神经保护性免疫和帕金森病

帕金森病（PD）是黑质多巴胺（DA）能神经元变性所致的运动障碍疾病，以静止性震颤、僵直、运动迟缓和姿势反射异常为临床特征。PD中的免疫反应涉及到免疫细胞和免疫分子，以及复杂的调控网络。该免疫反应有神经损害和神经保护作用，我们就PD中的神经保护性免疫进行综述。     

核酸疫苗免疫帕金森病小鼠加重黑质炎性反应

目的:探讨α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)核酸疫苗免疫帕金森病小鼠后黑质免疫炎性反应的变化.方法:将本实验室成功构建的α-syn核酸疫苗-pVAX1-hα-Syn140用Qiagen试剂盒大量制备α-syn质粒;24只MPTP慢性帕金森病小鼠随机分为3组:实验组、空质粒对照组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注pVAX1-hα-Syn140重组质粒,pVAX1空质粒和PBS各100 μl,共免疫3次,每次间隔3周,末次免疫后2周,观察小鼠中脑黑质CD11b和TNF-α表达变化.结果:pVAX1-hα-Syn140核酸疫苗免疫组小鼠中脑黑质CD11b表达较对照组增加约36%～37%(P＜0.01);TNF-α表达较对照组增加约28%～32%(P＜0.01).结论:pVAX1-hα-Syn140核酸疫苗具有一定的炎性副反应,可在下一步的实验中进行优化,减轻其有害的细胞毒副反应.     

pVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒的构建及表达

目的构建含人白介素4(human IL-4,hIL-4)基因与人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)B细胞表位基因的真核表达质粒,并研究其在COS-7细胞内的表达。方法RT-PCR扩增人IL-4基因后,通过基因重组技术将其与α-synuclein蛋白B细胞表位基因融合,在两者之间引入柔性短肽(GSGGGSG)。将融合产物克隆到真核表达载体PVAX1上,利用电泳和测序鉴定融合质粒的大小、方向和序列。采用脂质体转染法,将融合质粒转入COS-7细胞中,用Western blotting技术检测其表达。结果电泳和测序结果与预期一致,并命名为PVAX1-IL-4/SYN-B;质粒转染COS-7细胞株成功,并且能在细胞内高效表达。结论成功构建PVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒,并在哺乳动物COS-7细胞中高效表达,为研究融合质粒在帕金森病动物模型中的免疫效果奠定了基础。     

糖尿病合并Graves病54例临床分析

[目的]探讨糖尿病合并Graves病的临床特点、治疗方法及疗效预后。[方法]对糖尿病合并Graves病54例患者的临床资料进行回顾性分析。[结果]所有病例以女性患者多见,高代谢症状常见。超过半数患者的糖尿病症状并不明显,有28例患者是在血糖检测时发现的糖尿病。甲亢的漏诊率也较高。患者总体治疗效果较好,在高代谢症状明显控制后,降糖药物的剂量也明显下降。[结论建议对所有的Graves病患者均应进行血糖检测,糖尿病患者也应作甲状腺功能的检测,以减少漏诊,治疗中要两种疾病同时兼顾,改善患者预后。     

自发性脑出血继续出血的高危因素及治疗方法探讨

分析自发性脑出血继续出血的发生率、发生时间和高危因素,并对脑出血的治疗方式进行探讨。方法：对763例自发性脑出血患者的临床资料进行回顾性分析。结果：所有病例中,有115例患者发生继续出血,发生率为18．2％。继续出血的发生时间是：73．1％病例在24h内,15．7％病例在24～72h内。首次头颅CT显示血肿量在10~30ml者继续出血的发生最多。出血部位在壳核、脑叶和丘脑等部位者占继续出血总病例的87．8％。危险因素还包括发病时收缩压升高、血肿形态不规则、既往有脑血管病史、长期酗酒史、慢性肝病史、长期使用抗血小板药物或抗凝剂等。结论：自发性脑出血存在继续出血,且发生率较高。继续出血有多种危险因素。治疗中采用合理控制血压、保护肝功能、使用止血药物、停用抗血小板聚集和抗凝药、避免早期大量使用甘露醇等,是预防继续出血和改善患者预后的有效治疗手段。     

ha-syn蛋白核酸疫苗pVAX1-hαSH1-140的构建及其表达

目的构建含人α-突触核蛋白（human α-synuclein,hα-syn）编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗开发奠定基础。方法通过PCR方法扩增hα—syn基因的CDS全长片段,含酶切位点KpnⅠ、XbaⅠ和Kozak序列。扩增产物和真核表达载体pVAX1经双酶切、纯化、连接,转化感受态细胞E．coli TOP10,筛选含目的基因的重组载体pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,用RT—PCR法和Western blot法检测其表达产物。结果经单、双酶切证实插入的基因片段大小一致,基因测序证实其序列和方向完全正确。用RT—PCR法和Western blot法检测表明,重组质粒pVAX1-hαS1-140在COS-7细胞中能表达目的蛋白,而且具有生物活性。结论成功构建了核酸疫苗pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗治疗研究奠定了良好的基础。     

糖尿病足57例临床诊治分析

目的探讨糖尿病足的综合防治策略。方法对57例糖尿病足患者的临床发病相关因素、诊断及治疗效果进行回顾性分析。结果糖尿病足发生坏疽的危险因素包括高龄、女性患者、HDL-C降低、LDL-C升高、收缩压升高、血糖控制差等,与非坏疽组比较有显著性意义(P<0.05)。足病溃疡面分泌物细菌培养药物敏感试验显示常用抗生素的耐药率达50%～70%。结论 Wagner足病分级Ⅰ～Ⅲ级患者疗效90%以上,Ⅳ～Ⅴ级患者疗效差,截肢(趾)率高。提示对糖尿病足的早期筛查和诊治、高危险因素的综合防治并达标,是从根本上改变糖尿病足病预后不良的有效方法。     

MPTP诱导慢性帕金森病小鼠模型的实验研究

目的:观察慢性长期小剂量注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)对小鼠黑质多巴胺能神经元损伤及α-突触核蛋白(α-synuclein蛋白)表达的影响.方法:C57BL小鼠背部皮下注射MPTP 25 mg/kg体重,每周注射2次,连续注射5周,观察小鼠行为学改变,应用免疫组化染色检测酪氨酸羟化酶(Throsine hydroxylase,TH)和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)的表达,原位末端标记法(TUNEL法)检测多巴胺能神经细胞凋亡.结果:与注射生理盐水组相比,注射MPTP组小鼠出现短暂一过性的震颤、后腿拉直、躬背、竖毛、运动减少等;黑质部酪氨酸羟化酶阳性细胞数目减少,α-突触核蛋白阳性细胞数目增加;生理盐水组未观察到细胞凋亡,MPTP组存在凋亡现象.结论:慢性长期注射MPTP可诱导小鼠行为学改变,黑质部多巴胺神经元细胞凋亡,以及α-突触核蛋白持续表达增多和聚集.     

优化人alpha-syn基因疫苗免疫MPTP慢性PD小鼠的神经保护作用

目的：探讨优化高分泌型人α-突触核蛋白（human alpha—synuclein,ha—syn）基因疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠的治疗效果和神经免疫保护作用．方法：建立慢性PD小鼠模型,采用神经毒素MPTP25mg／（kg·d）,2次／wk,累计共10次．建模后随机分为3组：优化基因疫苗组、疫苗组、PBS对照组;每次治疗前,每只动物分别在双侧后肢胫骨前肌部位注射5g／L布比卡因50μL,注射72h后,3组动物分别于同部位同深度注射优化基因疫苗、基因疫苗或PBS各50μL,1次／3wk,共3次．末次免疫后2wk观察行为学改变后,处死取脑．运用免疫荧光、免疫组化等方法观察酪氨酸羟化酶阳性细胞数,以及α-syn表达变化．结果：优化基因疫苗组、疫苗组小鼠爬杆能力与PBS对照组比较都得到明显改善,有统计学差异（P〈0．05）;但优化基因疫苗组与疫苗组行为学评分间差异无统计学意义．优化基因疫苗组酪氨酸羟化酶阳性细胞数与其它两组相比增多约20％-68％（P〈0．05）,α-syn表达减少约15％～45％（P〈0．05）．结论：优化基因疫苗具有较强改善帕金森小鼠行为学的作用,能增强疫苗的免疫原性,促进受损黑质细胞修复,对帕金森病小鼠有更好的免疫治疗作用．     

帕金森病脑脊液蛋白质组学研究

目的寻找头痛和帕金森病(PD)患者用药前、后脑脊液差异蛋白质点,确定PD疾病特异性蛋白(DSPs)和药物治疗对蛋白质表达谱的影响。方法收集2004—2006年重庆医科大学附属第一医院神经内科收治的24例PD患者及12例对照组头痛患者脑脊液。用双向凝胶电泳(2D-PAGE)分离蛋白质,银染染色,分析图像寻找有意义的差异蛋白点;进行质谱(MS)鉴定。结果脑脊液蛋白质点主要集中在pH 4~7,头痛组与帕金森用药前后脑脊液电泳图谱蛋白质点分布基本一致,符合临床脑脊液生化常规检查,甲状腺激素结合蛋白、载脂蛋白E在PD患者用药前后相对于对照组都消失,血清转铁蛋白在PD患者用药前后相对于对照组都明显上调。结论用药前后PD患者脑脊液蛋白质点与头痛组脑脊液蛋白质点存在差异,药物治疗对PD患者脑脊液蛋白质表达谱影响不明显。