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1.
目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫反应,以及产生的保护性效果。方法P30乳酸球菌口服免疫BAILB/c小鼠,以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照,4周内免疫7次,免疫结束后,分别收集各组小鼠血清,ELISA法检测血清中总抗体IgG和抗体亚类IgG1和IgG2a水平,同时用100个弓形虫RH株速殖子攻击各实验小鼠。结果P30乳酸球菌口服免疫小鼠组检测到了相应的抗体,抗体亚类IgG2a的生成量稍高于IgG1,两对照组均检测不到明显的相应抗体;攻击后,口服疫苗免疫组平均存活时间多于对照组4d。结论P30乳酸球菌口服疫苗刺激小鼠产生了相应的抗体,诱导产生了偏向Th1型的免疫反应,且在小鼠体内发挥了部分保护作用。  相似文献   
2.
rhIL—13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素-13(rhIL-13),便于进一步研究开发。方法 根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL-13编码基因片段,经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL-13cDNA全长序列;将其托入pPICZαA质粒中,构建成pPICZαA-IL-13表达载体。该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL-3表达阳性菌株;用Western Blotting和ELISA检测发酵上清中IL-13的抗原性和表达量,B9-11细胞株分析其生理学活性。结果 15%—SDS-PAGE显示重组人IL-13分子量约13kd,Western-blotting证实为人IL-13,ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达15ug/ml,其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论 成功获得IL-13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株。该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。  相似文献   
3.
目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原,为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础.方法将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达.超声破壁后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物的表达形式,并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化.通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性.结果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达.对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达.在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上.Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别.结论GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别.  相似文献   
4.
目的 观察弓形虫P30乳酸球菌(L.1actis/P30)口服免疫鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-2及NO的变化情况。方法 L.1actis/P30口服免疫BAI。B/c小鼠,以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照,在第3周、第9周及第12周分别收集各实验组小鼠血清,ELISA法测定血清IFN-γ、IL-2含量;酶法测定N0浓度。结果L.1actis/P30i21服免疫鼠血清中IFN-γ,IL-2含量均显著高于两对照组,血清中N0含量随着免疫时间延长与两对照组差异逐渐明显。结论 L.1actis/P30口服免疫能有效刺激小鼠细胞因子IFN7和IL2的产生及N0分子的释放。  相似文献   
5.
背景:抵抗素样分子-α(RELM-α)是一个富含半胱氨酸的分泌蛋白,具有促进肺血管生成和收缩、抗细胞凋亡、诱导肺成纤维细胞分化和细胞外基质沉积的功能。然而,RELM-α在急性胰腺炎(AP)继发急性肺损伤中的作用尚未完全明确。目的:探讨RELM-α在AP继发急性肺损伤中的表达和作用。方法:45只Sprague-Dawley大鼠随机分为急性坏死性胰腺炎(ANP)组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组和正常对照组,分别以3.5%牛磺胆酸钠和20%L-精氨酸建立ANP和AEP模型。光学显微镜下观察肺组织病理学表现;测定肺湿/干重系数、支气管肺泡灌洗液炎性细胞数量以及血清CRP、淀粉酶水平;蛋白质印迹法和免疫组化法检测肺组织RELM-α的表达和定位。结果:ANP组肺组织病理学评分、肺湿/干重系数、支气管肺泡灌洗液炎性细胞数量、血清CRP和淀粉酶水平、肺组织RELM-α表达水平均较AEP组和正常对照组显著升高(P0.05)。Spearman等级相关系数分析显示,肺组织RELM-α表达水平与肺组织病理学评分、肺湿/干重系数、支气管肺泡灌洗液炎性细胞数量呈正相关(P0.01)。线性回归模型分析显示,肺组织RELM-α表达水平与血清CRP、淀粉酶水平呈正相关(P0.05)。结论:RELM-α在AP急性肺损伤的肺组织中表达增高,其作为促炎细胞因子,参与激活炎性细胞,介导急性肺损伤发生,可作为监测AP预后的生物学标记物。  相似文献   
6.
乳酸乳球菌表达弓形虫棒状体蛋白1(ROP1)   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的 在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法 从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳酸乳球菌中的表达。结果 表达产物中有一约 4 3kDa的蛋白带能被弓形虫病人血清识别。结论 ROP1在乳酸乳球菌中得到了表达  相似文献   
7.
人胰腺癌组织中增殖诱导配体蛋白的表达及意义   总被引:3,自引:3,他引:3  
目的:观察人胰腺癌组织中增殖诱导配体(APRIL)蛋白的表达情况,探讨其与胰腺癌生物学行为的关系.方法:免疫组化染色法检测人胰腺癌组织(n=20)及正常胰腺组织(n=10)APRIL蛋白的表达,分析不同临床病理指标下胰腺癌组织中APRIL蛋白的表达.结果:胰腺癌组织中APRIL阳性率为90.0%(18/20),明显高于正常胰腺组织0(0/10).胰腺癌组织不同临床病理指标下(肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤大小),APRIL蛋白表达无显著差异.结论:APRIL蛋白表达可能与胰腺癌的发生、发展有关.  相似文献   
8.
目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫反应,以及产生的保护性效果. 方法P30乳酸球菌口服免疫BALB/c小鼠,以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照,4周内免疫7次,免疫结束后,分别收集各组小鼠血清,ELISA法检测血清中总抗体IgG和抗体亚类IgG1和IgG2a水平,同时用100个弓形虫RH株速殖子攻击各实验小鼠. 结果 P30乳酸球菌口服免疫小鼠组检测到了相应的抗体,抗体亚类IgG2a的生成量稍高于IgG1,两对照组均检测不到明显的相应抗体;攻击后,口服疫苗免疫组平均存活时间多于对照组4 d. 结论 P30乳酸球菌口服疫苗刺激小鼠产生了相应的抗体,诱导产生了偏向Th1型的免疫反应,且在小鼠体内发挥了部分保护作用.  相似文献   
9.
目的 用毕氏酵母(Pichia pastoris)表达人可溶性Flt3配体(rhFL),并观察rhFL对恶性造血细胞增殖的作用;探讨地塞米松(DXM)对Flt3受体(Flt3R)表达及rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法 人工合成FL基因片段,经基因重组技术获得重组质粒pPICZα-FL,电转化毕氏酵母,筛选分泌rhFL的基因工程菌株,用流式细胞仪测定恶性造血细胞表面Flt3R的表达,用MT  相似文献   
10.
对经疏水层析 (PhenylSepharoseCL 4L)和阴离子交换层析 (DEAE FastFlow)等部分纯化的样品 ,采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步将其分离纯化 ,获得了PG3 7碱性脂肪酶的 3种同工酶LipaseⅠ、LipaseⅡ和LipaseⅢ .用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和SephadexG 1 50凝胶色谱法分别测得同工酶的相对分子质量为 2 750 0和 2 90 0 0 .测定了LipaseⅠ的等电点为 5.4 ,动力学常数Km 和Vmax分别为 4 .54g/dL和 5.56μmol/ (min·μg) .  相似文献   
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