小反刍兽疫病毒西藏株血凝素蛋白和融合蛋白兔多克隆抗体的制备与初步应用北大核心CSCD

目的 对小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants Virus,PPRV)强毒株China/Tibet/Geg/07-30血凝素蛋白H和融合蛋白F的主要抗原表位区进行原核表达,并制备兔抗PPRV H和F蛋白多克隆抗体。方法 根据GenBank上公布的PPRV China/Tibet/Geg/07-30 (GenBank FJ905304.1)株H和F蛋白的基因序列构建重组质粒pET30a(+)-H和PGEX-4T-1-F,并将重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达目的蛋白,经亲和层析纯化后与弗氏佐剂混合免疫新西兰大白兔,收集血清,制备多克隆抗体,利用间接免疫荧光(IFA)方法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体与抗原的结合能力。结果 分别对重组质粒进行酶切,pET30a(+)-H切出约1 653 bp的PPRV H基因,PGEX-4T-1-F切出约为1 245 bp的PPRV F基因,与预期一致。经IPTG诱导后重组蛋白以包涵体的形式表达,Western blot检测原核表达的两个目的蛋白均能与标签抗体发生反应,ELISA检测原核蛋白抗原能与相应多克隆抗体相结合,间接免疫荧光试验显示兔多克隆抗体能够识别表达PPRV H蛋白的重组狂犬病病毒(rSRV9-H)和表达PPRV F蛋白的重组狂犬病病毒(rSRV9-F)。结论 利用原核表达系统成功表达出具有抗原性的PPRV China/Tibet/Geg/07-30株F和H蛋白,并制备了高特异的兔多克隆抗体,为建立针对PPRV H、F蛋白抗原的鉴定及亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

H5与H7亚型流感流行株嵌合病毒株的拯救及初步鉴定北大核心CSCD

目的探讨H5与H7亚型流感流行株嵌合病毒的拯救并进行鉴定,为新型流感疫苗的研发奠定基础。方法采用脂质体转染的方法,首先依照A型流感病毒A/PR/8/34 HA嵌合片段的设计对H5 2.3.4.4谱系HA和H7亚型的HA进行改造,利用反向遗传技术拯救A/B型嵌合减毒株,对拯救成功的病毒株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定病毒滴度;从中选择H5亚型嵌合减毒株以10~4EID_(50)/50μl的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察、记录小鼠的体重变化及死亡情况,并测定攻毒后第3 d及第6 d小鼠肺脏病毒复制能力。结果成功拯救出2种A/B型嵌合减毒株,分别命名为rA/B-H5-NS110和rA/B-H7-NS110,测序显示两株嵌合减毒株的序列与预期一致,并在电镜下观察到了流感病毒样粒子。rA/B-H5-NS110和rA/B-H7-NS110株在MDCK细胞上的病毒滴度均为10^(4.50)TCID_(50)/ml;在鸡胚上的病毒滴度rA/B-H5-NS110为10^(5.25)EID_(50)/ml,rA/B-H7-NS110株为10^(5.44)EID_(50)/ml。小鼠致病性实验中H5亚型嵌合病毒感染组小鼠与对照组相比体重无明显下降,攻毒后小鼠存活率100%;攻毒后第3 d可在小鼠肺脏内检测到嵌合减毒株rA/B-H5-NS110的轻微复制,第6 d时未检测到病毒复制。结论成功地拯救出2株包含有H5 2.3.4.4谱系HA基因以及H7N9流感病毒HA基因的嵌合减毒株,为B型流感病毒包装机制的研究以及新型流感疫苗的研发提供了新的思路。