小鼠主动脉平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞与格列本脲共孵育的反应

目的:观察磺酰脲类药物格列本脲对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)酶活性的影响.方法:实验于2003-06/2005--07在华中科技大学同济医学院实验中心完成.①用组织贴块法培养小鼠主动脉平滑肌细胞,采用两步超速离心法制备低密度脂蛋白后,运用CuCl2氧化法制备氧化低密度脂蛋白,采用100 mg/L的氧化低密度脂蛋白作用于平滑肌细胞72 h.建立泡沫细胞模型.②在平滑肌细胞和泡沫细胞分别加入格列本脲,使终浓度为200μmol/L,孵育24 h,用放射性同位素标记法检测ACAT1酶活性.结果: ①平滑肌细胞转变为泡沫细胞后,ACAT1酶活性上升(P<0.05).②平滑肌细胞被格列本脲干预后,ACAT1酶活性无明显变化(P>0.05);肌源性泡沫细胞加入格列本脲后,ACAT1酶活性下降(P<0.05)结论:格列本脲能抑制肌源性泡沫细胞内ACAT1的酶活性,抑制平滑肌细胞向泡沫细胞的转化,有可能成为防止动脉粥样硬化的有效药物.     

细胞因子对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶mRNA的影响

目的研究白细胞介素(IL)1β和肿瘤坏死因子α(TNFα)对酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT)mRNA水平的影响,探讨动脉粥样硬化形成的机制及其调节水平。方法在小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)及肌源性泡沫细胞(FC)中分别加入IL1β和TNFα,孵育24h,用半定量RTPCR检测ACATmRNA表达。结果①无论有无细胞因子的干预,VSMC转变为FC后,ACATmRNA的表达均增加。②TNFα对VSMC和平滑肌源性FC中ACATmRNA的表达无影响。③IL1β能促使平滑肌源性FC中的ACATmRNA的表达。结论IL1β在转录水平上调ACATmRNA的表达,促使胆固醇的酯化和胆固醇的沉积,使VSMC向FC转化,参与动脉粥样硬化的形成和发展。     

地尔硫(卓)对心肌缺血再灌注损伤NOMDA变化曲线及超微结构的影响

目的:检测地尔硫(卓)对心肌缺血再灌注损伤中一氧化氮(NO),丙二醛(MDA)动态变化曲线及对心肌超微结构的影响,探讨地尔硫(卓)对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min后复灌180 min,制成心肌缺血再灌注模型.Wistar大鼠48只,随机分成假手术组,MIR组,地尔硫(卓)组:地尔硫(卓)(1mg/kg)在缺血前5 min经颈静脉35 min内缓慢注入.各组于缺血前、缺血30 min、再灌90 min、180 min检测NO,MDA,并做电镜标本.结果:NO、MDA在缺血期无明显变化.NO再灌后下降,以再灌90 min内下降明显(P＜0.05),地尔硫(卓)组NO活性高于MIR组(P<0.05).再灌后MDA合成持续上升,再灌180 min与缺血30 min时相比,P＜0.01,高于同期的地尔硫(卓)组(P<0.05).电镜观察地尔硫(卓)能减少超微结构的损伤.结论:地尔硫(卓)对心肌缺血再灌注损伤具保护作用.     

TNF-α,ox-LDL对人单核细胞株U937胆固醇酰基转移酶1表达的影响

目的　观察肿瘤坏死因子 α (TNF α)和氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)对人单核细胞U937酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶 1(ACAT1)mRNA表达和蛋白质翻译的影响。方法　U937细胞培养到足够数量后 ,细胞计数传代分组 :①对照组 :加等量的培养基 ;②TNF α组 :加入TNF α ,使其终浓度为 10ng/ml;③ox LDL组 :加入ox LDL ,终浓度为 10 0 μg/ml。应用RT PCR检测ACAT1mRNA表达 ,蛋白定量应用免疫印迹法。 结果　与对照组相比 ,TNF α组ACAT1mRNA表达显著增加 (0 5 73± 0 0 32vs0 990± 0 0 2 2 ,P <0 0 1) ,而ox LDL组ACAT1mRNA表达水平 (0 5 5 4± 0 0 2 6 )无显著变化。 3组之间ACAT1酶蛋白含量差异无显著性意义。结论　TNF α能促进A CAT1mRNA表达 ,但未见TNF α和ox LDL对ACAT1酶蛋白表达有任何影响     

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应

目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在阿霉素致心力衰竭大鼠左室心肌中表达与罗格列酮的干预作用

目的:研究表明,过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体可保护心脏减轻缺血再灌注损伤,降低心肌梗死面积,促进缺血再灌注后心功能的恢复。观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ对实验性心力衰竭的保护作用。方法:实验于2003-11/2004-07在华中科技大学同济医学院完成。①实验分组:成年雄性Wistar大鼠60只,体质量(265±43)g,随机抽签法分为心衰模型组(n=25),治疗组(n=25)和正常对照组(n=10)。②实验方法:建立阿霉素致心力衰竭大鼠模型,心衰模型组:尾静脉注射阿霉素2.5mg/kg,1次/周,连续10周;治疗组:在首次注射阿霉素前两周开始给予罗格列酮3mg/(kg·d)灌胃治疗,一直持续到第12周;正常对照组:用相同容量的生理盐水代替阿霉素,给药方法同心衰模型组。③实验评估:所有大鼠分别于第12周进行超声和血流动力学及血浆生化指标的检测;苦味酸天狼星红染色后显微镜下观察心肌组织,并应用HMIAS-2000自动图像分析系统测量组织切片的胶原容积分数;反转录-聚合酶链反应检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达;苏木精-伊红染色后显微镜下定性观察形态学改变。结果:纳入大鼠60只,心衰模型组大鼠12周累计死亡10只,死亡原因主要为充血性心力衰竭,生存率为60%,治疗组大鼠生存率为80%(P<0.01),而正常对照组全部存活。①反转录-聚合酶链反应检测结果显示,心衰模型组左室心肌中过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达较正常对照组降低(P<0.01),治疗组过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达高于心衰模型组,而低于正常对照组(P<0.01)。②治疗组较心衰模型组相比,心功能各项指标改善;血浆肿瘤坏死因子α、血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平降低(P<0.01)。③苦味酸天狼星红染色显示心衰模型组左室胶原增多,心肌间质明显纤维化。与正常对照组比较,心衰模型组胶原容积分数增加,差异显著(P<0.01);而治疗组心肌纤维化程度减轻,胶原容积分数较心衰模型组降低(P<0.01)。④苏木精-伊红染色显示心衰模型组心肌组织受损,呈心肌病样改变;正常对照组肌纤维排列整齐,无心肌纤维的破坏,而治疗组部分逆转其病理损害。结论:过氧化物酶体增殖物激活受体γ在充血性心力衰竭左室心肌中表达下调;过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体罗格列酮通过上调并激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ而部分逆转充血性心力衰竭左室重构,改善心功能。     

清热燥湿化瘀法对实验大鼠脂质代谢及炎症因子的影响

目的 观察清热燥湿化瘀中药复方预防性给药对实验性高脂血症大鼠血清脂质含量及炎症因子的影响,探讨清热燥湿化瘀法防治动脉粥样硬化的可能机制.方法 50只大鼠被随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、氟伐他汀对照组(西药组,n=15)、清热燥湿化瘀中药复方组(中药组,n=15).用高脂饲料连续喂养12周制备大鼠高脂血症模型.于第5周开始预防性给予模型大鼠氟伐他汀或中药复方灌胃,连用8周.12周实验结束时取大鼠腹主动脉血,分别测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及C-反应蛋白(CRP)的水平.结果 与对照组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C、CRP含量均明显升高,HDL-C含量明显降低(P均<0.01).中药组血清TC、TG、LDL-C、CRP水平均明显低于模型组,HDL-C明显高于模型组(P均<0.01),血脂水平与西药组比较差异无统计学意义,但血清CRP水平较西药组下降更明显(P<0.05).结论 清热燥湿化瘀法方药能有效调节实验大鼠血脂代谢紊乱,抑制炎症因子CRP的水平,改善血管内皮细胞功能,从而发挥抑制动脉粥样硬化的作用.     

地尔硫Zhuo对心肌缺血再灌注损伤NO MDA变化曲线及超微结构的影响

目的检测地尔硫     

硫氮酮对心肌缺血再灌注损伤内皮功能的保护作用

目的研究硫氮酮对心肌缺血再灌注(MIR)损伤内皮功能的保护作用.方法将48只大鼠制成心肌MIR模型,并随机分成假手术组、MIR组、硫氮酮组.各组分别于缺血前、缺血30 min、再灌注90 min、180 min检测乳酸脱氢酶(LDH),肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB),一氧化氮(NO),丙二醛(MDA)含量.结果①MIR组与假手术组相比,LDH、CK-MB升高,NO下降,MDA上升.②硫氮酮组与MIR组相比,LDH、CK-MB降低(P＜0.05和P＜0.01),NO活性增加(P＜0.05),MDA产生减少(P＜0.05).结论硫氮酮能减轻脂质过氧化程度,改善内皮功能,保护心肌MIR损伤.