重庆地区2004年12月～2005年4月犬狂犬病流行毒株的检测

目的 确诊重庆地区2004年12月至2005年4月发生的临床疑似犬狂犬病，分离病毒并分析病毒株的进化关系。方法 RT，PCR检测重庆地区的5例临床疑似狂犬脑组织样品，乳鼠脑内接种试验分离病毒，分析5个流行毒株间及其与占各基因型代表毒株的遗传衍化关系。结果 5例临床样品均含有狂犬病毒，分离获得了相应的5株流行毒，CQ／ws-1，aQ／wx-1，aQ／w1-1，CQ／fj-1和CQ／qj-1。N基因核酸序列和推导氨基酸序列的同源性分析表明所获毒株均归属于基因Ⅰ型狂犬病毒：在基因Ⅰ型的同源性比较中，分离毒株CQ／qj-1与中国狂犬病人用疫苗株3aG型最低，为83．1％，氨基酸水平同源性最低为90．2％（3aG与CQ／ws-1）。分离毒株间低低为97．5％。同源性分析结果还显示出，尽管CQ／WS-1，CQ／wx-1和CQ／fj-1分别来自紧密相邻的3个地区，可是CQ／fj-1却与其它的两个毒株的基因水平同源性最高仅为95．6％。结论 5例临床疑似病例均为犬狂犬病，新分离的动物狂犬病毒流行毒株均为基因Ⅰ型，而且毒株间存在遗传变异。     

在家蝇中表达人胰岛素基因的研究

目的 研究人胰岛素基因在家蝇中的表达，建立家蝇生物反应器。方法 以家蝇作为实验动物，利用BAEKON6000型基因转移仪将胰岛素基因组基因导入家蝇进行实验研究。收集家蝇新产卵(1—1．5h内)，将环状质粒pCMV—mINS、pCMV-ImINS、pEF1α—mINS、pEF1α—ImINS以10μg/ml浓度分别与新采集的家蝇卵混合后进行电转移。经人工孵化发育为成虫(R)，G418(3．0mg／ml)筛选Fl代，待F1代发育至成虫并产卵后，采用PCR、Tricine-SDS-PAGE和Western-blot技术对F2代蝇蛆进行整合与表达水平检测。结果 四种质粒均能在家蝇中表达人胰岛素，表达量各占蝇蛆总蛋白0．207％、0．357％、0．473％和0．831％。结论 人胰岛素基因能够在蝇蛆中表达，即蝇蛆机体可对人胰岛素原进行翻译后加工。     

人胰岛素基因重组杆状病毒在家蝇中表达的研究

目的:利用杆状病毒表达系统进行人胰岛素基因在家蝇中表达的研究.方法:用携带有人胰岛素基因的重组杆状病毒感染家蝇幼虫,用放射免疫技术、Tricine-SDS-PAGE和Western-blot技术对蝇蛆胰岛素表达水平进行检测.结果:重组的杆状病毒感染家蝇幼虫后,蝇蛆中有人胰岛素的表达,表达量为37.401μIU/ml,占蝇蛆总蛋白的0.583%.结论:利用杆状病毒表达系统可以在家蝇蝇蛆中表达人胰岛素.     

传染性非典型肺炎限制性内切酶检测方法的研究

目的建立一种对传染性非典型肺炎，又称严重急性呼吸综合征（SARS）准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的S-cDNA核苷酸片段，并在该片段中确定特异性的酶切位点，使检测方法的准确性得以保证。结论与传统检测方法比较，限制性内切酶分析法完全克服了检测中非特异性结果的产生，使检测结果准确可靠。     

动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定

目的N2A细胞和BHK-21细胞用于我国动物狂犬病流行街毒株的分离培养。方法狂犬病发病动物脑组织悬液首先脑内接种乳鼠,再采取Nonclon Delta Tube内置盖玻片法从鼠脑中进行病毒分离培养,脑组织悬液接种细胞后96h,利用直接荧光抗体实验检测盖玻片上的病毒感染细胞,判定病毒是否在细胞上增殖;通过测定不同毒株细胞培养上清中的病毒滴度对病毒进行鉴定。结果22份狂犬病病犬、猪和牛的脑组织接种乳鼠后均获得了鼠脑分离毒,将鼠脑毒接种N2A细胞分离获得了22株病毒,接种BHK-21细胞却只分离获得20株病毒。不同病毒株第三代细胞培养上清中的病毒滴度从10-1TCID50/100μL到10-3.6TCID50/100μL。结论N2A细胞对狂犬病病毒街毒株的敏感性高于BHK-21细胞,且不同的病毒株对细胞的适应能力不同。实验分离获得的病毒细胞适应株丰富了我国狂犬病病毒毒种资源,为进一步研究不同病毒分离株的抗原性差异奠定基础。