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1.
目的:建立新的土拨鼠α干扰素(IFN-α)基因分型方法,分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepati-tis virus,WHV)感染的土拨鼠肝细胞中不同型别的IFN-α基因表达谱及其意义。方法:利用已知序列和基因型的土拨鼠IFN-α基因克隆质粒,建立基于土拨鼠IFN-α基因序列的限制性片段长度多态性的土拨鼠IFN-α基因分型方法。PolyIC体外刺激正常土拨鼠外周血单个核细胞(PBMC),调查正常土拨鼠PBMC受PolyIC刺激后IFN-α基因的表达谱。提取急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝组织mRNA,RT-PCR扩增土拨鼠IFN-α基因,分子克隆后调查急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因表达谱。结果:建立了土拨鼠IFN-α基因限制性片段长度多态性分型方法。急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因的表达谱明显不同于正常动物的表达谱,假基因表达所占比例大。结论:新建立的土拨鼠IFN-α基因分型方法可用于分析土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱。 相似文献
2.
目的了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制。方法HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100U/ml、400U/ml、800U/ml and 1200U/ml)刺激,10h后提取细胞总RNA,RT-PCR和实时定量RT-PCR检测HuH7细胞内APOBEC3G的mRNA水平变化,Western blot分析APOBEC3G蛋白水平的表达;分别构建不同长度的含有IRF-E(IFN regulatory factor element)位点的APOBEC3G起始密码上游序列报告质粒、不含IRF-E和IRF-E位点突变的虫荧光素酶报告质粒,报告基因分析IFN-α刺激后APOBEC3G起始密码上游IPF-E位点对APOBEC3G表达的影响。结果IFN-α上调HuH7细胞APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量依赖的效应。序列分析发现APOBEC3G起始密码上游的-298~-283和-57~-47位碱基分别存在IRF-E和ISRE(IFN stimulated re- sponse element)序列。报告基因分析结果显示,干扰素使含有IRF-E序列的APOBEC3G启动子报告质粒的虫荧光素酶的活性增加6~8倍,而不含IRF-E序列和IRF-E位点突变的报告质粒的虫荧光素酶活性在干扰素刺激后几乎没有变化。结论IFN-α可通过IRF-E位点上调APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,从而发挥抗病毒效应。 相似文献
3.
目的构建人鸟苷结合蛋白1(hGBP-1)真核表达质粒,观察hGBP-1体外对柯萨奇病毒B3(CVB3)和乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用。方法长链RT-PCR扩增全长hGBP-1编码区基因,克隆到pCR2.1TA克隆载体,再亚克隆到pcDNA3.1(-)真核表达载体。体外转染HepG2细胞和Hela细胞,Western blot检测hGBP-1的表达。然后分别观察转染细胞中hGBP-1对HBV体外复制子pHBV1.3和CVB3的抑制作用。ELISA检测共转染HepG2细胞培养L清HBsAg、HBeAg水平;Southern blot检测细胞HBVDNA复制中间体。TCID50试验检测Hela细胞培养物中CVB3感染量。结果成功构建hGBP-1真核表达质粒,能在HepG2细胞和HeLa细胞进行高效表达。该质粒与pHBV1.3共转染HepG2细胞,不能抑制HBV复制,HBsAg、HBeAg及HBV DNA复制中间体水平与对照相比都无明显变化。转染质粒在HeLa细胞上对CVB3复制有明显的抑制作用,CVB3感染量显著降低,尤其在低剂量病毒攻击时能完全抑制CVB3复制。结论hGBP-1可能在IFN介导的抗CVB3中起重要作用,但不能抑制HBV的复制。 相似文献
4.
目的:探讨人性化护理在急诊患者护理工作中的应用效果。方法选取我院2011年5~2013年5月于门诊接受护理的急诊患者200例,将患者随机分为观察组和对照组各100例,对对照组进行常规护理,对观察组给予人性化服务护理措施的方法,在护理结束后发放问卷进行调查,比较两组患者的护理质量以及满意程度。结果观察组的生活质量各项指标都高于对照组,差异具有统计学意义(<0.05)。观察组在护理的满意情况方面也好于对照组,差异具有统计学意义(<0.05)。结论人性化护理在急诊患者护理工作中的应用效果有更好的效果,并且能够提高患者的满意度,值得推广。 相似文献
6.
7.
目的建立喜马拉雅旱獭活体肝穿刺方法。方法动物经盐酸氯胺酮(45mg/kg)肌肉注射麻醉后,活检穿刺枪于动物右侧上腋中线第3、4肋间,距离胸骨剑突下方1.5cm,肝实音区进针,快速采集肝组织。对20只旱獭施行了肝穿刺,间隔15d穿刺1次,共80次。结果80次组织穿刺取得组织72份,穿刺成功率90%。HE染色证实72例穿刺组织均为肝组织,其中70例穿刺组织在镜下可见至少3个门管区。因肝穿刺导致的旱獭死亡2例,死亡率10%。结论该法操作简便,定位准确,可间隔重复采集肝组织,适用于旱獭肝组织病理学研究。 相似文献
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9.
10.
肿瘤发生过程中细胞增多的原因除了细胞过度增殖外 ,还与细胞死亡相对不足有关。近年来 ,caspase家族在细胞凋亡中的作用越来越受到重视 ,TNF浕与细胞表面的受体结合后 ,受体的胞浆内部分形成三聚体 ,通过其死亡域与TRADD结合 ,由后者再与FADD蛋白结合并进一步激活启动性caspase导致细胞凋亡。因此 ,我们检测了HCC中TRADD的表达并探讨其与细胞凋亡的关系。1 材料与方法1 1 标本选用我院 1 996年~ 1 997年外科手术切除肝细胞癌标本 39例及癌旁非癌肝组织 8例 ,其中男性 34例 ,女性 5例 ;年龄 2 4~ 71… 相似文献