血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的 构建血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361的原核表达载体,诱导融合蛋白的表达,并对其进行纯化;制备兔抗BC097361蛋白多克隆抗体并进行鉴定.方法 应用RT-PCR技术,以LX02细胞总RNA为模板,扩增BC097361目的 基因片段,构建原核表达载体pET-32a(+)-BC097361.转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-半乳糖苷诱导并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,Western blot分析证实融合蛋白表达的特异性.大量表达后利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗BC097361蛋白的多克隆抗体.以纯化的BC097361蛋白为抗原,分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体,利用Western blot和酶联免疫吸附法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测.结果 扩增获得BC097361基因片段,成功表达了BC097361相关蛋白,经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot分析得到证实.成功获得融合蛋白及兔抗BC097361多克隆抗体.酶联免疫吸附法检测证实多克隆抗体效价>1:320 000,Western blot、免疫组织化学检测证明多克隆抗体的特异性良好.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达BC097361蛋白,获得高特异性、高效价兔抗BC097361蛋白的多克隆抗体,为今后研究BC097361蛋白的生物学特性奠定了基础.     

肝硬化病人的肾功能衰竭和细菌感染流行病学及临床特征

目的分析肝硬化病人的肾功能衰竭和细菌感染流行病学及临床特征表现。方法回顾分析2015年6月至2018年8月我院收治的158例肝硬化患者临床资料,分析肝硬化患者肾功能衰竭细菌感染流行病学以及临床特征变化,以此为临床早期诊断和制定治疗计划提供参考依据。结果 117例肝硬化合并腹水患者中,经临床诊断为细菌感染58例,以尿路感染最高,其次为肺炎、自发性细菌性腹膜炎、自发性菌血症、皮肤感染和其他。而41例无腹水肝硬化患者中,诊断为细菌感染7例,以尿路感染最高,其次为肺炎、皮肤感染以及培养阴性细菌感染等。58例肝硬化合并腹水患者中存在肾衰20例,无肾衰38例,而有无肾衰在SIRS、平均动脉压、MELD评分、胆红素、血清肌酐、BUN以及尿钠等指标变化中存在明显差异(P0.05)。20例细菌感染所致肾衰中,7例属于进展性肾功能衰竭,13例为肾功能衰竭。而两者中以胆道或胃肠道感染率最高,其次为自发性细菌性腹膜炎、尿道感染、肺炎以及其他感染。结论肝硬化肾功能衰竭细菌感染存在明显的临床特征和指标变化,加强临床监测可以进一步降低和减少细菌感染的发生。     

结核分枝杆菌抗原ESAT-6和CFP-10及rCFP10-ESAT6融合基因在大肠埃希菌中的表达及比较

目的 构建结核早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)、培养滤液蛋白10(CFP-10)及重组CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)融合蛋白的原核表达载体,获得纯化蛋白并比较三者表达特点.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增ESAT-6、CFP-10基因片段,融合PCR技术扩增rCFP10-ESAT6片段,分别连接到pGEM-T载体,测序正确后插入原核表达载体pET-32a(+)或 pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化3种蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析验证目的蛋白的抗原特异性.结果 pET-32a(+)-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达,分子量为31 kD,目的蛋白约占菌体总蛋白的42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6重组蛋白以可溶性形式表达,分子量分别为33 kD和28 kD,目的蛋白分别占菌体总蛋白的73%和48%;Western blot证实其均具有良好的抗原性.亲和层析法获得了纯度较高的重组蛋白.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)成功表达了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10融合蛋白及rCFP10-ESAT6重组蛋白,为深入研究其免疫原性和生物学特性奠定了基础.     

终末期肝病病情预后判断模式的演变及评价

近年来,终末期肝病的治疗方案不断增多,正确判断肝病病情能够指导临床医生选择更加合理的治疗方案。目前应用的判断预后的公式先后经历了Child-Turcotte分级、Child-Pugh予以完善并     

HIV感染者中结核杆菌ESAT-6蛋白特异性T细胞反应的检测

目的 检测结核杆菌抗原早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)融合蛋白其在人类免疫缺陷病毒感染患者中特异性T细胞反应,从而为艾滋病合并结核杆菌感染的诊断方法的建立提供理论依据.方法利用重组表达结核杆菌ESAT-6蛋白做为抗原,通过酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测HIV感染者中特异性T细胞反应,并以正常健康者、无HIV感染的结核患者作为对照.结果 ESAT-6重组蛋白对结核患者外周血单核细胞ELISPOT方法检测证实其具有良好的抗原性,斑点形成单位数(SFU/106 PBMC)在结核组和HIV合并结核感染组中显著升高,并与无合并结核感染临床表现的HIV组以及健康对照组间均存在明显的差别.结论重组结核杆菌ESAT-6蛋白可以作为抗原通过ELISPOT方法检测HIV感染者中结核杆菌合并感染.