云南省猪戊型肝炎病毒全基因组扩增及进化分析

目的 对猪戊型肝炎病毒全长基因组进行扩增,分析其进化关系,为HEV的感染性克隆研究奠定基础。方法 利用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)和RACE技术对猪粪便中HEV样品进行全基因组扩增,利用DNAStar和MEGA4.0软件进行同源性比较和进化树分析。结果 RT-nPCR方法扩增出HEV的 5段目的基因序列和RACE技术扩增出HEV的 5'和3'端,序列比对结果正确,HEV全长扩增成功。同源性分析显示其与新疆株(GU119961)同源性较高(96.1%)。系统进化树显示该病毒属于基因4型h亚型猪HEV。结论 HEV全基因组序列扩增成功,为深入研究HEV奠定基础。     

戊型肝炎病毒感染性克隆的构建及应用进展

感染性克隆技术是在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即在病毒的遗传物质水平研究其复制机制和致病机理,并拯救病毒。构建戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)感染性克隆是对 HEV 实施反向遗传操作技术的前提和基础,文章综述了 HEV 感染性克隆的构建策略、方法及应用。     

戊型肝炎病毒感染HepG2细胞蛋白质组学研究

比较人肝癌细胞系HepG2细胞感染和未感染HEV后细胞内蛋白质表达谱的变化,为初步探索HEV在宿主细胞内感染机制及致病机理奠定基础。方法 RT-nPCR和免疫荧光确认HEV感染HepG2细胞后,利用同位素标记相对和绝对定量( isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术比较HEV感染组与未感染组HepG2细胞蛋白质表达差异。结果 HEV感染导致328种蛋白发生变化,与未感染组相比,262种蛋白表达上调,66种蛋白表达下调。结论 HEV感染HepG2细胞导致大量蛋白差异表达,功能预测表明这些蛋白涉及到宿主的物质代谢、细胞信号转导、免疫蛋白、细胞骨架成分等方面,为今后研究HEV感染机制和致病机理奠定基础。