皂角皂苷对SMMC-7721细胞Caspase-3表达的影响

目的 探讨皂角皂苷对应用阿霉素后SMMC-7721细胞Caspase-3表达的影响.方法 MTT法检测单独应用阿霉素(DOX)或阿霉素与皂角皂苷联合作用的SMMC-7721细胞的生存率;RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达.结果 与对照组相比,单独应用阿霉素组细胞的生存率未见明显变化;而阿霉素与皂角皂苷联合作用组细胞存活率显著降低,Caspase-3 mRNA表达增高.结论 皂角皂苷可能通过上调Caspase-3水平进而诱导SMMC-7721细胞的凋亡,增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.     

蛛网膜下腔出血大鼠脑干组织谷氨酸转运体的表达及尼莫地平的影响

目的探讨谷氨酸转运体（EAATs）在蛛网膜下腔出血（ShH）大鼠脑干表达的动态变化。方法采用枕大池二次注血法建立Wistar大鼠SAH模型。应用颅多普勒超声检测和RT-PCR方法,分别观察蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉血流速度和谷氨酸转运体在脑干的变化。结果①超声检测显示与对照组相比,枕大池注血大鼠第1天基底动脉血流加快,第7天达到高峰,第14天血流速度下降,第21天未见明显变化,表明大鼠出现了脑血管痉挛（CVS）。尼莫地平给药组大鼠的基底动脉血流速度均比SAH组血流速度慢。②RT-PCR结果显示在第1天和7天SAH模型组脑干EAAT-1、EAAT-2和EAAT-3mRNA的表达下降,第14天上升,其对应的尼莫地平治疗组EAAT1—3mRNA的表达均高于SAH组;而在第21天SAH模型组与其对应的尼莫地平治疗组均上升,但两者相比未见明显差异。结论尼莫地平可以明显的减轻SAH发生后CVS的程度,并使EAAT-1、EAAT-2和EAAT-3mRNA的表达水平增高,提示EAAT-1、EAAT-2和EAAT-3可能参与了大鼠CVS的形成。     

皂角皂苷诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 探讨皂角皂苷诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究.方法 MTT法检测单独应用阿霉素(DOX)或阿霉素与皂角皂苷联合作用的SMMC-7721细胞的生存率;RT-PCR检测bcl-2 mRNA表达;Western blotting检测bcl-2蛋白的表达.结果 与对照组相比,单独应用组细胞的生存率未见明显变化;而阿霉素与皂角皂苷联合作用组细胞存活率显著降低,bcl-2 mRNA表达降低;bcl-2蛋白表达下降.结论 皂角皂苷可能通过下调bcl-2水平进而诱导SMMC-7721细胞的凋亡,增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.     

稀有原人参三醇型皂苷的生物转化研究进展

人参是传统的名贵中药,其主要活性成分为人参皂苷,对心血管、肿瘤、中枢神经系统等疾病有显著的疗效。特别是原人参三醇(PPT)型皂苷Rh_1具有良好的抗炎、抗过敏、提高记忆力等活性。人参皂苷Rh_1仅微量地存在于人参、三七、西洋参中。生物转化方法制备稀有人参皂苷已成为一种有效的途径。综述利用生物转化方法对PPT型人参皂苷进行转化,生成稀有人参皂苷的研究进展,以期为稀有人参皂苷的进一步开发利用提供参考。     

Ther mot oga nea polit ana葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及其酶学性质

[摘 要] 目的: 从新阿波罗栖热袍菌Ther mot oga nea polit a na(DS M 4359) 中克隆葡萄糖苷酶基因, 并将其转化进大肠杆菌中进行体外表达, 研究重组酶的酶学性质。方法: 以Ther mot oga nea polit a na基因组DNA为模板, 根据该基因序列设计引物, 采用PCR法扩增出葡萄糖苷酶基因, 将其连接到p E T- 28a(+) 载体上, 转化入E. coli BL21(DE3) 宿主菌中。经I P T G诱导体外高效表达。研究重组酶的最适反应温度、p H值和底物特异性。结果:PCR扩增得到825 bp的片段, 编码274个氨基酸, 并连接到载体p E T- 28a(+) 上, 成功转化到宿主菌中, 并在体外进行了高效表达。丙烯酰胺凝胶电泳, 目标蛋白相对分子质量约为63 000。重组酶的最适反应温度为75oС, 在70oС ～85oС范围内仍保持60 %以上活力。最适反应p H值为5. 0, 在p H 3. 0 ～6. 0范围内仍能保持70 %以上活力。最适底物为海藻糖, 其次为龙胆二糖, 其他糖苷键连接的二糖的活力均很低或没有活力。结论:Ther mot oga nea polit a na(DS M 4359) 中葡萄糖苷酶基因成功克隆并表达于大肠杆菌中。葡萄糖苷酶能特异性水解α-(1 →1) 糖苷键。     

Thermotoga neapolitana 葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及其酶学性质

目的：从新阿波罗栖热袍菌Thermotoga neapolitana (DSM 4359)中克隆葡萄糖苷酶基因,并将其转化进大肠杆菌中进行体外表达,研究重组酶的酶学性质。方法：以Thermotoga neapolitana基因组DNA为模板,根据该基因序列设计引物,采用PCR法扩增出葡萄糖苷酶基因,将其连接到pET-28a(+)载体上,转化入E.coli BL21 (DE3 )宿主菌中。经IPTG诱导体外高效表达。研究重组酶的最适反应温度、pH值和底物特异性。结果：PCR扩增得到825 bp的片段,编码274个氨基酸,并连接到载体pET-28a(+)上,成功转化到宿主菌中,并在体外进行了高效表达。丙烯酰胺凝胶电泳,目标蛋白相对分子质量约为63 000。重组酶的最适反应温度为75℃,在70℃～85℃范围内仍保持60%以上活力。最适反应pH值为5.0,在pH 3.0～6.0范围内仍能保持70%以上活力。最适底物为海藻糖,其次为龙胆二糖,其他糖苷键连接的二糖的活力均很低或没有活力。结论： Thermotoga neapolitana (DSM 4359)中葡萄糖苷酶基因成功克隆并表达于大肠杆菌中。葡萄糖苷酶能特异性水解α- (1→1)糖苷键。     

转化人参皂苷菌株的筛选及发酵工艺优化

目的 筛选得到β-葡萄糖苷酶活性较高的食品级菌种发酵人参,以期提高二醇型皂苷转化率,并优化发酵体系,验证发酵过程的可控性。方法 以人参为原料,利用4种常见食品级发酵菌即酿酒酵母菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌和肠膜明串珠菌肠膜亚种发酵人参。通过对菌种代谢产生的β-葡萄糖苷酶酶活力的初筛及二醇型主要人参皂苷转化实验的复筛,最终确定以复合菌(植物乳杆菌+肠膜明串珠菌)作为人参发酵菌株。设置液料比、接菌量、发酵天数的单因素试验,利用响应面法优化人参发酵体系。结果 优化后的最佳发酵条件为液料比2∶1(mL/g)、接菌量为4%、发酵天数为23 d。在最佳工艺下,得到二醇型人参皂苷(Rb1+Rb2+Rb3+Rc)转化率为62.17%。结论 筛选得到的发酵菌株可以更好地将人参中二醇型主要皂苷转化为药理功效更强的次级皂苷,并优化了发酵体系,达到了经济、安全、高效的目的,极大地提高了人参的应用价值。     

天然酪氨酸酶抑制剂的种类及其对酪氨酸酶抑制作用的研究进展

本文综述了几类天然植物来源的化合物,如黄酮及其衍生物、有机酸、苷类、萜类、醛类、酯类和香豆素类等天然产物成分对酪氨酸酶活力的抑制作用及其机制。其抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和混合型抑制。同类化合物的抑制能力与化合物活性基团的种类、数量和位置有关联。许多化合物对酪氨酸酶的抑制能力强于当前的标准抑制剂。本文重点阐述了几类天然成分对酪氨酸酶的抑制机理,为酪氨酸酶在各个领域的应用提供依据。     

蛛网膜下腔出血大鼠模型脑干组织谷氨酸受体表达的动态变化

目的 探讨亲代谢型谷氨酸受体 (mGluR) 在蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑干表达的动态变化.方法 采用枕大池二次注血法建立Wistar大鼠SAH模型.应用颅多普勒超声检测和RT-PCR方法分别观察蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉血流速度和谷氨酸受体在脑干的变化.结果 ①超声检测显示与对照组相比,枕大池注血大鼠第1天基底动脉血流加快,第7天达到高峰,第14天血流速度下降,第21天未见明显变化,表明大鼠出现了脑血管痉挛(CVS).②RT-PCR结果显示SAH模型组术后第1、7天脑干组织中 mGluR-4 和 mGluR6 mRNA的表达率均比对照组下降,第14、21天差别不显著.结论 大鼠SAH的急性期出现了CVS,mGluR-4 和 mGluR6 可能参与了大鼠SAH急性期CVS的形成.     

木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达

目的：对木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因(nir)进行克隆并表达,并测定酶的活力,探讨亚硝酸盐还原酶(NiR)对亚硝酸盐的降解特性。方法：提取木糖氧化产碱菌DNA,根据GenBank公布的nir基因序列设计引物,利用PCR技术扩增nir基因,克隆至表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-nir,通过双酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得重组蛋白。将细胞发酵液超声破碎,提取粗酶,测定酶活力。结果：经PCR扩增及测序鉴定得到长度为1 083 bp的目的片段;经终浓度0.6 mmol?L-1IPTG、30℃诱导表达5 h,获得相对分子质量为37 000的重组蛋白;在pH6.5、反应温度35℃时,测得酶活力为51.74 U•mL^-1。结论：成功克隆nir基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,且表达产物有酶活。