1例2型糖尿病肾病患者的护理

正糖尿病肾病是糖尿病最主要的微血管并发症之一,是目前引起终末期肾病的主要原因[1]。国外研究资料显示,20年以上病程的糖尿病肾病患者发展为ESRD(End stage renal disease)的发生率为400/1000人/年[2]。我国糖尿病肾病的患病率呈快速增长趋势,2009~2012年我国2型糖尿病患者的糖尿病肾病患病率在社区患者中为30%~50%[3],在住院患者中为40%左     

HIV/AIDS合并毕氏肠微孢子虫感染的研究进展

毕氏肠微孢子虫是一种新发机会性感染病原体。人类免疫缺陷病毒（HIV）/获得性免疫缺陷综合征（AIDS）合并毕氏肠微孢子虫感染可导致患者长期持续性腹泻,甚至死亡。近年来HIV/AIDS合并感染毕氏肠微孢子虫的情况引起了研究者的广泛关注,本文就其研究进展作一综述,为毕氏肠微孢子虫感染的预防和控制提供参考。     

基于TPI基因的城市污水中蓝氏贾第鞭毛虫的分子鉴定

目的对哈尔滨市污水处理厂原水中的蓝氏贾第鞭毛虫进行分子鉴定。方法收集哈尔滨市污水处理厂原水样,提取基因组DNA,巢式PCR扩增蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,通过序列分析确定蓝氏贾第鞭毛虫的集聚体类型和亚型,并进行同源性分析。结果从哈尔滨市污水处理厂原水DNA提取物中扩增出蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,经分子鉴定为蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,其序列与文献报道人源蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII序列(AB516351,FJ560570,EF688021)的同源性为100%。结论哈尔滨市污水处理厂原水中存在蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,威胁当地居民健康。     

安氏隐孢子虫在HCT-8和AGS细胞中增殖效果的研究

目的比较安氏隐孢子虫（Cryptosporidium andersoni）在人结肠腺癌（human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8）细胞和人胃腺癌（humanstomachadenocarcinoma,AGS）细胞中的增殖。方法取培养至对数生长期的HCT-8细胞和AGS细胞,接种于6孔培养板中,待细胞生长融合至60％～70％时,加入2．5×10^5个安氏隐孢子虫卵囊,培养至24h和48h,以Giemsa染色法和Real—time PCR技术检测虫体在细胞中的增殖。结果Giemsa染色法观察24h和48h HCT-8细胞中虫体数量均高于ACTS细胞（P〈0.05）。Real—time PCR技术测得24h和48h HCT-8细胞中安氏隐孢子虫卵囊COWP基因拷贝数均高于AGS细胞（P〈0.05）。结论与AGS细胞相比,以HCT-8细胞作为体外感染模型更利于安氏隐孢子虫的增殖。     

细粒棘球蚴原头节源外泌体体外刺激髓源抑制性细胞极化的研究

目的 探究细粒棘球蚴原头节源外泌体体外刺激髓源抑制性细胞(MDSC)向M2型巨噬细胞极化的动态变化,并探讨二者协同发挥免疫抑制作用的生物学意义。方法体外培养细粒棘球蚴原头节并收集培养上清,超速离心上清获得外泌体。透射电镜观察外泌体形态,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测外泌体蛋白CD9和烯醇化酶的表达。取3只健康BALB/c小鼠,制备股骨髓系细胞,刺激分化为MDSC后,分为实验组、阳性对照组和阴性对照组。于6孔板中每孔加入1×10~6个MDSC细胞,实验组、阳性对照组和阴性对照组分别加入20μl外泌体(5μg)、白细胞介素-4 (IL-4)(40 ng)和RPMI 1640培养基进行刺激。于刺激24、 48和72 h后,分别收集3组MDSC,采用流式细胞术分析单核型MDSC (M-MDSC)的细胞比例变化及其M2型巨噬细胞分子标志F4/80和CD206的表达情况。采用GraphPad Prism 8.0.2统计学软件进行统计学分析。结果透射电镜下可见细粒棘球蚴原头节源外泌体为圆形的膜状结构,直径集中在60～90 nm。Western blotting分析结果显示,外...     

日本血吸虫HGPRT重组抗原与不同佐剂联合应用对小鼠免疫保护作用的研究

目的:观察日本血吸虫(大陆株)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl-transferase, HGPRT)重组抗原(reSjc HGPRT)与ISA206或弗氏佐剂联合免疫对小鼠诱导抗日本血吸虫感染的保护作用. 方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:reSjc HGPRT加ISA206佐剂免疫组、reSjc HGPRT加弗氏佐剂组、ISA206佐剂对照组、弗氏佐剂对照组和感染对照组.20 μg重组抗原和ISA206或弗氏佐剂乳化后小鼠项背部多点皮下注射,共免疫3次,每次间隔2周.佐剂对照组小鼠仅注射ISA206或弗氏佐剂和生理盐水,感染对照组不注射任何重组抗原或生理盐水.于末次免疫后3周,每只小鼠经腹部皮肤感染(30±1)条日本血吸虫尾蚴,6周后剖杀小鼠,门脉灌注收集成虫,计数成虫数、雌雄合抱数和小鼠肝组织虫卵数.在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清,用ELISA检测血清中特异性IgG抗体. 结果:重组抗原加ISA206佐剂或弗氏佐剂免疫组均诱导小鼠产生特异性IgG抗体应答,与感染对照组和弗氏佐剂对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);诱导小鼠产生的减虫率、减雌雄合抱率和肝组织减卵率分别为53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%,与感染对照组和2种佐剂对照组相比均有统计学意义(P<0.05).结论:reSjc HGPRT与ISA206或弗氏佐剂联合免疫,可诱导小鼠产生抗血吸虫感染保护作用.     

日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠特异性DNA序列的克隆

目的比较日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠特异性DNA序列的差异。方法提取东方田鼠、SD大鼠、C57BL/6小鼠和KM鼠肝脏DNA,根据东方田鼠特异性DNA序列片段(GenBank登录号:AF277394)设计引物,PCR方法扩增以上4种鼠的基因组特异性DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定特异条带,纯化后的PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,进行DNA序列分析。结果 PCR扩增东方田鼠、SD大鼠DNA分别得到520bp左右的特异扩增片段,同源性为99%。C57BL/6小鼠和KM鼠没有扩增出此特异片段。结论日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠之间特异性DNA序列有高度的同源性。     

临床腹泻患者贾第虫感染和分子特征研究

目的初步了解临床腹泻患者贾第虫的感染情况及分子特征。方法以2014年5-7月上海市某医院临床腹泻患者为研究对象,收集粪便样本95份,进行卢戈氏碘液染色,用光学显微镜检查贾第虫包囊。采用巢式PCR法扩增贾第虫磷酸丙糖异构酶基因(tpi),扩增产物测序后用BLAST、Clustal X 1.83和MEGA6.0软件进行同源性和系统发育分析。结果形态学观察发现1例腹泻患者感染贾第虫,阳性检出率为1.05%。其粪便样本经卢戈氏碘液染色后显微镜下可见清晰的包囊。对样本进行PCR检测,扩增片段大小约为530 bp,测序结果显示为贾第虫。经序列比对分析,并以tpi基因构建系统发育树,分析鉴定该分离株为集聚体B,与已报道的人源贾第虫分离株(KF271445)同源性为100%。结论临床腹泻患者中存在贾第虫感染,本研究结果可为了解贾第虫基因型特点及贾第虫病流行病学研究提供参考。     

环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫的研究

目的 用环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫.方法 提取牛粪中隐孢子虫卵囊DNA.根据隐孢子虫18S rRNA序列及环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的原理,设计4条隐孢子虫特异引物,利用LAMP检测牛粪中隐孢子虫卵囊DNA和蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以正常牛粪DNA为阴性对照.LAMP产物经SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性,对LAMP产物进行电泳分析,观察其特征条带的情况.结果隐孢子虫卵囊DNA检测管经显色后时不再呈绿色,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA呈棕色.隐孢子虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA无扩增产物.结论 LAMP方法敏感、特异、简便,可用于检测牛粪中的隐孢子虫.     

日本血吸虫HGPRT编码基因的克隆与表达

目的 克隆和表达日本血吸虫大陆株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)编码基因。方法依据GenBank日本血吸虫HGPRT开放阅读框(ORF)设计一对引物，上游和下游引物分别引入BamH I和Sal I酶切位点。以日本血吸虫大陆株（安徽株，简称Sjc-A）成虫总RNA为模板，反转录PCR (RT-PCR)扩增日本血吸虫大陆株HGPRT(SjcHGPRT)全长编码基因。经双酶切纯化的PCR产物与同样双酶切纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接，构建重组质粒pET28a-SjcHGPRT，转化感受态E．coli BL21，并大量扩增。重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定。pET28a-SjcHGPRT/E．coli BL21I程菌用IPTG诱导表达，重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析。结果 SjcHGPRT编码基因RT-PCR产物约700 bp，构建的pET28a-SjcHGPRT重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小的基因片段，根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与报道的日本血吸虫大陆株（湖南株，简称Sjc-H）及曼氏血吸虫HGPRT分别有99%和83%的同源性。获得的重组蛋白(reSjcHGPRT)经SDS-PAGE和Western blot分析，分子量约30 kDa，并能被抗His-G-HRP抗体、日本血吸虫感染小鼠血清和日本血吸虫病人血清识别。结论 日本血吸虫大陆株(安徽株)HGPRT表达获得成功，并获得了纯化重组蛋白，为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础。