甲型血友病胚胎植入前遗传学诊断成功一例

1临床资 育龄夫妇（女方29岁）因甲型血友病（HaemophiliaA）生育风险，于2011年11月1日到南京医科大学第一附属医院生殖医学科门诊咨询。女方弟弟患有甲型血友病，基因检测发现F8 c.3385 C＞T半合子突变，女方及其母亲为F8 c.3385 C＞T杂合突变携带者，家系图及突变位点见图1。     

二代测序技术与临床应用

近年来随着二代测序技术的蓬勃发展,使得高通量的基因测序技术日臻成熟,逐渐从常规基础科研实验室的应用转入临床医学的应用,测序技术原理的不断创新和工程材料应用瓶颈的不断突破使得高通量的基因序列读取趋于个体化需求的应用。阐述二代测序技术发展历程,针对目前国际市场上较为先进并占主流优势的测序产品进行简要描述,详细介绍Life Tech公司推出的Ion Torrent测序平台,阐明其基本技术原理和操作过程及相应的性能特点,列举了二代测序技术在临床应用方面的具体信息,并对二代测序技术在临床应用方面的前景进行了展望。广泛的应用前景和各类挑战并存是当下二代测序技术应用于临床的现实特征。     

单细胞微阵列比较基因组杂交技术在胚胎植入前遗传学筛查中的应用

目的 建立利用单细胞微阵列比较基因组杂交(array CGH,aCGH)技术进行胚胎植入前遗传学筛查(PGS)技术平台,并应用aCGH技术进行PGS获得持续妊娠. 方法 采集废弃胚胎来源卵裂球10个,核型正常男性(46,XY)淋巴细胞3个,通过单细胞全基因组扩增后,利用aCGH技术进行染色体非整倍体分析;在此基础上,将aCGH技术应用于临床一例反复流产患者. 结果 3个淋巴细胞及9个废胚来源卵裂球的全基因组扩增成功,1个废胚来源卵裂球扩增失败,扩增成功的样本通过aCGH检测后均获得明确的诊断,3个淋巴细胞分析结果与已知核型一致;临床病例5个胚胎活检的单卵裂球均得到明确诊断,移植1枚正常整倍体胚胎后获得临床持续妊娠. 结论 在胚胎植入前遗传学筛查中,单细胞aCGH技术能全面地评估胚胎染色体组情况,可应用于临床PGS.     

一个X连锁少汗型外胚层发育不良家系的EDA基因c.822G＞T突变分析

目的 对1个少汗型外胚层发育不良家系进行ectodysplasin A(EDA)基因序列分析,为家系成员提供准确病因诊断和遗传咨询.方法 抽取家系中先证者及有血缘关系的家系成员外周静脉血,常规提取基因组DNA,应用聚合酶链式反应、DNA测序技术分析EDA基因编码区序列;选择103名无血缘关系正常人作为对照.结果 在先证者及另1例男性患者的EDA基因第7外显子区域检出c.822G＞T突变,导致第274位的色氨酸变成了半胱氨酸(p.W274C),该突变位点未见文献报道.家系中的5名女性成员中检出c.822G＞T杂合突变,正常男性成员及103名正常对照均不存在此突变.结论 EDA基因c.822 G＞T突变为导致该家系成员少汗型外胚层发育不良的致病突变.     

多囊卵巢综合征患者的体质量指数和脂代谢水平对促性腺激素释放激素拮抗剂方案妊娠结局的影响北大核心CSCD

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者体质量指数(BMI)和脂代谢水平对促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-A)方案体外受精/卵胞质内单精子显微注射(IVF/ICSI)周期卵巢反应、胚胎质量及妊娠结局的影响。方法纳入以GnRH-A方案行第一个IVF/ICSI取卵周期的762例PCOS患者,对其新鲜胚胎移植周期及后继的冻融胚胎移植周期行回顾性分析。探讨BMI、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平与卵巢反应、胚胎质量和新鲜胚胎/冻融胚胎移植周期临床妊娠结局的关系。结果①BMI与TG、LDL呈正相关,与HDL呈负相关(P<0.05);②卵巢反应和胚胎质量相关指标与BMI、TG、LDL呈负相关(P<0.05),与HDL呈正相关(P<0.05);③多因素logistic回归分析结果显示BMI是冻融囊胚移植周期活产的危险因素;HDL是新鲜胚胎移植周期临床妊娠和活产的保护因素,也是卵裂期胚胎冻融胚胎移植周期活产的保护因素;LDL和TC是冻融胚胎移植周期临床妊娠的危险因素。结论对于PCOS患者而言,过高的BMI(BMI≥28 kg/m2)和异常的脂代谢水平对GnRH-A促排卵方案的卵巢反应、胚胎质量和临床妊娠结局均具有不良影响。     

NLRP7基因变异导致的3个复发性葡萄胎家系的分析

目的探讨复发性葡萄胎家系的分子遗传学病因, 为再生育提供精准指导。方法采集5个独立家系中有复发性葡萄胎病史的女性患者及其家族成员的外周血样, 提取基因组DNA, 用全外显子组测序分析筛查NLRP7、KHDC3L等相关基因的变异情况, 对候选变异通过Sanger测序和实时荧光定量PCR进行验证及家系溯源。结果全外显子组测序在3个家系中检测到了NLRP7基因变异, 其中先证者P1及其姐姐均携带NLRP7基因第1 ～ 4外显子的纯合缺失, 先证者P2携带NLRP7 c.939delG(p.Q314Sfs*6)pat和c.1533delG(p.N512Tfs*4)mat复合杂合变异, 先证者P4携带NLRP7 c.2389₂390delTC(p.A798Qfs*6)pat和c.2165A>G(p.D722G)mat复合杂合变异, 上述变异根据美国医学遗传学与基因组学学会致病性标准均判断为致病或可能致病。其中NLRP7基因第1 ～ 4外显子缺失、c.939delG(p.Q314Sfs*6)、c.1533delG(p.N512Tfs*4)和c.2389₂     

胚胎植入前遗传学检测在性染色体异常夫妇助孕中的应用

目的：分析伴有性染色体异常不孕夫妇行植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing,PGT）的结局,探讨夫妻双方之一性染色体异常导致胚胎性染色体异常的风险,以及PGT在相关人群中的应用价值。方法：回顾性分析南京医科大学第一附属医院生殖医学科伴有性染色体异常同时行PGT治疗的夫妇的胚胎染色体检测结果以及胚胎移植结局。PGT策略采用囊胚期活检,活检材料经过全基因组扩增后,采用全基因组低深度测序分析染色体拷贝数改变。在复苏周期中,统计可移植胚胎移植后的临床妊娠结局。结果：在性染色体异常的23对夫妇（其中包括47,XYY及其嵌合体6例、47,XXY及其嵌合体2例、47,XXX 4例、45,X嵌合体8例、女性X染色体节段性缺失3例）的24个促排卵周期中,共获得可检测囊胚77枚,明确诊断76枚（98.70%）,其中40枚（52.63%）为整倍体可移植胚胎,13枚（17.10%）非整倍体嵌合体胚胎,23枚（30.26%）为非整倍体不可移植胚胎。在3例X染色体节段性缺失患者中所有异常胚胎均为X染色体节段性缺失,而其他性染色体数目异常患者中共发现3枚（3.95%）性染色体嵌合体非整倍体胚胎。在18个复苏移植周期中,共获得9例（50.00%）健康活产。结论：性染色体数目非整倍体异常夫妇的胚胎性染色体异常风险较低,在辅助生殖技术助孕过程中PGT并不是必需的治疗方案;而性染色体节段性非整倍体夫妇胚胎性染色体异常风险较高,结合卵巢功能情况以及在患者充分知情同意的情况下,可酌情考虑PGT,降低后代性染色体异常风险。     

微阵列比较基因组杂交技术在染色体易位胚胎植入前遗传学诊断中的应用

目的：评估微阵列比较基因组杂交（aCGH）技术在染色体相互平衡易位和罗氏易位胚胎植入前遗传学诊断（PGD）中的应用效果。方法：卵裂期胚胎活检单个卵裂球，用于全基因组扩增后，利用aCGH技术进行染色体组拷贝数变异检测，选择染色体平衡的胚胎移植，随访跟踪临床结局。结果：90例临床PGD取卵周期中，相互平衡易位58例，罗氏易位32例，共活检卵裂期胚胎528枚，明确诊断518枚（98.1%），总体单胚胎移植临床持续妊娠率46.8%。其中，相互平衡易位新鲜周期移植持续妊娠率38.7%，冷冻周期持续妊娠率45.0%；罗氏易位冷冻周期持续妊娠率61.5%。结论：aCGH技术在染色体易位PGD中应用能够获得理想的临床妊娠结局。     

分子遗传学检查诊断Crigler-Najjar综合征Ⅱ型3例

目的 探讨采用分子遗传学检查诊断Crigler-Najjar综合征Ⅱ型的方法。方法 在本科收治的3例高间接胆红素血症患者,抽取外周静脉血,提取基因组DNA,应用PCR法扩增尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1基因（UGT1A1）所含5个外显子及其侧翼序列,进行DNA直接测序。结果 3例患者均检出UGT1A1基因5号外显子存在c. 1456 T>G（p.Y486D）纯合突变;Y486D位于第5外显子上,使1456位胸腺嘧啶（T）突变为鸟嘌呤（G）,导致486位氨基酸由酪氨酸（Tyr）变为天冬氨酸（Asp）。结论 当临床上高度怀疑Crigler-Najjar综合征Ⅱ型时,应尽早行分子遗传学检查,确定其基因突变位点,以明确诊断。