肿瘤坏死因子受体2编码基因重组质粒的构建及意义

目的构建真核表达质粒pcDNA6.0-TNFR2~196MET和pcDNA6.0-TNFR2~196ARG。方法人工合成TNFR2~196MET目的片段,与pMD18-Tsimple载体连接形成克隆载体,再通过设计突变引物,PCR定点突变扩增出含有突变位点的质粒,转化到肠埃希菌感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增。抽提质粒进行测序鉴定,得到pMD18-Tsimple-TNFR2196ARG。双酶切pMD18-Tsimple-TN-FR2196MET、pMD18-Tsimple-TNFR2196ARG及pcDNA6.0,将TNFR2196MET、TNFR2196ARG插入pcDNA6.0线性质粒,即构建成pcDNA6.0-TNFR2196MET和pcDNA6.0-TNFR2196ARG真核表达质粒,转化到Ecoli感受态中,筛选阳性克隆行菌液PCR和双酶切及测序鉴定。结果酶切鉴定和测序分析验证TNFR2基因196MET和196ARG表达载体构建成功。结论成功构建表达载体为下一步心血管疾病研究奠定了实验基础。     

农村地区ST段抬高性心肌梗死患者男女之间长期预后观察

目的 观察和分析性别对农村人口ST段抬高性心肌梗死(STEMI)长期预后的影响.方法 1997年1月至2003年12月前瞻性观察全部STEMI住院患者预后,观察对象143例,年龄27～83( 56.3±13.3)岁,其中男115例(80.4％,115/143),年龄27 ～83(52.3±12.6)岁,女28例(19.6％,28/143),年龄30～ 82(62.8±11.7)岁.住院期间和出院后逐年随访登记至截止时间.观察心律失常、心力衰竭、心源性休克、用药是否规律及死亡.结果 医院内病死率:男性8.70％(10/115),女性25.00％ (7/28),总体病死率11.89％(17/143).在STEMI后长期随访(6～13年)中,病死率男性33.04％(38/1 15),女性60.71％ (17/28),总体病死率38.46％(55/143) (95.0％ CI 21.3 ～ 67.4,P=0.001).病死率亚组分析:年龄＜60岁,男性24.32％(18/74),女性25.00％(1/4);年龄≥60岁,男性48.78％(20/41),女性66.67％(1 6/24).结论 STEMI后长期随访总体病死率女性高于男性.     

荔枝核香薰疗法对慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠海马及血清5-HT、DA的干预作用

目的 探讨荔枝核香薰疗法对慢性不可预见性应激(CUMS)抑郁模型大鼠海马及血清5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)的干预作用。方法 以孤养结合CUMS抑郁模型大鼠作为研究对象,在实验第7、14、21、28天记录每组大鼠的体重增长数、糖水消耗量,在实验第35天治疗结束后,检测各组大鼠海马及血清中兴奋性神经递质5-HT、DA水平。结果 (1)体重增长：第14～21天时,与空白组比较,模型组、百忧解组、百忧解辅香薰疗法组大鼠体重增长数均减少(P<0.01)。第28～35天,与空白组比较,模型组大鼠体重增长数减少(P>0.05);与模型组比较,百忧解组、百忧解辅香薰疗法组大鼠体重增长数均增加(P>0.05);与百忧解组比较,百忧解辅香薰疗法组大鼠体重增长数增加(P<0.01)。(2)糖水消耗量变化：第14、21天,与空白组比较,模型组、百忧解组、百忧解辅香薰疗法组大鼠糖水消耗量均减少(P<0.01)。第35天,与空白组比较,模型组大鼠糖水消耗量减少(P<0.01),百忧解组大鼠糖水消耗量减少(P<0.05),百忧解辅香薰疗法组大鼠糖水消耗量减少(P&...     

邯郸地区小儿肺炎支原体感染情况

肺炎支原体是介于细菌和病毒之间的能独立存活的无细胞壁的病原微生物,是小儿获得性肺炎的常见病原体之一.有文献报道近年来肺炎支原体的感染率逐年上升[1],其阳性率与季节有关[2-4].肺炎支原体严重危害儿童的健康,为此笔者收集2011年5月至2012年4月来本院儿科及病房就诊的呼吸道感染儿童进行分析,现报道如下.     

吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及机制

目的研究吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法将36只SD雄性大鼠随机平均分为6组:对照组、糖尿病组、钙化组、糖尿病+钙化组、钙化+吡格列酮组、糖尿病+钙化+吡格列酮组;建立大鼠血管钙化模型(维生素D3+华法林)和糖尿病模型(链尿佐菌素);并对血管组织进行Von Kossa染色、钙含量和碱性磷酸酶活性检测,qRT-PCR检测mRNA表达,免疫组织化学法检测骨保护素蛋白表达。结果钙化组血管平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积;糖尿病+钙化组较糖尿病组和钙化组血管组织钙含量、碱性磷酸酶活性分别升高3.63倍、1.35倍和3.69倍、1.30倍(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达降低(P<0.05);糖尿病+钙化+吡格列酮组较糖尿病+钙化组钙含量、碱性磷酸酶活性分别下调13.70%、18.04%(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达升高(P<0.05)。结论吡格列酮可以减轻血管钙化程度并上调骨保护素mRNA含量及蛋白表达,骨保护素可能是抑制血管钙化主要因素之一。     

miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF—BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞（VSMC）的作用及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR—NC组、PDGF—BB＋miR-145组及PDGF—BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT—PCR方法检测PCNA、c—Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1／2和P—ERK1／2的表达、JNK和P—JNK的表达以及p38MAPK和P—p38MAPK的表达。结果miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VsMc增殖相关基因PCNA、c—Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF—BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

大鼠microRNA-145慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的构建针对Rno-miR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用。方法人工合成含有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况;实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组);采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22αmRNA表达水平的影响。结果成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL。倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72 h时感染率最高。实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低;miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加。结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC。感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化。     

miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF-BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)的作用及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR-NC组、PDGF-BB+miR-145组及PDGF-BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT-PCR方法检测PCNA、c-Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达、JNK和p-JNK的表达以及p38MAPK和p-p38MAPK的表达。结果 miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF-BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论 miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

重症肺炎患儿血清miR-221和miR-127的表达水平及临床意义

目的:分析重症肺炎患儿血清微小RNA-221(miR-221)和微小RNA-127(miR-127)的表达及其临床意义。方法:前瞻性选取2017年1月至2019年12月期间于河北省邯郸市中心医院就诊的重症肺炎患儿151例作为重症肺炎组,根据在院期间患儿预后分为死亡组(16例)和存活组(135例),另选取同期在本院进行健...