湖北钉螺线粒体基因组全序列测定研究

目的 测定并分析湖北钉螺（Oncomelania hupensis）线粒体基因组全序列。 方法 利用特异引物和通用引物分别扩增湖北钉螺线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）、细胞色素b（Cytb）、16SrRNA（16S）和细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ）基因片段,在此基础上利用长PCR技术扩增上述4个基因间的长片段,纯化克隆后采用引物步移法测序。 结果 湖北钉螺线粒体基因组全序列为15 182 bp（GenBank登记号为FJ997214）,为闭合环状分子,A+T含量为67.3％;包括13个蛋白基因、22个tRNA基因、2个RNA基因和一段72 bp的A+T富集区;蛋白质编码基因均以ATG为启动子,除呼吸链NADH脱氢酶的第一亚单位（ND1）基因以潜在的T作为终止密码子外,其余基因均以典型的TAA或TAG为终止子;基因重叠区有2处,分别为4 bp和7 bp;基因间隔区共21处合计145 bp,长度范围为1～30 bp;22个tRNA中,除2个tRNASer和tRNAGln、tRNAIle以外均能形成典型的二级结构。 结论 获得了湖北钉螺的线粒体基因组全序列。     

湖北钉螺空间遗传信息管理系统的设计与构建

目的探讨基于空间分析基础上的湖JLST螺群体遗传变异,构建湖北钉螺空间分布和遗传信息数据库及其管理系统,为相关研究、信息管理和开发利用提供先进的方法和手段。方法采集现场钉螺样本,以逸蚴法鉴定阴性钉螺。利用Microsoft SQL 2000建立采集点空间分布数据库、样本数据库和遗传信息数据库,用Visual Basic6．0建立相应管理系统。结果完成现场钉螺收集,初步建立了10个省73个采集点的数据库,676个记录的样本数据库和部分遗传信息数据库,管理系统实现添加、查询、删除、统计和数据导出导入等功能,界面清晰,操作简便。结论建立的湖北钉螺空间遗传信息管理系统对湖北钉螺空间分布和群体遗传研究具有一定的应用价值,但还需进一步补充和完善相关数据。     

湖北钉螺多态微卫星DNA位点筛选和特征初步分析

目的分离湖北钉螺的微卫星DNA序列,筛选多态的微卫星DNA位点并分析其特征。方法应用湖北钉螺基因组DNA的酶切片段与生物素标记的(AAT)17、(GA)25、(CCT)17、(CA)25等10个寡核苷酸探针杂交,富集、浓缩、克隆并测序,构建微卫星DNA库。挑选合适的微卫星DNA位点设计并合成引物,扩增钉螺样本经聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选多态性。结果获得湖北钉螺微卫星DNA序列205条,GenBank注册登记号GU204044～GU204248,其中完整重复序列74条,占36.10%;非完整重复序列102条,占49.76%;复合重复序列29条,占14.15%。设计合成的20对微卫星DNA位点引物中,经鉴定显示13个位点具有多态性。结论分离建立了湖北钉螺微卫星DNA序列库,为湖北钉螺群体遗传、种群溯源等相关研究提供了分子标志。