全能性相关基因cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达

背景：全能性相关基因cPouV、cNanog和Sox2对鸡胚胎干细胞自我更新和全能性的维持起重要调控作用,其在鸡早期胚胎中的表达情况和作用缺乏了解。目的：通过检测cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达情况,研究基因在早期胚胎发育过程中的作用。方法：将180枚新鲜受精种鸡蛋分为6组,分别孵育0,8,16,22,32,42h后取出。获取胚胎样品,以β-actin为内参基因,采用实时定量PCR检测其cNanog、cPouV和Sox2的相对表达量。结果与结论：cNanog和cPouV的表达量模式相似,在孵育的第0,8,16,22h表达量增加,孵育22h达到峰值,随后逐级下降。Sox2的相对表达量呈明显上调趋势。说明,cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎发育调控中的重要作用,且作为全能性的标志基因,作用有所相同。     

鸡胚胎干细胞分离方法和培养体系的优化

背景：胚胎干细胞是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系。而鸡胚胎干细胞则是从X期鸡胚的胚盘分离而来。目的：优化鸡胚胎干细胞分离方法和离体培养体系。方法：采用滤纸纸环-发环的方法从X期鸡胚分离胚盘细胞,并采用STO细胞作为饲养层和大鼠肝细胞（BRL）条件培养基（CM）＋细胞因子作为离体培养体系对分离的胚盘细胞进行培养。结果与结论：滤纸纸环-发环法获得的完整胚盘率为75%～85%,克隆形成率约为50%。BRL-CM＋饲养层培养体系,鸡胚胎干细胞可传至7代,而BRL-CM＋饲养层＋细胞因子培养体系,鸡胚胎干细胞可传至25代。分离到的鸡胚胎干细胞,经碱性磷酸酶染色、SSEA-1染色鉴定,表明鸡胚胎干细胞处于未分化状态。提示,实验不仅优化了鸡胚胎的分离方法,获得完整且杂质少的胚盘,而且进一步优化了鸡胚胎干细胞体外培养体系。     

鸡胚胎干细胞分离方法和培养体系的优化

背景：胚胎干细胞是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系。而鸡胚胎干细胞则是从X期鸡胚的胚盘分离而来。 目的：优化鸡胚胎干细胞分离方法和离体培养体系。 方法：采用滤纸纸环-发环的方法从X期鸡胚分离胚盘细胞,并采用STO细胞作为饲养层和大鼠肝细胞(BRL)条件培养基(CM)+细胞因子作为离体培养体系对分离的胚盘细胞进行培养。 结果与结论：滤纸纸环-发环法获得的完整胚盘率为75%~85%,克隆形成率约为50%。BRL-CM+饲养层培养体系,鸡胚胎干细胞可传至7代,而BRL-CM+饲养层+细胞因子培养体系,鸡胚胎干细胞可传至25代。分离到的鸡胚胎干细胞,经碱性磷酸酶染色、SSEA-1染色鉴定,表明鸡胚胎干细胞处于未分化状态。提示,实验不仅优化了鸡胚胎的分离方法,获得完整且杂质少的胚盘,而且进一步优化了鸡胚胎干细胞体外培养体系。     

大肠杆菌O-抗原血清型鉴定研究进展

大肠杆菌在一定条件下能引发宿主疾病,其表面O-抗原与毒力有关。O-抗原的化学组成和结构具有高度多样性,并且O-抗原血清型种类与大肠杆菌致病性有一定联系。因此,大肠杆菌O-抗原血清型鉴定对流行病学调查,防御和控制致病性大肠杆菌病有重要意义。传统的血清学分型方法耗时长、费用高、准确度不理想。随着科学技术的发展,研究者对大肠杆菌196种O-抗原基因簇进行了破译,比较分析了不同O-抗原基因簇序列,并针对基因簇中特异性DNA序列设计分子标记,运用PCR方法对O-抗原血清型进行分型,其中包括一般PCR、多重PCR、实时PCR、DNA芯片和微球悬浮列阵法。此外,还有rbf-限制性片段长度多态性分析法,磁性微球免疫分析法和基于全基因组序列预测法,这些方法丰富了O-抗原血清型鉴定方法,弥补了传统血清学分型方法的不足。本文概述了O-抗原合成基因簇序列和O-抗原血清型鉴定方法相关研究进展。     

冰冻和石蜡切片对TUNEL染色结果的影响

目的与方法：为比较不同组织切片方法对细胞凋亡TUNEL反应结果的影响，用雏鸭胸腺分别制成冰冻(8 μｍ)和石蜡(6 μｍ)切片，然后进行TUNEL染色。 结果： 冰冻切片组细胞凋亡阳性率高，背景清晰，特异性好。石蜡切片组则阳性率相对较低，反差较小，容易出现假阳性。 结论： 不同制片法对TUNEL结果有影响，即冰冻切片可能较石蜡切片具有更高的反应敏感性。     

实验感染肝片吸虫的水牛体液免疫反应的研究

为研究水牛抗肝片吸虫感染的免疫反应机制,选择８头雄性去势水牛经粪便检查和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测确认无肝片吸虫感染。经２周适应性饲养后,随机分成感染组（ｎ＝５）和对照组（ｎ＝３）。感染组水牛每天每头经口感染６０个囊蚴,连续２０天,共感染１２００个囊蚴。每周颈静脉采血,测定Ｔ、Ｂ淋巴细胞比例、血清总蛋白含量和组分比例以及抗体（ＩｇＧ）水平。结果表明：感染组水牛从感染肝片吸虫后第２周开始,Ｔ淋巴细胞比例显著下降而Ｂ淋巴细胞比例显著上升,１６周后,Ｔ、Ｂ淋巴细胞比例恢复到与对照水牛相当水平。感染组水牛血清总蛋白（ＴＰ）、α一球蛋白、β－球蛋白与以对照组相比均无显著性变化,而白蛋白（％）从感染第２周开始下降,以后一直在低于对照组的水平波动;感染组水牛的γ一球蛋白（％）高于或显著高于对照组。血清抗肝片吸虫体从感染后第４周开始显著升高,１９周达到峰值,２２周时回落到与对照组相近的水平。结果提示：血清ＩｇＧ水平升高是水牛抗肝片吸虫感染的重要机制。     

肝脏的免疫功能

肝脏不仅具有内分泌功能,而且可参与机体局部或整体水平的免疫调节,尤其发现了肝脏是胸腺以外的Ｔ细胞分化的重要场所。     

细胞凋亡及其基因调控的研究进展

细胞凋亡 (Apoptosis)或程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD)是有机体为保持自身组织稳定、调控自身细胞的增殖和死亡之间的平衡、由基因控制的细胞主动性死亡过程 ,具有特殊的形态学和生化特征 ,不导致明显的炎症反应[1 ] 。细胞凋亡是细胞在其生长、发育过程中具有十分重要作用的生理现象 ,其生物学意义是在发育中清除多余的细胞、发育不正常的细胞、已完成任务的细胞以及有害的细胞 ,参与免疫系统细胞的发育和克隆选择等 [2 ] 。近年来 ,国内外通过对细胞凋亡发生的分子生物学机理的研究 ,对其本质的认识不断深入 ,这一过程和细…     

鸡胚胎干细胞分离方法和培养体系的优化

背景:胚胎干细胞是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系。而鸡胚胎干细胞则是从X期鸡胚的胚盘分离而来。目的:优化鸡胚胎干细胞分离方法和离体培养体系。方法:采用滤纸纸环-发环的方法从X期鸡胚分离胚盘细胞,并采用STO细胞作为饲养层和大鼠肝细胞(BRL)条件培养基(CM)+细胞因子作为离体培养体系对分离的胚盘细胞进行培养。结果与结论:滤纸纸环-发环法获得的完整胚盘率为75%～85%,克隆形成率约为50%。BRL-CM+饲养层培养体系,鸡胚胎干细胞可传至7代,而BRL-CM+饲养层+细胞因子培养体系,鸡胚胎干细胞可传至25代。分离到的鸡胚胎干细胞,经碱性磷酸酶染色、SSEA-1染色鉴定,表明鸡胚胎干细胞处于未分化状态。提示,实验不仅优化了鸡胚胎的分离方法,获得完整且杂质少的胚盘,而且进一步优化了鸡胚胎干细胞体外培养体系。     

CCl4诱发肝损伤过程中血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平动态变化的研究

目的 :深入了解肝损伤对机体血浆花生四烯酸代谢、一些激素代谢以及肝脏功能变化产生的影响。方法 :选用 30只健康、1月龄SD大鼠 ,通过腹腔注射CCl4 诱发肝损伤后 ,第 2、4、6、8周观察血浆前列腺素E2(PGE2 )、6 -酮 -前列腺素F1α(6 -keto -PGF1α)、血栓素B2 (TXB2 )、谷 -草转氨酶 (AST)、碱性磷酸酶 (AKP)、皮质醇、胰岛素、生长激素 (GH)、甲状腺素 (T4 )和三碘甲腺原氨酸 (T3)水平变化。结果 :在整个实验期 ,大鼠血浆PGE2 水平在CCl4 注射后的第 2周高于对照组 ,TBX2 比对照组高 ,但二者t检验无显著性。而 6 -keto -PGF1α与对照组相近 ;血浆AST和AKP活力分别极显著高于对照组 ;皮质醇和胰岛素于 2、6、8周显著高于对照组 ;GH、T3均于第 8周显著低于对照组。T4 则于第 4、6、8周显著低于对照组。结论 :肝损伤影响血中花生四烯酸代谢物水平和代谢 ;并导致血中几种代谢激素水平的异常变化