宫颈癌细胞系中RASSF2A基因启动子区甲基化状态的研究

目的拟通过检测4株不同宫颈癌细胞系HeLa、CaSki、SiHa和C33A中RASSF2A基因启动子区甲基化水平,以及分析去甲基化前后RASSF2A基因mRNA和蛋白表达水平、甲基化状态及细胞生物活性的变化,探讨宫颈癌发生的可能机制及治疗对策。方法采用实时定量聚合酶链反应方法检测去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-dC）作用前后RASSF2A基因的表达;甲基化特异性PCR（MSP）法检测4株宫颈癌细胞系中RASSF2A启动子区甲基化状态;免疫细胞化学方法检测RASSF2A基因表达变化,并用MTT法和流式细胞术观察细胞生物活性的变化。结果宫颈癌细胞系HeLa和SiHa表现为完全甲基化状态,细胞系CaSki和C33A表现为部分甲基化状态。5-aza-dC可使宫颈癌细胞系部分去甲基化,并使RASSF2A基因在宫颈癌细胞中mRNA和蛋白水平表达均显著升高。通过对宫颈癌细胞系HeLa的生物学行为检测发现,通过5-aza-dC的诱导作用,其增殖能力和抗凋亡能力明显下降。结论甲基化是导致宫颈癌细胞中RASSF2A基因表达缺失或降低的重要原因之一。去甲基化药物5-aza-dC能够逆转宫颈癌细胞系RASSF2A基因启动子异常甲基化水平,提高RASSF2A基因的mRNA和蛋白表达水平,提示RASSF2A基因的甲基化水平可以作为评估去甲基化干预是否有效的分子学标志物,为宫颈癌的临床治疗提供新的分子靶点。     

MiR-885对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探究miR-885对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。［方法］利用qRT-PCR 验证在耐药和敏感结直肠癌蜡块组织中miR-885的相对表达量;运用质粒转染方法沉默结直肠癌细胞系HCT116中miR-885基因,按照miR-885表达水平分为2组：miR-NC和miR-885 inhibitor组,并且利用qRT-PCR验证转染效率。将细胞分成4组,分别是阴性对照组(NC)、阴性对照加奥沙利铂组（L-OHP）、miR-NC加奥沙利铂组（L-OHP/miR-NC）和miR-885 inhibitor加奥沙利铂组（L-OHP/miR-885 inhibitor）。利用CCK-8法检测HCT116细胞活性;Transwell检测HCT116细胞的侵袭能力;流式细胞术检测HCT116细胞的细胞周期。［结果］ 相比于癌旁正常组织（1.31±0.36）,耐药组织（2.75±0.82）中miR-885的表达量增加,而敏感组织（0.31±0.14）中miR-885的表达量降低。在miR-885组中miR-885表达水平（0.02±0.01）相对于miR-NC组（0.80±0.19）呈显著降低(P<0.05）。与L-OHP/miR-NC组（0.77±0.14）相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（0.48±0.23）细胞活性降低（P<0.05）。与L-OHP/miR-NC组（169±25）相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（28±9）细胞的侵袭数量减少（P<0.05）。与NC组G0/G1期（42.27±3.33）相比,L-OHP组（3.33±0.41）细胞比例降低（P<0.001）,与NC组S期（32.19±2.29）相比,L-OHP组（53.29±3.04）细胞比例增多(P<0.05),与NC组（16.32±2.29）G2/M期相比,L-OHP组（4.83±0.76）细胞比例减少(P<0.05)。同时,与L-OHP/miR-NC组（5.07±0.31）G0/G1期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（45.59±1.95）细胞比例增加（P<0.001）,与L-OHP/miR-NC组（42.71±2.58）S期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（12.72±1.60）细胞比例降低（P<0.001）,与L-OHP/miR-NC组(18.19±1.30)G2/M期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（2.55±0.51）细胞比例减少（P<0.01）。［结论］ 沉默miR-885能够增强结直肠癌细胞HCT116对奥沙利铂化疗敏感性,miR-885可能成为结直肠癌治疗的新靶点。     

微小RNA-574-3p在结肠癌中的表达和临床意义

目的研究微小RNA-574-3p(miR-574-3p)在结肠癌中的表达和临床意义。方法选取2012年6月至2015年6月秦皇岛市第一医院和石家庄市中医院收治的结肠癌患者106例作为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁正常组织miR-574-3p的表达水平。分析miR-574-3p表达与结肠癌患者临床病理特征及预后的关系。免疫组织化学染色法检测miR-574-3p表达与细胞周期蛋白A2(CyclinA2)或E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的关系。结果相较于癌旁正常组织, 106例结肠癌组织miR-574-3p表达水平显著更低(P<0.01)。miR-574-3p表达降低与肿瘤长径、Dukes分期、组织学分级及淋巴结转移有关(均P<0.05), 与年龄和肿瘤位置无关(均P>0.05)。miR-574-3p表达降低、Dukes分期和组织学分级高、淋巴结转移的患者生存情况较差(均P<0.05)。癌组织miR-574-3p表达降低的患者5年总体生存率明显低于miR-574-3p表达未降低的患者(P=0.007 6)。与miR-574...     

信阳市化妆品微生物检测分析

为了加强化妆品卫生质量监督 ,２０００年对信阳市售化妆品进行统一抽查监测。采集信阳市各辖区内的各大商场、批发市场及宾馆内均在保质期内的化妆品２０２份。按ＧＢ７９１８．１＿７９１８．５＿１９８７《化妆品微生物标准检验方法》、１９９９年１１月《化妆品卫生规范》执行。检测项目包括菌落总数、粪大肠菌群、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、霉菌及酵母菌 ,评价标准按ＧＢ７９１６—１９８７《化妆品卫生标准》。婴幼儿类专用化妆品合格率为１００% ,成人用化妆品超标率为２．１１% ,而宾馆小包装化妆品超标率为２２．５０ % ,并从中检…     

基于挥发油出油量的逍遥片提取工艺优化及挥发性成分研究

目的优化水蒸馏法提取逍遥片中当归、白术挥发油的提取工艺,研究不同提取温度下挥发性成分的变化规律。方法采用析因实验设计筛选和优化提取工艺条件,利用气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)对不同温度下提取挥发油中挥发性成分进行分离鉴定,峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果确定最佳提取工艺为加水量6倍水,蒸馏时间6 h,暴沸提取。在160 ℃提取下出油量最高,低温120 ℃主要提取挥发油中单萜烯类成分;130 ℃及以上主要为内酯类和单萜烯类成分。结论该提取工艺条件稳定可行,提取温度对挥发油中挥发性成分有一定影响,为以挥发性有效成分指导的逍遥片及其他大复方中药的开发利用提供参考依据及研究思路。     

针刺对宫内窘迫大鼠缺氧缺血性脑损伤作用机制初探

目的:观察"靳三针疗法"中的"头针穴组"对宫内窘迫导致的HIBD新生大鼠脑皮质中线粒体氧化应激及能量代谢的影响。方法:给予临产前孕鼠异氟烷吸入麻醉和夹闭双侧子宫动脉10 min的延迟剖宫产术造缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠模型。正常分娩的新生大鼠为正常组;造模成功的HIBD新生大鼠按照随机数字表法分为模型组和针刺组,每组6只幼鼠。针刺干预于大鼠14天鼠龄时进行,每天针刺1次,共干预14 d。针刺干预结束后取各组大鼠的全脑进行指标检测。采用流式细胞术检测大鼠脑皮质中ROS的表达;采用高效液相色谱法检测大鼠脑皮质中ATP/ADP比值。结果:(1)各组大鼠脑皮质重量比较:与正常组相比,针刺组脑皮质重量差异不显著(P0.05),模型组脑皮质重量显著下降(P0.05);与模型组比较,针刺组脑皮质重量明显优于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。(2)各组ROS平均荧光表达比较:模型组ROS平均荧光表达明显高于正常组;与模型组相比,针刺组大鼠的ROS表达明显降低,差异具有显著性(P0.05)。(3)比较各组的ATP/ADP比值:与正常组相比,模型组与针刺组均低于正常组且差异有显著性(P0.05),与模型组相比,针刺组高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)针刺靳三针头针穴组能有效促进缺氧缺血性脑损伤HIBD模型大鼠脑皮质重量增长;(2)针刺组中ROS与ATP/ADP比值表达成负相关趋势,提示针刺靳三针头针穴组促进缺氧缺血性脑损伤HIBD模型大鼠脑功能修复作用机制可能与针刺靳三针头针穴组能有效降低HIBD模型大鼠脑组织中的氧化应激损伤,并能提高HIBD模型大鼠脑组织线粒体能量代谢有关。     

自血疗法临床操作体会

自血疗法是一种广泛应用于临床各科的针灸特色疗法,但在临床操作中,自血疗法的相关不良事件仍时有发生。现主要从静脉采血、注血治疗、不良事件列举及注意事项4个部分并结合本人的临床操作体会来阐述经络注血疗法的操作规范及异常情况的处理。借此从理论上指导并规范经络注血疗法的具体操作,降低不良事件的发生率。     

黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用研究

目的:研究黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用及相关机制。方法:用结肠癌HT-29细胞作为研究对象。以50、100、200 μmol/L黄芩素、5 μmol/L伊立替康分别处理结肠癌HT-29细胞。MTT实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力; Western blotting法实验检测Src激酶、Yes相关蛋白(YAP)及大肿瘤抑制因子激酶1(LATS1)磷酸化蛋白表达; 免疫荧光实验检测细胞YAP表达分布。结果:50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均能增加伊立替康对HT-29细胞的增殖和克隆抑制作用。50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均可下调结肠癌HT-29细胞p-Src蛋白表达,上调p-YAP、p-LATS1蛋白表达。200 μmol/L黄芩素组能增加结肠癌HT-29细胞的细胞质YAP分布。结论:黄芩素通过抑制Src-YAP信号通路增强伊立替康对结肠癌细胞的抑制作用。