激活素A高表达对ActA/Smads通路基础活化水平的影响

目的探讨激活素(Act)A细胞内高表达对Act A/Smads通路基础活化水平的影响。方法以ActβA重组载体(Act A-p IRES2-EGFP)和空载体(p IRES2-EGFP)稳定转染的PC12细胞为阳性和阴性转染组,正常PC12细胞为对照,利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法检测3组细胞内Act A、Smad3和磷酸化Smad3在转录及蛋白水平的表达,激光共聚焦观察Smad4的质核分布情况。结果与阴性转染组相比,阳性转染组Act A mRNA及蛋白表达分别提高4.5和1倍,Smad3总蛋白及磷酸化蛋白表达分别提高了36.4%和86.9%,Smad4蛋白在阳性转染组细胞核内分布增加。结论 Act A内源性高表达可提高PC12细胞内Act A/Smads通路的基础活化水平。     

Smads mRNA在神经元样细胞氧糖剥夺中的表达变化

目的探讨Smads mRNA在神经元样PC12细胞氧糖剥夺中的表达变化。方法鼠神经生长因子（NGF,50ng/ml）诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞的神经元样转化,微管相关蛋白（Microtubule-associated protein 2,MAP2）染色,共聚焦显微镜验证其神经元特性。利用连二亚硫酸钠（Na2S2O4,1mmol/L）构建氧糖剥夺模型（oxygen-glucosedeprivation,OGD）,模拟神经细胞缺血性损伤。实时定量RT-PCR检测神经元样细胞OGD 0,3和6h后Smad2、4、7基因mRNA的表达变化。结果成功诱导神经元样PC12细胞。OGD处理3h后细胞Smad2、4、7基因mRNA的表达与OGD0h组相比明显升高,分别超过17.7%,413.4%,75.2%。OGD6h,Smad2、7基因mRNA的表达较OGD0h组下调80.9%,57.4%,Smad4mRNA表达较OGD3h组下调73.0%,但与OGD0h相比,表达提高38.8%。结论 ActA/Smads通路激活发生在神经元样细胞OGD损伤的早期（OGD3h）;Smad7转录水平上参与该通路的负性调节过程。