5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：5-氮杂胞苷能诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。目的：以5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。方法：采用贴壁培养法分离、纯化人脐带间充质干细胞,以5-氮杂胞苷诱导第3代人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞。结果与结论：诱导前人脐带间充质干细胞呈典型的梭形;诱导后一二周细胞体积变大,三四周后相邻细胞间胞膜有接触,逐渐相连呈肌管状,细胞胞质内可见细丝样结构。诱导4周后免疫组织化学鉴定人脐带间充质干细胞cTnI表达阳性,未诱导细胞cTnI表达阴性;诱导组Nkx2.5、GATA4mRNA表达水平较未诱导组显著增加（P〈0.05）。提示5-氮杂胞苷可能通过调控GATA4、Nkx2.5基因的表达促进人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞,并促进其成熟。     

5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景:5-氮杂胞苷能诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。目的:以5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。方法:采用贴壁培养法分离、纯化人脐带间充质干细胞,以5-氮杂胞苷诱导第3代人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞。结果与结论:诱导前人脐带间充质干细胞呈典型的梭形;诱导后一二周细胞体积变大,三四周后相邻细胞间胞膜有接触,逐渐相连呈肌管状,细胞胞质内可见细丝样结构。诱导4周后免疫组织化学鉴定人脐带间充质干细胞cTnI表达阳性,未诱导细胞cTnI表达阴性;诱导组Nkx2.5、GATA4mRNA表达水平较未诱导组显著增加(P<0.05)。提示5-氮杂胞苷可能通过调控GATA4、Nkx2.5基因的表达促进人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞,并促进其成熟。     

Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用

目的 探讨let-7a介导的基因表达调控在肺癌形成中的作用.方法 依据miRBase数据库中hsa-let-7a序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-1et-7a,同时设计并构建一个阴性对照质粒pGenesil-control.将pGenesil-let-7a及pGenesil-control转染肺癌A549细胞,经G418筛选.建立稳定表达let-7a-GFP及control-GFP的细胞株.采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学检测k-Ras表达的差异.结果 经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的A549细胞和稳定表达pGenesil-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-let-7a的A549细胞中,细胞生长明显减慢,k-Ras的蛋白表达明显降低,而k-Ras的mRNA水平无明显变化.结论 let-7a在翻译水平抑制了k-Ras的表达,并对细胞生长具有显著的抑制作用.     

痔疮术后应用中药换药的疗效观察

痔疮术后应用熏洗方和九华膏进行局部换药１０８０例，有效率达９５．２％。     

5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化☆

背景：5-氮杂胞苷能诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。 目的：以5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。 方法：采用贴壁培养法分离、纯化人脐带间充质干细胞,以5-氮杂胞苷诱导第3代人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞。 结果与结论：诱导前人脐带间充质干细胞呈典型的梭形;诱导后一二周细胞体积变大,三四周后相邻细胞间胞膜有接触,逐渐相连呈肌管状,细胞胞质内可见细丝样结构。诱导4周后免疫组织化学鉴定人脐带间充质干细胞cTnI表达阳性,未诱导细胞cTnI表达阴性;诱导组Nkx2.5、GATA 4 mRNA表达水平较未诱导组显著增加(P < 0.05)。提示5-氮杂胞苷可能通过调控GATA4、Nkx2.5基因的表达促进人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞,并促进其成熟。     

脐带间充质干细胞源性多巴胺能神经元中脑源性神经生长因子的表达研究

目的将人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)诱导分化为多巴胺能神经元并观察其中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。方法将P3代脐带MSCs接种24孔细胞培养板,培养24 h后更换神经诱导液,诱导9 d后加入BDNF。终止诱导后应用免疫荧光染色检测细胞中酪氨酸羟化酶(TH)、β-微管蛋白Ⅲ、神经元核抗原(NeuN)和BDNF的表达。结果 HUCMSCs经特定细胞因子诱导后可分化形成成熟的神经元,分化比例约为70%;其中定向分化形成TH阳性细胞的比例为(17.65±1.91)%;BDNF表达比例为(14.15±3.04)%。结论 HUCMSCs经诱导后可向多巴胺能神经元分化,且分化后的细胞可表达BDNF。     

体外培养和诱导人脐带源间充质干细胞定向分化为心肌细胞的实验研究

目的探讨体外培养并应用5-氮胞苷（5-aza）诱导人脐带源间充质干细胞（hUC MSCs）是否能分化为心肌细胞。方法足月顺产或剖宫产患者的脐带在无菌条件下剪碎后采用贴壁培养法分离、纯化hUC MSCs,采用5-aza对P3代hUC MSCs进行诱导24 h后继续培养4周,采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化,同时采用免疫组织化学方法测定肌钙蛋白I（cTnI）的表达。结果采用贴壁培养法可从脐带组织获得大量hUC MSCs。5-aza诱导4周后免疫组织化学鉴定cTnI表达阳性。结论人脐带贴壁培养可获得大量的hUC MSCs,hUC MSCs体外经5-aza诱导可定向分化为心肌细胞。     

5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：5-氮杂胞苷能诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。 目的：以5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。 方法：采用贴壁培养法分离、纯化人脐带间充质干细胞,以5-氮杂胞苷诱导第3代人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞。 结果与结论：诱导前人脐带间充质干细胞呈典型的梭形;诱导后一二周细胞体积变大,三四周后相邻细胞间胞膜有接触,逐渐相连呈肌管状,细胞胞质内可见细丝样结构。诱导4周后免疫组织化学鉴定人脐带间充质干细胞cTnI表达阳性,未诱导细胞cTnI表达阴性;诱导组Nkx2.5、GATA 4 mRNA表达水平较未诱导组显著增加(P < 0.05)。提示5-氮杂胞苷可能通过调控GATA4、Nkx2.5基因的表达促进人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞,并促进其成熟。     

痔疮术后应用中药换药的疗效观察

痔疮术后应用熏洗方和九华膏进行局部换药１０８０例，有效率达９５．２％。     

结缔组织生长因子诱导胎盘间充质干细胞分化为皮肤成纤维细胞

目的 探究胎盘间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向皮肤成纤维细胞分化的潜能,以及其用于皮肤创伤修复及作为种子细胞的可能性.方法 酶消化法分离得到胎盘MSCs,体外培养扩增,用流式细胞术和成骨、成脂诱导进行MSCs鉴定.加入含50 μg/ml维生素C和100 ng/ml结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的DMEM/F12诱导胎盘MSCs 16 d,拍照记录形态变化,免疫荧光方法检测诱导前、后细胞内波形蛋白、人纤维母细胞表面抗原(human fibroblast surface protein,FSP)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原、结蛋白及层粘连蛋白的表达变化,同时检测诱导后成骨、成脂分化能力变化.冻存复苏诱导后细胞,台盼蓝法检测细胞活率.结果 胎盘MSCs经CTGF诱导之后,具有明显的成纤维细胞形态,波形蛋白、FSP-1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原及层粘连蛋白表达升高,且表达皮肤成纤维细胞特异性蛋白结蛋白,成骨、成脂分化能力减弱,胎盘MSCs成功诱导为皮肤成纤维细胞.诱导细胞冻存复苏后细胞活率大于90％.结论 胎盘MSCs在体外可经CTGF诱导为皮肤成纤维细胞,胎盘MSCs有潜在的用于皮肤创伤修复价值,并可作为皮肤成纤维细胞的种子细胞保存.