灰树花多糖对四氯化碳致急性肝损伤的保护作用

目的探讨灰树花多糖(Polysaccharide of Grifola Frondosa,PGF)对四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)急性肝损伤的保护作用。方法 72只昆明种小鼠随机分为8组:正常对照组、CCl4损伤组、PGF保护组(4.5、9、18、36、72、144mg/kg),每组9只。CCl4腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型。观察肝组织病理学改变;测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,肝组织匀浆测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果与CCl4损伤组比较,PGF保护组肝组织病理改变明显减轻;血清ALT、AST活性明显降低(P0.05);肝组织匀浆SOD含量明显升高(P0.05);MDA含量明显降低(P0.05);凋亡相关蛋白bcl-2的表达量明显增加、bax的表达量明显降低。综合各指标以72mg/kg保护组效果最佳。结论PGF对CCl4急性肝损伤有明显保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化,清除自由基,调节凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达有关。     

强光胁迫对茅苍术生长、生理生化及关键酶基因表达的影响

目的:探究不同梯度的强光胁迫对茅苍术生长、生理生化及关键酶基因表达的影响,为规范化栽培茅苍术提供科学依据。方法:以两年生茅苍术种苗为实验材料,杨树林下(透光率18.26%~36.04%)作为对照组(ck),采用不同密度的遮荫网于7月下旬模拟不同程度(51.10%,80.73%,100%)的强光进行胁迫。观察茅苍术生长状态,于第0,5,10,15,20天测定茅苍术叶片的生理生化指标丙二醛(MDA)含量、细胞膜透性、脯氨酸(Pro)含量、抗氧化酶活性及叶绿素含量。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术测定强光胁迫后茅苍术叶片中3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A,HMGR)和法呢基焦磷酸合酶基因(farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)的相对表达量。结果:经过强光胁迫后,茅苍术叶片颜色由深绿色变为浅绿、黄绿色,叶片灼伤越来越严重;MDA含量、电导率及Pro含量随光强的增加总体呈上升趋势;过氧化物酶(POD),超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)均呈先升高再降低的趋势;叶绿素含量随光强的增加呈下降趋势;茅苍术叶片中HMGR相对表达量随光强的增加呈下降趋势而FPPS表达量呈先升后降的趋势。结论:实验结果表明在一定的强光胁迫下,茅苍术可通过提高抗氧化酶活性及调节渗透压物质含量以缓解强光胁迫的抑制作用;过高的强光胁迫则会导致茅苍术代谢机制失调,严重抑制植株生长。     

固化光源对牙本质粘结强度的影响

目的：研究两种固化光源对牙本质粘结的微拉伸强度的影响。方法：选取因正畸需要拔除的前磨牙20颗,随机分成4组。去除殆面釉质,暴露平的牙本质表面,分别使用卤素光固化灯和发光二极管光固化灯固化粘结剂和复合树脂,形成3mm高的树脂冠：A组：卤素光固化灯固化粘结剂20s,卤素光固化灯固化树脂40s;B组：卤素光固化灯固化粘结剂20s,发光二极管光固化灯固化树脂30s;C组：发光二极管光固化灯固化粘结剂20s,发光二极管光固化灯固化树脂30s;D组：发光二极管光固化灯固化粘结剂20S,卤素光固化灯固化树脂40s。所有实验牙置于（37±1）℃的生理盐水中24h后,用硬组织切片机将其切成粘结面积约1．0mm×1．0mm的条形试件,用以测试牙本质微拉伸粘结强度。在扫描电镜下观察样本的断裂界面。结果：固化粘结剂的光源对牙本质微拉伸粘结强度的影响有显著的统计学意义（P〈0．05）。4组中微拉伸粘结强度最大值为（29．55±4．39）MPa,出现在C组。扫描电镜下观察测试样本的断裂多数为粘结界面破坏。结论：固化光源对牙本质粘结的微拉伸强度存在影响,牙本质的粘结强度主要与固化粘结剂的光源有关。本实验显示使用发光二极管光固化灯固化粘结剂20s,发光二极管光固化灯固化树脂30s时牙本质的粘结强度最好。     

体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元NMDAR1亚基表达的发育性变化

目的 探讨体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元NMDAR1（NR1）亚基表达的发育性变化。 方法 利用体外原代培养Wistar孕14～15d胎鼠大脑皮层神经元,采用免疫荧光法鉴定神经元的纯度和NR1亚基在神经元上的定位,采用流式细胞术和免疫印迹法（Western  blot）检测不同培养时间神经元NR1亚基的表达情况 结果 体外原代培养的胎鼠大脑皮层神经元纯度均达到90%以上,免疫荧光标记显示NR1亚基主要分布在神经元胞膜及树突干膜上,流式细胞仪检测培养1、2、3、4、6、9、12d神经元NR1亚基平均荧光强度分别为4.57±0.99、8.18±1.22、13.67±1.99、20.33±1.03、26.30±2.88、31.71±2.47、28.63±1.40,Western blot显示细胞膜蛋白中NR1亚基在1～2d表达微弱,3～6d表达逐渐增高,6d以后保持稳定。  结论 体外原代培养的胎鼠大脑皮层神经元NR1亚基有发育性变化,这种变化与神经元的成熟度有关。     

电子签名法实施后电子病历的证据相关问题研究

结合我国电子签名法的内容对电子病历的法律地位、证据属性等相关法律问题进行了讨论,并从证据"三性"原则研究分析了电子病历证据的可采性,并对医疗纠纷中的电子病历的证据问题进行评价。     

灰树花多糖对四氯化碳肝L-02细胞损伤的保护作用

目的 探讨灰树花多糖（PGF）对四氯化碳诱导的肝L-02细胞损伤的保护作用。 方法 培养人肝L-02细胞,建立CCl4肝细胞损伤模型,分组实验：正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度的PGF（50 、100、200和400μg/mL）保护组。采用形态学观察,MTT检测,生化分析培养液中ALT、AST活性及细胞内SOD活性、MDA含量,流式细胞仪检测线粒体膜电位、荧光探针观测胞内Ca2+浓度;Western blot检测细胞bcl-2、bax蛋白表达。结果与CCl4损伤组相比,各PGF保护组细胞活力明显增强,上清液中ALT、AST活性明显降低; 细胞内SOD明显升高、Ca2+浓度MDA含量降低,细胞bcl-2的表达上调、 bax的表达下调。以100μg/mL浓度保护效果最佳。结论 PGF对CCl4诱导的肝L-02细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制肝细胞内Ca2+浓度的升高、改变凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达水平,有效地防止线粒体膜电位的下降、减少细胞凋亡有关。     

四氯化碳药物性肝损伤体外模型的改进

目的:建立一个较理想的CCl4药物性肝损伤体外模型.方法:分别采用传统方法和改进方法配制CCl4损伤液并诱导人肝HepG2细胞损伤,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,生化法检测上清液中ALT水平并采用MTT法测定细胞活性.结果:改进方法的CCl4诱导损伤效果明显优于传统方法,随着CCl4损伤液浓度的提高,上清液中ALT水平明显升高,而细胞活性显著降低,70％浓度CCl4损伤液诱导损伤4h可获得最佳损伤效果.结论:利用改进方法可在体外实验中建立较理想的CCl4药物性肝损伤模型,此模型可为进一步的体外实验研究奠定基础.     

绞股蓝皂苷对体外培养神经前体细胞增殖的影响

目的 探讨不同浓度绞股蓝皂苷(GPs)对体外培养的神经前体细胞(NPCs)增殖能力的影响.方法 从孕14d大鼠胚胎端脑分离NPCs,体外贴壁培养7d传代.传代第1代细胞培养3d,免疫荧光法鉴定NPCs纯度后进行分组实验.加不同浓度GPs(0、25、50、100、200、400μg/mL)作用48h后再次鉴定NPCs纯度,采用MTT法检测细胞活力、细胞计数绘制生长曲线、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖能力、Western blot法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)表迭情况.结果 传代第1代培养3d的NPCs纯度达97%,GPs作用后不影响NPCs纯度,可使细胞活性增强,生长速度加快,BrdU阳性率增高,PCNA表达水平上调.结论 GPs可通过提高PCNA的表达量,促进体外培养的NPCs增殖,100μg/mL为GPs最佳作用浓度.     

蒲公英质量标准提升及不同产地药用蒲公英质量评价

目的:提升蒲公英药材质量标准,并评价不同产地药用蒲公英药材的质量。方法:在2020年版《中国药典》(一部)"蒲公英"项下规定的基础上,增加水溶性浸出物(热浸法)、醇溶性浸出物(热浸法)、总黄酮、绿原酸、咖啡酸、菊苣酸和异绿原酸A的含量测定方法,同时以8个产地42批药用蒲公英药材为对象建立高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并基于上述结果进行主成分分析。结果:42批药用蒲公英药材的醇溶性浸出物含量为15.30%~30.40%,水溶性浸出物含量为27.59%~38.96%。总黄酮(紫外-可见分光光度法)和绿原酸、咖啡酸、菊苣酸、异绿原酸A(HPLC法)的质量浓度分别在0.016~0.096、0.003~0.196、0.004~0.117、0.025~1.578、0.002~0.152 mg/mL范围内线性关系良好(R~2均大于0.9990);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.00%(n=6);平均加样回收率为98.97%~103.53%,RSD为1.19%~1.58%。42批药用蒲公英药材中总黄酮、绿原酸、咖啡酸、菊苣酸、异绿原酸A的含量分别为0.734%~3.700%、0.004%~0.123%、0.006%~0.087%、0.073%~1.499%、0.005%~0.109%。42批药用蒲公英样品的HPLC指纹图谱共有峰相对保留时间的RSD为0~0.94%,相对峰面积的RSD为0~125.57%,其中39批样品相似度大于0.900。主成分分析结果显示,陕西产药用蒲公英药材的综合质量较优,河北产药材次之。结论:拟定蒲公英药材中醇溶性浸出物、水溶性浸出物、总黄酮、绿原酸、咖啡酸、菊苣酸、异绿原酸A的含量分别不得低于17.0%、27.0%、1.383%、0.024%、0.021%、0.450%、0.021%。陕西产药用蒲公英药材除咖啡酸含量相对较低外,其余各项指标均较优;河北产药材的咖啡酸含量高于陕西产药材,其他各项指标略低于陕西产药材;其余产地的药用蒲公英药材综合质量相对较差,且同一产地不同批次间的药材质量不稳定。