埃及伊蚊黄蛋白c基因的克隆、表达及其体外抗凝血作用

目的 克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c (Aael-yellow-c)基因，并探讨r Aael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法 RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因，纯化后的片段与pEASY-E1载体连接，转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞，取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。0.1 mol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达后，镍柱亲和层析纯化重组蛋白，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析重组蛋白表达情况。比浊法观察不同浓度r Aael-yellow-c蛋白对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集活性影响。手工法检测不同浓度r Aael-yellow-c蛋白对人血浆凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（APTT）及凝血酶时间（TT）的影响。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析，组间差异比较采用t检验。结果Aael-yellow-c基因CDS区为1 287 bp，含27个氨基酸组成的信号肽，成熟肽序列长1 200 bp，编码399个氨基酸。RT-PCR扩增获得Aael-yellow-c...