SR-B1依赖PI3K-Akt-eNOS信号途径的激活介导HDL诱导内皮细胞PGI2释放

目的肾脏衰老相关的功能下降是心血管事件和死亡的独立预测因素。这项研究旨在评估健康中国人正常衰老有关的肾脏功能和心脏舒张功能下降及其相互关系。方法本研究为横断面研究,2003年在沈阳、北京和大连筛选出852例30～98岁的健康人(没有心血管疾病,肾小球滤过率>60 mL/min/1.73 m2),利用肾小球滤过率(eGFR,简化MDRD公式)和血清胱蛋白酶抑制剂C(CYSC)评价肾脏功能,心脏超声指标二尖瓣环E峰与A峰比值(E/A)评价心脏舒张功能。所有研究对象分别按照eGFR和CYSC的四分位数分为4组。在本研究中,心脏舒张功能下降(低E/A比值)定义为小于25百分位数(0.784)的E/A比值。结果血清CYSC和eGFR与年龄显着相关(eGFR:r=-0.102,P<0.01;CYSC:r=0.544,P<0.01)。年龄与E/A比值呈显著负相关(r=-0.381P<0.01)。二元logistic回归分析显示,与肾功最好的对照组相比,血清CYSC第二,第三和第四组未调整的OR值(95%可信限)分别为2.49(1.403～4.419),4.177(2.368～7.37)和7.614(4.387～13.217...     

高密度脂蛋白相关1磷酸鞘氨醇对心血管的保护作用及其信号机制

<正>动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理学基础,大量的研究证明高密度脂蛋白(HDL)水平与动脉粥样硬化发生呈负相关,HDL-C已成为冠状动脉疾病的重要预测因素。HDL的组成中,蛋白质与脂质各占50%。1磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)是磷脂代谢的脂质介质,研究表明S1P既可以作为胞内第二信使,又可以作为细胞间信号分子,通过与细胞表面受体(S1P receptor,S1PR)结合而发挥     

HSP27对雌激素诱导的内皮保护作用的影响

目的观察雌二醇(E2)及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬对HUVEC HSP27表达的影响,以及HSP27 siRNA对雌激素内皮保护作用的影响。方法分别用不同浓度(10-9、10-8和10-7mol/L)E2处理HUVEC 24 h;10-7mol/L雌二醇及10-6mol/L他莫昔芬处理HUVEC 24 h。以空白组为阴性对照,RT-PCR和Western blot检测HSP27的表达。分别转染HSP27 siRNA和mockRNA48 h后,再与10-7mol/L E2孵育24 h。空白组做为阴性对照,RT-PCR和Western blot检测HSP27的表达;分别用硝酸还原酶法和ELISA检测培养基中NO和内皮素1的含量;ELISA检测细胞表面细胞间黏附分子1(ICAM-1)的含量。结果 E2处理HUVEC可上调HSP27的mRNA和蛋白表达水平,并且具有剂量依赖性,表达的峰值在10-7mol/L。10-6mol/L他莫昔芬可阻断10-7mol/L E2的作用。RT-PCR、Western blot检测HSP27 siRNA序列能明显下调HSP27mRNA及蛋白的表达。HU-VEC转染HSP27 siRNA4...     

HSP27对雌激素诱导的内皮保护作用的影响

目的研究HDL通过1-磷酸鞘鞍醇受体途径上调COX-2表达的细胞内信号机制。方法培养人脐静脉内皮细胞,HDL不同时间和浓度处理,qPCR和WB检测COX-2、CREB和Sphk2表达情况。人脐静脉内皮细胞转染SiRNASphk2后,qPCR和WB检测HDL对COX-2表达情况。人脐静脉内皮细胞用采用JTE(抑制S1P2)、PTX(抑制Gi/o)、SB203580(抑制p38MAPK)、Stau-rosporine(抑制PKC)及U0126(抑制ERK1/2)抑制剂处理后,qPCR和WB检测HDL对COX-2的表达情况。免疫共沉淀检测p-CREB和Sphk2结合情况,用激光共聚焦进行定位观察。结果 HDL呈时间和剂量上调COX-2、SphK2表达及CREB磷酸化,转染SphK2siRNA后COX-2表达水平下调;采用JTE(抑制S1P2),SB203580(抑制P38MAPK),Staurosporine(抑制PKC),U0126(抑制ERK1/2)抑制剂处理后,HDL对COX-2的上调作用明显抑制;免疫共沉淀和激光共聚焦显示p-CREB和SphK2结合。结论 HDL通过S1P2-G i/o-PKC(P38MA...     

SR-B1依赖PI3K-Akt-eNOS信号途径的激活介导HDL诱导内皮细胞PGI2释放

目的观察SR-B1介导HDL诱导内皮细胞PGI2生成的信号激活途径。方法分别转染pcDNA3.1(-)-hSR-B1重组表达质粒或SR-B1 siRNA48 h后,30 mg/L HDL孵育24 h;30 mg/L apoA1与ECV304内皮细胞共孵育24 h;分别用25μmol/L PI3K特异性抑制剂LY294002或50μmol/L eNOS特异性抑制剂L-NAME预处理3 h后,30 mg/L HDL孵育24 h。空白组作为阴性对照,30 mg/L HDL处理组为阳性对照,RT-PCR和/(或)Western blot检测PGIS、COX-2、CREB及磷酸化CREB的表达;免疫细胞化学法检测内皮细胞中COX-2蛋白的表达;ELISA法检测培养液中6-keto-PGF1α的生成。结果不管是mRNA水平还是蛋白水平,在过表达SR-B1后,HDL均不能显著上调COX-2的表达,然而,有趣地是siRNA沉默SR-B1后,可见HDL诱导内皮细胞COX-2的表达明显减少,且免疫细胞化学检测能得到相似的结果。30 mg/L apoA1孵育内皮细胞24 h后,COX-2表达亦出现增加。但是,不管是HDL单独处理还...     

微小RNA与动脉粥样硬化

<正>微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一种内源性调节因子,最近几年发现其在调节动脉粥样硬化的发生过程中占有重要的地位。许多有关miRNAs的研究涉及血管内皮细胞的衰老和功能紊乱、血管平滑肌细胞的迁移和增殖、动脉脉粥样硬化相关炎症以及脂质代谢和胆固醇逆向转运等方面。我们介绍miRNAs在动脉粥样硬化炎症、血管环境变化和脂质代谢紊乱方面起到的调节作用,并对今后动脉粥样硬化miRNAs的相关临床治疗进行可行性分析和展望。     

血清1-磷酸鞘氨醇与冠状动脉斑块负荷的相关性研究

目的:探讨血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)与冠状动脉斑块负荷的相关性。方法:入选行冠状动脉造影的15例急性冠脉综合征(急性冠脉综合征组)和15例稳定性心绞痛(稳定性心绞痛组)患者,用血管内超声虚拟组织成像技术(VH-IVUS)对斑块的组织成分进行定性及定量分析。高效液相色谱法测定血清S1P、高密度脂蛋白(HDL)-S1P和non-HDL-S1P水平,探讨冠状动脉斑块负荷与血清S1P、HDL-S1P和non-HDL-S1P水平的相关性。结果:急性冠脉综合征组斑块负荷[(85.25±6.8%)分对(54.19±11.35%)分,P0.01]、血清S1P水平[(385.74±105.19) pmol/mL对(213.22±90.82) pmol/mL,P0.01]、血清non-HDL-S1P水平[(40.38±15.52) pmol/mL对(15.45±5.33) pmol/mL,P0.01]明显高于稳定性心绞痛组;血清HDL-S1P水平明显低于稳定性心绞痛组[(201.54±70.6) pmol/mL对(254.56±28.53) pmol/mL,P0.01]。冠状动脉斑块负荷与S1P、non-HDL-S1P独立相关。结论:S1P、non-HDL-S1P水平升高与冠状动脉斑块负荷严重程度密切相关,与冠状动脉的严重程度一致。     

阿托伐他汀在1-磷酸鞘氨醇诱导心肌细胞肥大中的作用

目的研究阿托伐他汀对1-磷酸鞘氨醇(S1P)诱导乳鼠心肌细胞肥大反应中的作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,测定心肌细胞体积和[3H]-亮氨酸掺入量作为心肌细胞肥大的指标。乳鼠心肌细胞使用不同浓度的阿托伐他汀(atorvastatin),加入S1P,[3H]-亮氨酸掺入量作为心肌细胞蛋白摄取量;分别用qPCR和Western blot法检测心肌细胞的β-肌球蛋白(β-MHC)的mRNA和蛋白质表达水平;用qPCR检测心肌细胞的心房利钠肽(ANF)的mRNA表达水平。结果与S1P组比较,阿托伐他汀10μmol/L处理组[3H]-亮氨酸掺入率减少[(234.89%±31.23%)比(342.23%±31.60%),P=0.205],β-MHC的mRNA和蛋白表达水平下降[(0.59±0.14)比(0.84±0.20),P=0.318]和[(0.55±0.09)比(0.98±0.15),P=0.223],ANF的mRNA表达水平降低[(0.51±0.13)比(0.76±0.19),P=0.445];与S1P组比较,阿托伐他汀20μmol/L处理组[3H]-亮氨酸掺入率明显减少[(189.07%±17.69%)比(342.23%±31.60%),P<0.01],β-MHC的mRNA和蛋白表达水平显著下降[(0.50±0.12)比(0.84±0.20),P<0.01]和[(0.35±0.08)比(0.98±0.15),P<0.01],ANF的mRNA水平明显降低[(0.47±0.12)比(0.76±0.19),P<0.01]。结论阿托伐他汀可抑制S1P诱导的心肌细胞肥大,并可减少S1P诱导的β-MHC和ANF表达。     

血清高敏C反应蛋白和1-磷酸鞘氨醇水平与冠心病严重程度的相关性研究

目的探讨血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)与冠心病的相关性。方法将122例行冠状动脉造影的患者分为对照组(59例)、冠心病组(63例),用Leaman积分系统对冠状动脉狭窄程度进行评分。采用多因素分析方法探讨冠心病及Leaman积分与血清hs-CRP、血浆中S1P、HDL相关S1P和non-HDL相关S1P含量因素的相关性。结果 (1)冠心病组hs-CRP水平明显高于对照组[(7.10±3.37)mg/L比(1.91±2.12)mg/L,P=0.014];冠心病组Leaman评分值明显高于对照组[(10.45±5.25)分比(3.25±2.35)分,P<0.01];(2)冠心病组血浆S1P水平高于对照组[(415.90±211.08)pmol/ml比(326.45±153.76)pmol/ml,P=0.046],冠心病组HDL-S1P水平与对照组比较,差异无统计学意义[(209.38±142.57)pmol/ml比(225.01±102.00)pmol/ml,P=0.072],冠心病组non-HDL-S1P水平明显高于对照组[(61.41±73.65)pmol/ml和(7.61±6.76)pmol/ml,P<0.01];(3)Logistic回归分析显示,吸烟、糖尿病、TG、LDL-C、non-HDL-S1P和hs-CRP与冠心病独立相关,而HDL-S1P与冠心病无相关性;(4)冠状动脉Leaman积分的多元逐步回归分析显示,non-HDL-S1P和hs-CRP与冠状动脉积分独立相关,其中以hs-CRP最为明显。结论 hs-CRP和nonHDL相关S1P为冠心病的独立危险因素,且与冠心病严重程度独立相关。