搞好"病原生物学"教学及促进学科发展的实践与体会

将“医学微生物学”和“人体寄生虫学”整合为“病原生物学”符合现代医学教育的取向。中国医科大学是将两个教研室从形式到实质性合并为“病原生物学”教研室，并且将两门课完全融合成一门课程和一套教师队伍进行教学的少数院校之一。本文总结了在这一新学科教学和促进学科发展中的经验和体会。     

保元汤加减对实验大鼠肺孢子虫作用的电镜观察

目的　探索中医药治疗卡氏肺孢子虫肺炎的途径。　方法　应用中药保元汤加减煎剂给实验大鼠灌胃 ,通过透射电镜观察其对实验大鼠肺内肺孢子虫的作用。　结果　实验组较对照组大鼠肺内肺孢子虫有明显改变。其中肺孢子虫胞浆内大量空泡形成 ;包囊壁明显破坏 ;虫体有溶解现象。　结论　保元汤加减煎剂 ,对实验大鼠体内的卡氏肺孢子虫具有抑制和杀灭作用。     

沈阳地区人体隐孢子虫感染的调查

隐孢子虫（Cryptos poridium）是一种世界分布的人兽共患肠道寄生原虫，是引起腹泻的重要病原体。人体隐孢子虫病（cryptosporidiosis,Cs）的绝大多数临床病例是由微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum，Cp）引起。免疫功能正常的人感染此虫后，可出现急性腹泻，多为自限性。但对于儿童、营养不良者、免疫缺陷的病人如艾滋病患者可引起霍乱样腹泻综合征，表现为致命的顽固性腹泻，成为加速其死亡的重要原因之一。国外已将隐孢子虫检测列为艾滋病患者的常规检查项目。近年来的研究表明，隐孢子虫病不仅在免疫机能低下的人群中常见，     

数字图像处理技术对隐孢子虫卵囊形态学参数的测定

目的 建立并分析小鼠隐孢子虫卵囊的形态学参数， 明确小鼠隐孢子虫卵囊的形态学变化特点。 方法 昆明株小鼠经地塞米松免疫抑制10 d后， 取粪便涂片、 改良抗酸染色法检测小鼠隐孢子虫卵囊。 应用摄像系统采集1 190个小鼠隐孢子虫卵囊的图像， 利用计算机数字图像分析系统测定卵囊的长径(L)、 横径(W)、 周长、 面积和等效直径。用SPSS数据处理软件（V11.0）分析测定各组数据， 计算其卵形指数。 结果 1 190个小鼠隐孢子虫卵囊长径均值为5.93 μm， 95%可信区间为3.31～8.51 μm； 卵囊横径的均值为4.96 μm， 95%可信区间为3.26～6.66 μm； 周长均值为18.03 μm； 面积的均值为16.08 μm2; 卵形指数(L/W)为1.19。 结论 利用计算机显微图像处理系统所获得的小鼠隐孢子虫卵囊形态学参数数据客观、 精确， 为量化及评价小鼠隐孢子虫卵囊的形态奠定了基础。     

表达肺孢子菌p55多表位串联基因腺病毒重组载体的构建

目的构建携带肺孢子菌p55多表位串联基因(p55TAG)的腺病毒重组载体,鉴定其在真核细胞HEK293中的表达情况。方法将人工合成的p55TAG目的片段与腺病毒载体(p HBAd-EF1-MCS-GFP)连接后转化到DH5α大肠杆菌感受态中,经Amp抗性筛选得到重组载体p HBAd-p55TAG,将重组载体与腺病毒骨架质粒p BHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)验证转染结果,收集包装成功的病毒进行PCR扩增,扩增产物测序验证,用Western blot检测病毒在感染细胞后的目的蛋白表达情况。结果构建的p HBAd-p55TAG腺病毒重组载体转染HEK293细胞后检测到绿色荧光蛋白表达,包装好的病毒PCR扩增产物测序结果与原始序列一致,Western blot检测结果显示在60 k Da处有成功表达目的条带。结论本研究成功构建了表达肺孢子菌p55多表位串联基因的腺病毒重组载体,并验证其能在真核细胞中有效表达。构建的载体为进一步研究抗肺孢子菌感染疫苗奠定了基础。     

激肽释放酶转基因大鼠模型的建立

目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型，通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7，5周龄大鼠超排效果最好，与其他周龄大鼠相比有显差异，P〈0.05；显微注射1538枚卵，移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中，12（12/31，38.7%）只怀孕，共产仔62只，经PCR检测获得6只阳性鼠，Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型，该模型是高血压病研究的理想动物模型。     

应力对大段骨缺损修复影响的实验兔模型探讨

目的 建立用于研究应力对大段骨缺损修复作用的实验兔动物模型.方法 选用20只健康成年大耳白兔,随机分成两组,在右侧肱骨中下段制造13 mm的大段骨缺损后植入泡沫碳化硅人工骨,实验组选用具有固定和持续轴向加压双重作用的镍钛记忆合金接骨器,对照组选用同种材料和规格的仅有固定作用的接骨器,术后常规护理,待取材观察.结果 20只实验兔中,7只在苏醒后当天,10只术后1～3 d,3只术后4～7 d,出现植入体从植入部位脱出游离至皮下现象.结论 用于研究应力对大段骨缺损修复作用的实验兔动物模型未成功建立,镍钛记忆合金接骨器对兔肱骨大段骨缺损处人工骨的固定和持续加载,在实验兔肱骨难以实现.     

microRNA与肿瘤的关系

miRNA是一类分布广泛的非编码小分子RNA，其长度约为22个核苷酸，它的功能是通过负调控基因的表达从而调节细胞的生理过程，但当其表达异常时可能引起疾病甚至肿瘤的形成。过去肿瘤的研究大多数都集中于对原癌基因和抑癌基因突变的研究上。目前，发现许多肿瘤的发生很可能是受miRNA的影响，miRNA也可以起到抑癌基因或原癌基因的作用。miRNA表达的异常可能与其染色体脆性位点存在几率较高有关。本文对miRNA的结构、功能及其与肿瘤发生关系等方面进行了综述。     

屏障系统动物室单向流与乱流空气净化方式的细菌比较分析

目的探讨屏障系统动物室控制微生物污染，维持洁净的方法。方法将屏障系统动物室的乱流空气净化方式进行改进，在乱流室内增加能改变气流方式的无动力的设施，使室内气流改变为单向流动的方式。结果乱流动物室的沉降菌平均为47个，浮游菌平均为154.5个；单向气流动物室内的沉降菌平均为1.5个，浮游菌平均为7个。结论单向流优于乱流。这将为今后我国制定新的实验动物屏障系统环境标准提供技术数据。     

起草“关于善待实验动物的指导性意见”草案溯源的探讨

科技部以“国科发财字[2006]398号”文发布了《关于善待实验动物的指导性意见》。参与该文件起草的作者就相关情况进行初步溯源探讨。