肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌组织的表达及临床意义

目的研究肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌中的表达,探讨其临床意义。方法对15例人下咽癌组织学标本和15例正常的癌旁组织进行免疫荧光和免疫印迹检测。结果 PIPP的表达量及荧光强度在下咽癌组织中明显低于正常组织。结论 PIPP在下咽癌组织中低表达可能为临床提供新的诊断指标。     

固定后保存于缓冲液的人肝材料ATP酶活性的光电镜枸橼酸铅法的改良

肝脏是人体消化,解毒,免疫,代谢的重要器官。近年来肝癌、肝硬化、肝炎等各种肝脏疾病严重影响人们的生理和生存。ATP酶是肝脏的重要功能酶之一,对肝脏ATP酶的研究,有助于对肝脏的了解。以往关于酶组化研究方法的报导,几乎无1例不是要求取新鲜材料。而对固定后保存于缓冲液内的材料的酶活性存在时间的研究甚少,为解决这一问题,我们对固定后保存于缓冲液内的人肝材料的ATP酶活性应用枸橼酸铅法的改良法进行光电镜的系列实验探讨。     

抗原修复在免疫组化染色中的应用

免疫组织化学染色是利用抗原抗体特异性反应,对组织或细胞内的抗原物质进行定性和定位的标记方法。它对某些抗原物质的定位检测及某些疾病的临床病理诊断具有重要的指导作用。免疫组化染色对已知抗原的检测,其阳性程度不仅取决于抗体的效价及抗体的生物学活性,还取决于组织细胞中抗原决定簇的暴露程度及其稳定性。抗原决定簇是相应的抗体特异性结合的抗原部分。在临床病理诊断中常采用福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片标本,因固定液中所含的甲醛在固定过程中逐渐形成醛键或形成羟甲基,这些化学键可使蛋白与蛋白之间发生交联,从而封闭了抗原…     

细胞培养法评价含硅羟基磷酸钙涂层镁合金的生物相容性

目的 采用细胞培养法在体外评估镁合金表面不同硅含量的羟基磷酸钙涂层对成骨细胞的毒性反应.方法 采用经鉴定的SD大鼠成骨细胞接种于三种含有不同浓度硅含量的羟基磷酸钙涂层的镁合金及对照组裸镁合金,MTT法检测细胞活力并榆测成骨细胞的碱性磷酸酶表达;扫描电镜观察细胞生长情况.结果 细胞活力检测和碱性磷酸酶活性分析均表明,硅含...     

金属硫蛋白1h与常染色质组蛋白甲基转移酶1结合调节组蛋白H3K9甲基化并抑制肺癌细胞周期及运动

目的:观察常染色质组蛋白甲基转移酶1(euchromatic histone methyltransferase1,EHMT1)与金属硫蛋白1h(metallothionein1h,MT1h)的相互作用及定位,探讨其对组蛋白H3K9甲基化和肺癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:将pGBKT7-MT1h质粒与pGADT7-EHMT1质粒共同转化至酵母菌株AH109,进行酵母双杂交实验。将pcDNA4/TO/myc-hisA/MT1h与pcDNA6/TR质粒共转染肺癌细胞株A549和A2,并用四环素诱导MT1h表达后,采用免疫共沉淀和激光共聚焦法检测MT1h、标签蛋白c-myc和EHMT1蛋白的表达及定位;运用组蛋白H3K9甲基转移酶试剂盒检测甲基化转移酶活性,Western印迹法检测三甲基化的组蛋白H3K9表达;FCM和克隆形成实验检测MT1h表达对细胞增殖的影响;划痕实验和Borden小室法检测MT1h对细胞迁移的影响。结果:实验证实MT1h与EHMT1存在直接作用,且二者共定位于细胞核。诱导MT1h表达后,组蛋白甲基化转移酶活性升高,并且MT1h与组蛋白赖氨酸H3K9三甲基化密切相关。功能分析显示,MT1h稳定转染的肺癌细胞多处于G0期,细胞运动和迁移能力降低。结论:MT1h与EHMT1在细胞核内直接作用,可能通过调节组蛋白H3K9甲基化来发挥抑癌基因的作用。     

DNMT1高表达与beta-catenin蓄积及肺鳞癌、腺癌的恶性表型相关

背景与目的 DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)是调控DNA甲基化的重要分子之一,DNMT1的异常表达与抑癌基因的甲基化、失活和多种肿瘤的发生发展有关.本研究旨在分析阐明DNMT1在正常肺组织和肺癌组织中表达的差异及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系,并探讨DNMT1与β-catenin在肺癌中表达的相关性.方法采用组织芯片和免疫组化方法检测DNMT1和β-catenin在84例肺鳞癌、腺癌和相应癌旁正常肺组织中的表达情况.结果 DNMT1在84例肺癌组织中的平均阳性率为(58.04±35.07)%,显著高于癌旁正常肺组织[(6.88±10.26)%](t=12.835,P<0.001).DNMT1的高表达与肺癌组织的腺癌组织学分型(r=0.365,P=0.001)、低 分化程度(r=0.253,P=0.021)和淋巴结转移(r=0.246,P=0.024)正相关.DNMT1 与β-catenin的细胞浆表达显著正相关(r=0.571,P<0.001).结论 DNMT1的高表达是肺鳞癌和腺癌的普遍现象,DNMT1的高表达与肺癌的腺癌组织学类型和恶性表型有关;DNMT1在肺癌中可能与β-catenin协同表达.     

趋化因子受体CXCR4在胃肠道肿瘤组织及细胞系中的异常表达

目的:检测CXCR4在胃肠道肿瘤中的表达状态,探讨CXCR4在胃肠道肿瘤发病中的作用.方法:采用即时定量PCR(Real-time PCR)检测胃肠道肿瘤标本中CXCR4的表达.采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot检测CXCR4在胃肠道肿瘤细胞系中的表达.结果:CXCR4 mRNA在24例结直肠癌组织标本的表达水平显著高于其配对的癌旁正常组织( P<0.001).CXCR4 mRNA在30例胃癌组织标本中的表达水平亦显著高于其配对的癌旁正常组织( P<0.001).CXCR4 mRNA和蛋白质在结肠癌细胞系HT-29和SW-480及胃癌细胞系SGC-7901和AGS中均存在明显表达.CXCR4表达与胃癌患者分期及淋巴结转移状态具有相关性( P = 0.01,0.02).结论:CXCR4在胃肠道肿瘤中存在过度表达,其参与了胃肠道肿瘤的发病过程.     

EMAP-Ⅱ对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1相互作用的调节和机制

  目的 研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）对血肿瘤屏障（BTB）紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C（PKC）活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用。方法 提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ 0.5 h组、EMAP-Ⅱ 1 h组、EMAP-Ⅱ 2 h组、EMAP-Ⅱ 3 h组、EMAP-Ⅱ 6 h组和EMAP-Ⅱ 12 h组。应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性。结果 与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的跨内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1 在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用 1 h时效果最显著（P<0.01）;同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用 1 h时达峰值（P<0.01）。结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一。     

锌缺乏对小鼠海马长时程增强的影响

目的探讨锌缺乏对小鼠海马区域锌离子含量以及长时程增强(LTP)的影响。方法 3周龄CD-1小鼠饲以低锌饲料(0.85mg/kg)和去离子水5周进行实验。应用金属自显影技术(AMG)检测低锌饲料喂养对小鼠海马游离锌离子含量的影响;在小鼠海马齿状回的苔藓纤维层插入刺激电极,在CA3区锥体细胞层插入记录电极,记录高频刺激后海马苔藓纤维CA3区引起的峰电位(PS)和兴奋性突触后电位(f-EPSP)的变化,分析锌缺乏对小鼠海马LTP形成的影响。结果 AMG结果显示锌缺乏小鼠海马CA1,CA3和齿状回区域的锌离子含量明显降低(P<0.05-0.01);电生理检测结果表明锌缺乏小鼠在高频刺激后海马苔藓纤维的PS和f-EPSP均显著下降(P<0.01),提示锌缺乏抑制小鼠海马长时程增强的形成。结论锌缺乏使小鼠海马游离锌离子含量下降,参与对海马长时程增强形成的抑制。     

CYP1A1基因I462V多态与非小细胞肺癌的相关性

目的 探讨CYP1A1基因1462V多态性与非小细胞肺癌的相关性.方法 采用病例对照研究,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性对72例非小细胞肺癌患者(病例组)和90例正常对照(对照组)CYP1A1基因I462V多态进行检测,分析基因型频率和等位基因频率在病例组和对照组的分布,比较不同基因型与非小细胞肺癌患病风险的关...