条特异42KDa区带,Western印记杂交证实该区带具MBP抗原特异性,免疫斑点杂交和ELISA检测表达产量占菌体可溶性蛋白含量6%,达到414.6mg/L菌液,将含可溶性MBP蛋白的菌液后SDS-PAGE分离纯化得重组MBP抗原,对新西兰兔进行背部皮下多点注射,5次免疫后以琼脂板免疫双扩法检测抗效价达1:16,并通过免疫斑点杂交和Western印亦杂交证实证抗体具抗MBP特异性。 相似文献
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采用聚合酶链反应(PCR),从人基因组DNA中扩增出nm23-H1(185bp)和nm23-H2(145bp)特异性DNA片段,与载体pGEM-3zf(+)平端连接,重组质粒分别转化宿主菌JM109,在含X-gal和IPTG的平板上直接筛选阳性克隆,限制性内切酶谱分析及PCR扩增鉴定,确定pGEM-H1和pGEM-H2重组体。为nm23基因与肿瘤转移研究打下基础。 相似文献
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采用定量逆转录多聚酶链反应(Q-RT-PCR)技术检测nm23-H1和nm23-H2mRNA在47例组织标本中的表达情况,发现nm23-H1和nm23-H2mRNA在颊癌原发灶、癌旁粘膜、正常颊粘膜、颌下腺、白斑、正常淋巴结和有转移的淋巴结中均有不同程度的表达。nm23-H1在肿瘤转移组颊癌原发灶中的表达低于无转移组(P<0.05),nm23-H2在颊癌有、无转移中的表达无差异(P>0.05);nm23-H1和nm23-H2表达与临床病理参数间均无关(P>0.05)。结果提示:nm23-H1mRNA表达下降与颊癌转移关系密切,而nm23-H2mRNA表达与颊癌转移无关;通过Q-RT-PCR检测nm23-H1mRNA的表达水平可为临床预测颊癌的转移提供有价值的指标。Q-RT-PCR技术的主要优点在于通过少量组织提取的总RNA即可检测nm23mRNA的表达。 相似文献
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目的为了进一步深入了解BDNF的生物作用,开展基因工程以及应用基础的研究,需要大量的BDNF.因此构建原核表达重组体就显得非常重要.方法从本室已构建的pGEMBF克隆中获取人BDNF全长编码片段与原核表达载体pGEX-5T连接,构成p5TBF重组体后,经转化大肠杆菌和IPTG诱导.结果该重组体经蛋白质含量测定,免疫狭缝杂交和ELISA测定,表明该菌体裂解液具有人BDNF抗原活性.结论p5TBF重组体在大肠杆菌中表达成功. 相似文献
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目的 了解含 β-神经生长因子 (β- NGF)基因的表达质粒 PSVCEP NGF- CAT在培养肌母细胞中的表达及 L ipofect AMINE阳离子脂质体介导的转染效率。方法 将表达质粒 PSVCEP NGF- CAT经 L ipofectAMINE转染至培养成的肌母细胞中 ,用免疫细胞化学方法检测基因在肌母细胞内的表达。结果 培养肌母细胞在转染 6小时吞噬脂质体最显著 ,转染 48小时后约 40 %的肌母细胞胞质内有β- NGF基因表达。结论 含β- NGF基因的表达质粒 PSVCEP NGF- CAT可以在培养肌母细胞中表达 ,脂质体转染的方法简便、有效 相似文献
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神经系统疾病患者血清和脑脊液髓鞘碱性蛋白及其抗体的ELISA定量研究 总被引:5,自引:0,他引:5
用简易的髓鞘碱性蛋白(MBP)及其抗体(Anti-MBP)酶联免疫吸附定量测定(ELISA)法对6组共337例神经系统疾病患者进行检测,其中脊髓压迫症(CMP)36例,多发性硬化(MS)33例,脑血管疾病(CVD)34例,中枢神经系统感染性疾病(ID)31例,癫痫(EP)161例和其他神经系统疾病(OND)42例。结果显示:CMP、MS.CVD、ID和EP5组血清MBP均值明显高于OND组(P<0.01),其中又以急性外伤所致脊柱骨折伴截瘫为主(33例)的CMP患者血清MBP值最高,与MS组比较P<0.05,与CVD、ID和EP组比较P<0.01。CVD患者CSFMBP均值也明显高于OND组(P<0.05)。本法检测6组血清和CSF的Anti-MBP含量差异不显著(P>0.05)。 相似文献