在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白

为深入研究人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ—１）衣壳蛋白ｐ２４的结构与功能,制备抗Ｐ２４单克隆抗体及其诊断抗原,将编码ＨＩＶ－１ｐ２４蛋白的ｐ２４ｇａｇ基因片段,克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的Ｔ７噬菌体启动子下游,构建成了重组表达质粒ｐＥＴ２４,并使ｐ２４ｇａｇ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达,其产物为３０ｋＤａ的ｓ１０－ｐ２４融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的３８．４％。重组Ｐ２４蛋白均抗ｐ２４单克隆抗体及ＨＩＶ—１阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原性,对研究开发ＡＩＤＳ诊断试剂和基因工程疫苗具有重要意义。     

人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选

目的　构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体。方法　用RTPCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。结果　17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目的片段;经数次电转化构建了库容为693×107的抗体库,滴度为8×1014PFU/ml,Fab基因重组率为40%。以单抗捕获的甲肝抗原淘洗3轮,出现特异性富集;阳性克隆经直接ELISA和竞争抑制性ELISA实验证实具有良好的抗甲肝抗原特异性,无交叉反应性。结论　成功构建了抗体组合文库,从中获得抗甲肝抗原的特异性人抗体。     

人源抗HAV噬菌体抗体的筛选及基因序列分析

目的获得人源性甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）抗体。方法应用抗体捕获的ＨＡＶ，从本实验室构建的噬菌体抗体组合文库中筛选与ＨＡＶ病毒有结台活性的人源噬菌体抗体（Ｆａｂ段），用夹心ＥＬＩＳＡ和竞争抑制实验测定其活性及特异性。结果筛选出与ＨＡＶ病毒有结台活性和特异性的人源抗体。序列分析表明重链基因为ＩｇＧＩ亚类，可变区属ＶＨＩ亚群，是ＤＰ８８、Ｄ３—３和ＪＨＳ胚系基因片段的重排产物；轻链基因属ＶＸｌｌｌ亚群，是ＤＰＸ２２和Ｊｋ４胚系基因的重排产物。结论应用抗体捕获抗原的方法，能从该抗体库筛选出ＨＡＶ抗体，也说明该抗体库的构建是成功的。     

反转录病毒Gag蛋白的自我装配

反转录病毒基因组的５′端是Ｇａｇ基因，它的下游为ｐｏｌ和ｅｎｖ基因。不管病毒的其它成分是否存在，Ｇａｇ蛋白均能够自我装配病毒样粒子（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅ，ＶＬＰ）甚至在部分氨基酸残基缺失，插入或连接外源基因后，Ｇａｇ蛋白的这种自我装配能力仍不丧失。已经发现，劳斯肉瘤病毒（ＲＳＶ）的Ｇａｇ蛋白的这种自我装配功能与其自身的三个装配域（ａｓｓｅｍｂｌｙｄｏｍａｉｎ，ＡＤ）有关，Ｇａｇ蛋白     

轻链替换提高抗HBsAg噬菌体抗体的结合力

通过轻链替换,提高抗ＨＢＳＡｄｅ菌体抗体的结合力。方法将ＰＣＲ扩增的人抗体轻链基因,插至已克隆有人源抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体重链Ｆｄ基因的噬菌粒中,构建成轻链替换文库,通过亲和淘洗,筛选与Ｆｄ相匹配的轻链基因。结果经亲和淘洗后,筛选出了与Ｆｄ相匹配的轻链基因,链替换后,噬菌体抗体（ＰｈＡｂ）的ＥＬＩＳＡ光吸收值（Ａ）从０．４３±０．０９提高到最高为１．２４±０．１０。抑制实验证实所筛选出来的ｎｈａｂ具有抗ＨＢｓＡｚ的特异性。分析了ＥＬＩＳＡ光吸收值（Ａ）最高的５株噬菌体抗体的轻链基因序列,结果表明,３株ｋ链的碱基序列一致,属ＶｋⅢ亚群;２株链的基因序列相同,均属ＶＩ亚群。结论结果表明经链替换的噬菌体抗体结合力得到了较大提高,并具有与ＨＢｓＡｇ合的特异性。     

用Mega-primer PCR方法获得抗HBsAg dsFv抗体重链可变区基因

目前已发展的定点突变方法主要有盒式突变、寡核苷酸引物突变及ＰＣＲ突变等[1]。常用的ＰＣＲ定点突变法,需要四种扩增引物,共进行三轮ＰＣＲ反应,操作步骤繁琐。近来出现的ｍｅｇａｐｒｉｍｅｒＰＣＲ方法[2]克服了这一缺点。我们设计了三条引物,建立了ｍｅｇａｐｒｉｖ...     

Fv抗体研究的新进展—二硫键稳定性Fv抗体（dsFv）

单链抗体虽然有诸多优点，如分子的通过血管壁，穿透实体瘤，但其稳定性差，亲和力较低。近年来出现了二硫键稳定性Ｆｖ抗体，就是在ＶＨ和ＶＬ间通过形成二硫键来稳定Ｆｖ片段，ｄｓＦｖ极大地提高了Ｆｖ片段的稳定性和亲和力，不仅继承了ｓｃＦｖ的优点，也弥补了其缺点，从而极大地提高了ｄｓＦｖ和ｄｓＦｖ－免疫毒素在临床上的应用价值。     

Fv抗体研究的新进展──二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)

单链抗体（ｓｃＦｖ）虽然有诸多优点，如分子小，易通过血管壁，穿透实体瘤，但其稳定性差，亲和力较低。近年来出现了二硫键稳定性Ｆｖ抗体（ｄｓＦｖ），就是在ＶＨ和ＶＬ间通过形成二硫键来稳定Ｆｖ片段，ｄｓＦｖ极大地提高了Ｆｖ片段的稳定性和亲和力，不仅继承了ｓｃＦｖ的优点，也弥补了其缺点，从而极大地提高了ｄｓＦｖ和ｄｓＦｖ－免疫毒素在临床上的应用价值。     

人源基因工程抗体技术的进展与展望

鼠源抗体对人的异源免疫原性问题直接导致了人源抗体技术的出现,经过十几年的研究,该技术日臻成熟.嵌合和人源化抗体的研究巳经取得了很大的成功,巳有产品应用于临床,但在实践中有其局限性.噬菌体抗体库体系的创建,用细菌克隆代替B细胞克隆,是人源抗体技术又一次突破性进展.噬菌体抗体操作简便,可以从中筛选出包括中和抗体、毒素抗体、多糖抗体、自身抗体、抗全细胞抗体在内的各种高亲和力抗体.转基因动物抗体技术于叨年代初出现,技术还不大成熟,目前人们只能将一部分人的Ig全套胚系基因转移到动物体内,但发展前景不可限量.     

Selection of humanized antibody against HBsAg and analysis of gene encoding its heavy chain

Themethod'combinatorlalimmunoglobulinlibraries'forthegenerationofmAbhasbeendevelopedsinceitwasreportedfirstlyin19891'.Asthe'phagedisplaytechnology'2comingout,'phageantibodylibrary'waswidelyusedtoisolatespecificantibodyfragmentsfromlargeantibodygenepoolsbyphagedisplay.Comparingwithconventionalhybridomatechnology,humanphageantibodytechnologyhasmoreadvantages:1.Theprocessisefficient,andarelativelylargenumberofantibodiesareproduced.2.Ithasprovenpossibletomimicthekeyfeaturesofthehumoralimmunesyste…