Axin1调节骨骼肌GLUT4蛋白表达的作用研究

目的：探讨体轴发育抑制因子（Axin1）调节骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达的作用及其机制。方法：利用RNAi干扰的Axin1腺病毒（Ad-siAxin1）感染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低Axin1,荧光显微镜和MTS实验明确Ad-siAxin1最佳感染浓度和时间。分别用携带绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-GFP）、Ad-siAxin1、载体质粒（vector）和Axin1质粒转染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低或过表达Axin1蛋白,Western印迹检测Axin1、端锚聚合酶蛋白（TNKS）和GLUT4蛋白水平。结果：荧光显微镜和MTS实验结果显示,在C2C12小鼠骨骼肌细胞中Ad-siAxin1作用的最佳浓度和时间分别为160μL和48 h。Western印迹结果显示,与Ad-GFP组相比,Ad-siAxin1组中Axin1蛋白降低（t=6.746,P<0.01）。Ad-siAxin1组TNKS蛋白水平降低（t=4.019,P<0.05）,GLUT4蛋白水平下调（t=3.248,P<0.05）。与vector组相比,转染Axin1质粒后,Axin1蛋白水平上...     

药物中微量元素的测定

目的：检测营养制剂善存片中各种微量元素的含量,并就样品前处理及测定进行方法学探讨。方法：采用３ 种不同方法处理善存片样品,然后用电感耦合等离子体发射光谱仪优化测试条件后,测定铁、镁、锌、锰、铬、钼、钙等１１ 种微量元素的含量。结果：各种微量元素的含量与药盒所标数据基本一致。结论：确定了先用硝酸消化,再用石墨炉灰化为最佳样品处理方法。测定时选４ 点作标准工作曲线,既不会使操作太复杂,又能保证测定的精密度     

老年人血脂水平与载脂蛋白E等位基因的关系

为了解老年人血脂水平与载脂蛋白Ｅ基因多态性的关系，并探讨载脂蛋白Ｅ等位基因对老年人血脂水平的内在影响，利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法测定了载脂蛋白Ｅ基因型，并用酶学方法对其血脂水平进行了测定。结果发现存在五种不同基因型：与携有ε３等位基因的人群相比，携有ε４等位基因的人群倾向具有较高的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平以及较低的甘油三酯水平，而携有ε２等位基因的人群则有较低的低密度脂蛋白胆固醇水平以及较高的     

HBV感染者HBsAg和HBsAb同时阳性的血清学异常模式的研究

目的：分析HBsAg和HBsAb同时阳性的慢性HBV感染者的血清学模式,分析病毒Pre-S/S区基因序列变异或缺失情况对其进行基因分型,并探讨其临床意义。方法采用酶联免疫分析法筛选出HBsAg和HBsAb同时阳性的慢性HBV感染者共100例,采用化学发光微粒子免疫分析确认,用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测其HBV DNA含量,其中HBV DNA阳性者60例, HBV DNA阴性者40例。将60例HBsAg和HBsAb同时阳性的慢性HBV感染者作为实验组,并选取60例HBsAg（＋）HBsAb（-）的慢性乙型肝炎患者作为对照组。采用PCR法体外扩增两组患者HBV Pre-S/S基因序列并测序分析,根据测序结果对患者的基因型进行分型,比较两组Pre-S/S基因变异情况,结合临床资料探讨其临床意义。结果实验组患者中B基因型19例、C基因型41例,对照组患者中B基因型18例、C基因型42例。实验组B基因型患者的年龄[（50.0＆#177;16.3）岁]大于C基因型[（34.0＆#177;13.4）岁],差异具有统计学意义（F=31.6,P=0.0432）。实验组B基因型和C基因型的S区氨基酸突变率分别为10.8%和21.6%,差异具有统计学意义（F=24.31,P=0.046）。同样为C基因型的两组患者,实验组S区氨基酸突变为41.6%,显著大于对照组的氨基酸突变率（3.2%）,差异具有统计学意义（F=85.68,P=0.006）。结论 HBsAg（＋）且HBsAb（＋）并伴有HBeAg（＋）的患者血清中HBV DNA的阳性率显著增高。HBsAg和HBsAb同时阳性的现象与pre-S/S区基因突变具有显著关性,且C基因型的突变率高于B基因型患者的突变率。     

委陵菜黄酮衍生物促进L6细胞GLUT4的转位活性

目的:筛选出具有促进骨骼肌细胞L6表面GLUT4转位活性的委陵菜黄酮衍生物。方法:将实验细胞分成空白对照组,胰岛素组(以胰岛素刺激20 min)和黄酮衍生物组(加不同衍生物刺激24 h),用类ELISA法测定细胞膜上GLUT4的量。结果:对黄酮衍生物1~14影响L6大鼠骨骼肌细胞GLUT4转运的实验结果表明,衍生物1、5、6、8~11在10μg/mL作用浓度下,促进GLUT4转位的量分别为空白对照组的(3.60±0.30)倍、(3.66±0.26)倍、(2.87±0.49)倍、(3.97±0.37)倍、(2.82±0.45)倍、(3.37±0.67)倍、(4.43±0.61)倍(P<0.05)。化合物6与胰岛素叠加作用为空白对照组的(4.31±0.22)倍(P<0.05)。结论:委陵菜黄酮衍生物促进GLUT4转位的作用为首次报道。黄酮衍生物1、5、6、8~11有明显地促进L6表面GLUT4转位的作用;化合物6与胰岛素有协同作用。     

脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响

目的：观察脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响。方法：缺氧（5％CO2、85％N2、10％H2或200μmol／L CoCl2）处理小鼠3T3-L1脂肪细胞,制备条件培养基孵育小鼠骨骼肌细胞。通过对胰岛素信号通路中关键蛋白的磷酸化水平和葡萄糖转运子4（GLUT4）转位得以检测骨骼肌胰岛素作用的改变。结果：缺氧处理的3T3-L1脂肪细胞条件培养基抑制骨骼肌胰岛素信号通路,其中胰岛素受体底物10RS1Set307）磷酸化水平呈显著增高,相反蛋白激酶B（AktSer473）磷酸化水平呈显著下降,最终显著抑制了胰岛素刺激的GLUT4myc转位（p〈0．05）。结论：抑制胰岛素刺激的GLUT4myc转位,其机制与IRSt的Ser307的磷酸化水平升高和Akt的Ser473的磷酸化水平降低有关。     

DNP增加胰岛素刺激骨骼肌细胞摄取葡萄糖作用的机制研究

目的：观察2,4二硝基酚（DNP）增加胰岛素作用的机制。方法：分别测定在胰岛素或,和DNP不同孵育条件下骨骼肌细胞AMP激活的蛋白激酶（AMPK）、胰岛素受体底物（IRS1）、蛋白激酶B（AKT）及其底物（AS160）和核糖体S6蛋白激酶（S6K）的磷酸化水平。结果：相对于基础组,DNP刺激AMPK的磷酸化,胰岛素刺激Akt和AS160的磷酸化,DNP可以使胰岛素刺激的IRS1丝氨酸磷酸化降低并增加Akt和AS160的磷酸化。结论：DNP刺激L6骨骼肌细胞株（L6-GLUT4myc）成肌细胞AMPK的活性,降低S6K活性,从而降低IRSI丝氨酸磷酸化,增加胰岛素信号分子Akt和AS160的活性,提示DNP可以通过刺激AMPK,增加胰岛素刺激葡萄糖摄取的作用。     

急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF的变化及意义

目的：探讨血浆生物标志物检查诊断急性脑梗死患者的特异性和敏感度,以辅助临床诊断和病情随访。方法分别测定150例急性脑梗死患者（观察组）和50例健康查体者（对照组）的血浆同型半胱氨酸（ Hcy）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、可溶性血栓调节蛋白（sTM）、超敏C反应蛋白（hs－CRP）及血管性假血友病因子（vWF）水平。结果观察组血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF水平均显著高于对照组（ P均＜0．05）。根据ROC曲线得出当Hcy临界值为9．11μmol／L时诊断急性脑梗死的敏感性为95．2％、特异性为76％,eNOS临界值为437．30μmol／L时诊断的敏感性为79％、特异性为96％,sTM临界值为7．43μmol／L时诊断的敏感性为75．2％、特异性为96％,hs－CRP临界值为3．38 mg／L时诊断的敏感性为81．9％、特异性为90％,vWF临界值为194．85 ng／mL时诊断的敏感性为75．2％、特异性为80％。结论血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF水平可作为急性脑梗死诊断的辅助指标。     

nPKC和cPKC调节骨骼肌葡萄糖转运体4型转位的研究

目的:探讨新颖型蛋白激酶C(nPKC)和传统型蛋白激酶C(cPKC)调节骨骼肌葡萄糖转运体4型(GLUT4)转位的作用.方法:C2C12GLUT4myc肌管分为Basal组、PMA组(PMA孵育)、Go6983+PMA组(Go6983预孵育,再与PMA共孵育)、G06976+PMA组(G06976预孵育,再与PMA共孵育)、PMA24 h+PMA组(PMA预孵育24 h后,PMA孵育)和PMA24 h+Go6976+PMA组(PMA预孵育24 h,Go6976预孵育后,Go6976和PMA共孵育),应用吸光度分析法测定细胞表面的GLUT4myc水平.结果:与Basal组相比,PMA组、G06976+PMA组、PMA24 h+PMA组细胞表面GLUT4myc转位明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),与PMA组相比,G06983+PMA组、G06976+PMA组、PMA24 h+PMA组和PMA24 h+Go6976+PMA组细胞表面GLUT4myc转位明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:PMA激活PKC,增强骨骼肌GLUT4转位;抑制nPKC或cPKC的活性可降低PMA刺激的骨骼肌GLUT4转位;激活nPKC或cPKC可调节骨骼肌GLUT4转位.