谷氨酰胺体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞线粒体途径凋亡作用的研究

目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO_2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高(P0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义(P0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。     

长链非编码RNA与组蛋白乙酰化关系的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs)是一类长度大于200个核苷酸且不具有编码蛋白质功能的RNA分子,参与基因转录调控,包括染色质修饰和直接的转录调控表达,同时也调控转录后事件。组蛋白乙酰化是表观遗传修饰形式,lncRNAs参与组蛋白乙酰化的调节过程,促进或抑制多种肿瘤的进展。本文就lncRNAs与组蛋白乙酰化关系的研究进展作一综述。     

非酒精性脂肪性肝病的治疗进展

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一类包含了脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎等疾病的临床病理综合征,现已成为慢性肝病最主要的病因,其与肝脏脂质代谢紊乱和炎症密切相关,并可进展为肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌,严重威胁人类的健康。在未来数十年,NAFLD将取代病毒性肝炎成为肝脏移植的最常见适应证。目前针对NAFLD的治疗药物仍在动物或临床研究阶段,尚无已批准上市的特异性治疗药物,其治疗主要是改善生活方式和运动治疗。本文主要就NAFLD的发病机制及治疗,特别是NAFLD的药物治疗进展进行综述,为NAFLD的临床治疗提供相关的参考。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭大鼠肝细胞线粒体的保护作用*

目的探讨ACY1215对急性肝衰竭大鼠肝细胞线粒体损伤的保护作用及其相关机制。方法24只SD大鼠被随机分为对照组、模型组和ACY1215处理组。以脂多糖（LPS）联合D-氨基半乳糖（D-Gal）注射建立急性肝衰竭大鼠模型,药物干预组在建立急性肝衰竭组前2 h给予ACY1215（10 mg·kg-1）注射。造模48 h后处死动物,在光镜及电镜下观察肝组织学变化,采用梯度离心法分离肝细胞线粒体,采用荧光酶标法测定线粒体膜通透性转换孔（MPTP）,采用ELISA法测定线粒体细胞色素C（Cytc）含量,常规测定血清ALT、AST和总胆红素（TBil）水平。结果与模型组比,ACY1215处理组肝组织学破坏程度减轻,电镜显示肝细胞线粒体肿胀减轻;急性肝衰竭模型组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平分别为（5114.1±252.6） U/L、（2909.8±31.7） U/L和（97.6±1.4）μmol/L,均显著高于正常组大鼠的（56.0±4.4） U/L、（130.4±12.6） U/L和（7.4±0.7）μmol （P均<0.05）,但处理组ALT、AST和TBIL水平均较模型组减低,分别为（799.4±11.2） U/L、（401.0±5.6） U/L和（28.0±1.2） μmol /L（P均<0.05）;急性肝衰竭模型组大鼠MPTP相对荧光值（RFU）为（96822.0±16733.1） RFU/mgprot,较正常组大鼠的（156300.0±24043.3）RFU/mgprot显著升高（P<0.05）,也显著高于处理组的（127150.0±12337.6） RFU/mgprot（P<0.05）;模型组大鼠线粒体内Cytc为（0.17±0.03） ng/mgprot,较正常组大鼠线粒体内的（0.39±0.10） ng/mgprot显著减少（P<0.05）,也低于处理组的（0.32±0.06） ng/mgprot （P<0.05）。结论ACY1215对急性肝衰竭大鼠肝脏线粒体有一定的保护作用,其作用机制可能是通过抑制肝细胞线粒体MPTP的开放,从而减少了Cytc进入到细胞质内有关。     

急性肝衰竭小鼠血清与组织中PTX3、HBP、PCT及 IL-6、IL-1β、TNF-α的变化及诊断价值

目的 探讨急性肝衰竭(acute liver failure, ALF)小鼠血清与组织中正五聚蛋白3(pentraxin 3, PTX3)、肝素结合蛋白(heparin-binding protein, HBP)、降钙素原(procalcitonin, PCT)及白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平的变化及诊断价值。方法 将32只雄性小鼠随机分为正常组和模型组,每组16只。用D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭模型。12h后处死小鼠,检测两组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝脏病理形态学改变。采用ELISA法检测小鼠血清及肝脏、脾脏、小肠组织中的PTX3、HBP、PCT及IL-6、IL-1β、TNF-α的水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的诊断价值。结果 ALF模型组小鼠较正常组小鼠肝组织结构破坏程度明显增加,炎性细胞浸润明显增多;血清 AST、ALT、TBIL 水平显著升高。模型组小鼠血清及肝脏、小肠组织中PTX3与正常小鼠比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但脾脏组织中PTX3水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组小鼠比较,模型组小鼠血清及肝脏、脾脏、小肠组织中HBP、PCT及IL-6、IL-1β、TNF-α均有升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析PCT的诊断效能最高,其曲线下面积(area under the curve, AUC)为0.941,cut-off值为35.2pg/ml,敏感度为93.8%,特异性为87.5%;PTX3其次,AUC为0.859,cut-off值为475.4pg/ml,敏感度为81.3%,特异性为87.5%;TNF-α的诊断效能最低,其AUC为0.695,cut-off值为54.5pg/ml,敏感度为68.8%,特异性为62.5%。结论 PTX3、HBP、PCT可用于早期急性肝衰竭的辅助诊断,且较IL-6、IL-1β、TNF-α诊断效能高。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响

目的观察D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型小鼠在组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215的作用下,炎症相关指标降钙素原(procalcitonin,PCT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、微小RNA-141(microRNA-141,miR-141)的表达情况。方法将18只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)、ALF模型组(n=6)、ACY1215干预组(n=6),ALF模型组和ACY1215干预组采用D-Gal N/LPS联合诱导ALF小鼠模型,其中ACY1215干预组在造模前2 h腹腔注射ACY1215。24 h后检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝组织结构变化并检测肝组织PCT、HMGB1、miR-141的表达情况。结果与ALF模型组相比,ACY1215干预组小鼠肝组织结构破坏程度明显减轻,炎性细胞浸润明显减少;血清AST、ALT、TBIL水平显著下降,肝组织HMGB1及PCT表达显著降低,miR-141表达显著升高。结论 ACY1215对ALF小鼠肝组织具有保护作用,可能与其能减轻肝组织炎症反应有关。     

索非布韦联合α-干扰素治疗慢性丙型肝炎患者疗效比较的Meta分析

目的 评价索非布韦（SOF）联合α-干扰素（PEG-IFN）与索非布韦或干扰素治疗慢性丙型肝炎患者的疗效。 方法 检索 PubMed、Cochrane Library、中国期刊全文数据库（CNKI）、中国生物医学文献数据库（CBM）、万方数据库及中文科技期刊全文数据库（VIP）等数据库,纳入索非布韦联合干扰素与索非布韦或干扰素治疗慢性丙型肝炎患者的临床随机对照试验研究。采用Revman 5.2软件进行Meta分析。 结果 纳入9篇文献,共827例慢性丙型肝炎患者,其中5篇研究比较了SOF/PEG-IFN/利巴韦林（RBV）治疗的339例与SOF/RBV治疗的269例患者,4篇研究比较了SOF/PEG-IFN/RBV治疗的105例与PEG-IFN/RBV治疗的114例患者。Mate分析结果显示,SOF/PEG-IFN/RBV组快速病毒学应答率（RVR）显著高于SOF/RBV组（86.7% 对71.7%,P=0.002）,与PEG-IFN/RBV组比为91.7% 对32.3%（P=0.006）;SOF/PEG-IFN/RBV组持续病毒学应答率（SVR）显著高于PEG-IFN/RBV组（85.7%对44.2%,P<0.00001）,但与SOF/RBV组比,差异无统计学意义（89% 对74.1%,P=0.16）;SOF/PEG-IFN/RBV组头疼、疲劳、恶心、皮疹、肌痛、食欲减退、关节痛、发热、贫血发生率较SOF/RBV组高,且差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 索非布韦联合α-干扰素和利巴韦林治疗相比索非布韦联合利巴韦林或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者可获得更高的快速病毒学应答率,而不良反应发生率也较索非布韦联合利巴韦林治疗组高。     

长效干扰素与普通干扰素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效的meta分析

目的 评价长效干扰素与普通干扰素治疗HBeAg+慢性乙型肝炎患者的疗效.方法 检索Medline、Embase、EBSCO、中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数字化期刊全文数据库,纳入长效干扰素(PEG-IFN-ɑ-2a或者PEG-IFN-ɑ-2b)与普通干扰素比较治疗HBeAg+慢性乙型肝炎的随机对照研究,并追查了所有纳入文献的参考文献,检索年限均为建库至2016年7月1日.由2位研究者独立进行文献筛选、资料提取及纳入研究的偏倚风险评价后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析.结果 最终纳入13项研究1263例,其中长效干扰素组616例,普通干扰素组647例.Mate分析结果显示,长效干扰素组在治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎24周和48周时观察ALT复常率、HBV-DNA转阴率、HBeAg转阴率三个指标均优于普通干扰素组(P<0.05),在12周时长效干扰素组HBV-DNA转阴率较普通干扰素组高(Z=2.19,P=0.03),而ALT复常率、HBeAg转阴率方面与普通干扰素组比较差异无统计学意义(P>0.05);在治疗12周和24周时,两组所检测的HBsAg阴转率差异无统计学意义(P>0.05),而疗程延长至48周时,长效干扰素组HBsAg阴转率高于普通干扰素组(Z=2.34,P=0.02);在HBeAg血清转换率方面,疗程12周和48周差异均无统计学意义(P<0.05),而在24周时,长效干扰素组优于普通干扰素组(Z=2.90,P=0.004).结论 在治疗24周、48周时,长效干扰素(PEG-IFN-ɑ-2a或者PEG-IFN-ɑ-2b)治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者在ALT复常率、HBV-DNA转阴率和HBeAg转阴率三个指标均优于普通干扰素;仅48周疗程时长效干扰素HBsAg阴转率较普通干扰素组高;仅24周疗程时长效干扰素HBeAg血清转换率较高.受纳入研究数量和质量限制,上述结论仍需开展高质量研究加以验证.     

急性肝衰竭小鼠血脑屏障结构和水通道蛋白4变化的研究

目的观察急性肝衰竭小鼠脑水肿时血脑屏障结构和脑组织水通道蛋白4(AQP4)的改变。方法本实验于2016年1—12月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验,共纳入SPF级C57BL/6小鼠30只,随机数字表法分为模型组和对照组各15只,模型组采用脂多糖及D-氨基半乳糖联合诱导小鼠急性肝衰竭模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。24 h后观察小鼠肝组织变化检测血清ALT、AST、血氨水平,血脑屏障结构和脑组织水通道蛋白4的表达水平。结果模型组出现明显病理性肝组织损害,对照组无显著变化;与对照组比较,模型组血清ALT、AST和血氨水平显著升高(t=5.075、6.338、5.718,P<0.05)。模型组脑组织血脑屏障结构轻度异常,电镜下可观察到微血管周围星形胶质细胞足突明显肿胀、内皮细胞出现大量囊泡和液泡,内皮细胞紧密连接打开。脑组织AQP4蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(t=-0.961,P=0.397)。结论急性肝衰竭脑水肿时血脑屏障结构存在轻微改变,血管源性水肿机制参与急性肝衰竭脑水肿,但脑组织中AQP4蛋白水平未出现明显改变。