大鼠原位肾移植模型肾静脉吻合方法的改良

大鼠肾移植动物模型是免疫和移植相关研究的重要实验工具．模型建立需要熟练的显微外科技术。建立模型的难点就是要在最短的时间内重建供肾的血液循环。在此过程中，肾动脉的吻合相对容易，而由于肾静脉壁菲薄，吻合时术者难以分清其前后壁，易造成血管扭曲、皱褶、吻合口瓶颈样狭窄，且耗时较长，故肾静脉的吻合又是供肾循环建立的难点。我们应用橡胶手套自制内支撑物，协助肾静脉的吻合．效果良好，报告如下。     

儿童类风湿关节炎高贡献率易感基因的研究

目的通过对小儿类风湿关节炎全基因组基因拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的研究,为该病易感基因筛选和发病机制研究提供理论基础。方法选取小儿类风湿关节炎患者(Juvenile rheumatoid arthritis,JRA)20例作为患病组,随机从体检中心选取无类风湿关节炎患病史健康儿童20例作为健康对照组。采用测序仪分别对类风湿关节炎患病组和健康组的DNA-pool进行全基因组重测序,用生物信息学软件对测序数据进行分析。结果我们采用CNVnator软件对患病组和健康组的测序数据进行检测,发现CNV位点分别为7479个和5201个。通过生物信息学分析筛选,患病组与健康组比较发现有825个CNVs位点,其中有192个位于内含子区域,有93个位于外显子区域,19个位于上游位置,25个位于下游位置。结论本研究揭示了儿童期类风湿关节炎患者的基因组拷贝数变异的变化,并发现了编码区的KIR3DL1、CD247、PPIP5K1、MIOX、ANK3、HK3基因可能为类风湿关节炎的易感基因。     

ERβ基因敲除小鼠的繁殖、鉴定及检测

目的繁殖和鉴定出足够数量的ERβ基因敲除雌性小鼠,建立ERβ基因敲除雌性小鼠骨质疏松性骨折实验动物模型基础。方法将引进的3对ERβ基因敲除小鼠饲养于屏障环境中,按遗传学规则进行繁殖3月后,引进2月龄遗传背景为野生型C57BL/6J种系雌鼠14只与纯合子雄性小鼠按2:1配对合笼扩增雌性杂合子小鼠再行分组繁殖,1月后获得较多数量的小鼠后,提取小鼠尾部组织DNA进行聚合酶链式反应(PCR)检测种系基因型,选取10只4月龄ERβ基因敲除纯合子雌性小鼠(βERKO)和10只野生型雌性小鼠(Sham)用MicroCT检测并比较胫骨近端骨小梁结构参数值,进行统计学分析。结果至分组开始繁殖第2个月,计有340只小鼠育出,经鉴定,ERβ+/+小鼠占23.5%、ERβ+/-小鼠占48.2%,ERβ-/-小鼠占28.3%、其中雌性54只,符合研究需要的动物数量较前5月增加近4倍,经过microCT检测4月龄的子代ERβ基因敲除雌性小鼠(βERKO)比较野生型雌性小鼠(Sham)骨小梁矿物质含量的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究引进遗传背景为野生型C57BL/6J种系雌鼠与纯合子雄性小鼠配对,是在短期内成功地大量繁育足...     

代谢组学在糖尿病肾病患者诊断中的应用

目的建立糖尿病肾病(DN)患者血清代谢物特征谱图。方法收集108例血清标本,其中DN(1～4期)患者80例、健康对照者28例。应用基于核磁共振(1H NMR)的代谢组学方法,通过CMPG波谱获取数据,并结合PCA和PLS-DA模式识别分析法对数据进一步分析处理。结果成功建立DN代谢物特征谱图,血清1H CPMG谱图主要峰值差异集中在0.5～4.5 ppm区域。超过15种主要代谢物可被1H NMR谱图识别,与健康对照者相比,DN患者血清中乳酸水平明显升高,脂质、葡萄糖、胆碱、磷酸胆碱、甘油磷酸胆碱、甜菜碱、牛磺酸和鲨肌醇水平明显下降。通过此种方法可明显区分DN(1～4期)患者与健康对照者。结论基于NMR的代谢组学技术结合模式识别分析方法可有效检测DN患者血清代谢物特征谱图的改变,有望成为诊断和分级的新方法。     

优化推荐术式建立大鼠肾移植动物模型

目的:建立稳定的大鼠肾移植动物模型,优化受推荐的大鼠肾移植术式.方法:选用近交系lewis大鼠作供体、受体,供体左侧肾脏在灌注后,原位移植到受体左肾窝,采用显微外科技术端端吻合肾动脉、肾静脉建立供肾血液循环;采用输尿管端端吻合重建尿路.结果:模型成功率82%,动脉吻合时间(15±2)min,肾静脉吻合时间(17±2)min,供肾缺血时间小于40 min.结论:该法建立的大鼠肾移植模型稳定,手术技巧确实可靠,简单实用.     

具有靶向作用的人类胰岛素原表达载体的构建与鉴定

目的构建能够靶向作用于大鼠胰岛细胞的绿色荧光蛋白及人类胰岛素原表达载体,为糖尿病的特异性基因治疗奠定基础。方法采用PCR法从SD大鼠全血基因组中扩增大鼠胰岛素I启动子（RIP）片段,将其克隆至pIRES2-EGFP质粒载体的启动子位点,用重叠延伸PCR法从人类全血基因组DNA扩增获得人类胰岛素原基因片段,插入pIRES2-EGFP质粒载体的多克隆位点,构建大鼠胰岛素I启动子驱动的人类胰岛素原及绿色荧光蛋白表达载体。结果构建的RIP-人类胰岛素原及绿色荧光蛋白表达载体经酶切及测序结果均正确。结论构建了受大鼠胰岛素I启动子驱动的人类胰岛素原及EGFP表达载体,为开展糖尿病的特异性基因治疗奠定了基础。     

福辛普利对糖尿病肾病小鼠基因表达的影响

目的应用基因芯片技术研究福辛普利对糖尿病肾病（DN）小鼠肾脏基因表达谱的影响。方法分别检测福辛普利治疗组、未经治疗DN组、正常组小鼠肾脏基因的差异表达变化,筛选出差异表达基因,用生物信息学对检测结果进行分析,应用半定量RT-PCR验证差异表达基因。结果两张芯片相比,福辛普利治疗后糖尿病小鼠肾脏发生显著性差异表达变化的基因共有60个。差异表达基因主要涉及物质代谢、炎症与免疫反应、转录等。结论福辛普利可通过多种途径在基因水平上起到对DN的保护作用。     

黄芪对糖尿病小鼠肾脏基因表达谱的影响

目的:应用基因芯片技术研究黄芪对糖尿病肾病小鼠肾脏基因表达谱的影响。方法:分别检测黄芪治疗组、未经治疗糖尿病肾病组、正常组小鼠肾脏基因的差异表达变化,筛选出差异表达基因,用生物信息学对检测结果进行分析,应用半定量RT-PCR验证差异表达基因。结果:2张芯片相比,经黄芪治疗后糖尿病小鼠肾脏发生显著性差异表达变化的基因共有88个基因同时发生改变,其中81个表现为相反方向的改变,7个表现为相同方向的改变。差异表达基因主要涉及的功能有:物质代谢、炎症与免疫反应、信号转导等。结论:黄芪可通过多种途径在基因水平上起到对糖尿病肾病的保护作用,对物质代谢相关基因影响更为明显。     

罗格列酮的降压作用及对水、电解质平衡的影响

目的 研究罗格列酮(PPARγ激动剂)对正常大鼠的降压作用与水、电解质的改变,并初步探讨两者间的联系.方法 正常SD ♂大鼠18只,随机分为两组,用药前测定血压、尿量、体重、24 h尿钾、尿钠,罗格列酮组ig马来酸罗格列酮40 mg·kg-1·d-1,对照组ig等量生理盐水,用药6 d后于第7天复测上述指标,并测定血钾、血钠、血氯.结果 用药后罗格列酮组血压较空白对照组血压下降14.1 mmHg(P=0.003),用药后较用药前血压下降13.1 mmHg(P=0.011);较空白组血钾有所降低,但差别无统计学意义,血钠、血氯浓度比较差别亦无统计学意义.结论 大剂量罗格列酮用药6 d可使正常大鼠血压下降,但对血钾、钠、氯浓度、24 h尿钾、尿钠的含量影响不大.     

不同强度血液滤过对不同严重程度脓毒症猪的影响

目的研究不同强度的血液滤过处方对不同严重程度脓毒症猪的影响。方法动物随机分成2组,低剂量组(A组,n=12)为内毒素E.colio111:B4按照18.5μg/kg静脉注射,高剂量组(B组,n=12)为在第1次给药后的第6小时按照同样的剂量和速度重复静脉注射1次内毒素。A组和B组各随机等分成3个亚组,其中A1、B1组为对照组,A2、B2组为低强度CVVH组(24 h Kt/V=1.12),A3、B3组为HVHF组(24 h Kt/V=2.25),各组超滤平衡为0。监测动物生命体征,测定不同时点血浆细胞因子水平如IL-6、TNF-α和IL-10以及评价其各组动物的生存率。结果各治疗组动物存活时间明显长于对照组,但治疗组间动物存活时间差异无统计学意义。不同强度的血液滤过治疗后,脓毒症猪血浆细胞因子水平并未在各个观察时间点得到抑制,脓毒症较重的动物细胞因子水平更高,这种趋势没有被血液滤过治疗改变。结论 CVVH能够有效延长脓毒症动物的生存时间,HVHF没有比CVVH更为优越。