溴甲酚紫指示剂对ELISA法加样的监测

输血系统自动化程度的提高 ,使检验质量有了充分的保证 ,但酶联免疫吸附法 (ELISA)实验中样品漏加现象时有发生 ,既有人为因素 (责任心不强 ) ,也有仪器设备因素 (全自动或手工加样器故障 )。目前某些国产试剂使用了样品加注指示剂 ,但一些进口试剂不具备指示剂 ,为此笔者尝试在Dia Sorin-HCV ELISA丙肝测定试剂盒样品稀释液中加入酸碱指示剂溴甲酚紫作为样品加注与否的指示 ,并进行对比实验 ,取得较好的效果。材料与方法1　材料1 .1　设备 :ML-FAME全自动酶免分析仪 (瑞士 ,Hamilton ) ,ML-STAR全自动加样仪 (瑞士 ,Hamilton) …     

hEGF和hbFGF的C端(78-154aa)融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达。方法:将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF5端的231bp的片段连接,克隆到表达载体pJN,构建出含融合基因的表达质粒pJRH。将pJRH转化BL21(DE3)表达菌株,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL)。Westernblot检测表达产物免疫学活性。表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化。结果:融合蛋白表达产量为30%,融合蛋白不仅能与肝素结合,而且具有促细胞增殖的活性。Westernblot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性。融合蛋白的等电点为5.2。结论:本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性。作为一个新的活性因子,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础。     

儿童哮喘患者血清Eotaxin、ECP的测定及其临床意义

目的 探讨嗜酸粒细胞趋化酞（Eotaxin）、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）在儿童支气管哮喘发病机制中的作用。并评价其反映哮喘气道炎症的临床价值。方法 收集23例哮喘急性发作患者、22例哮喘缓解期患者及17名健康儿童的外周血标本。用ELISA法测定血清Eotaxin的水平。以Pharmacia CAP系统检测血清中ECP的含量。结果 哮喘急性发作患儿血清中Eotaxin、ECP水平明显高于缓解期患儿和健康对照组，Eotaxin、ECP水平的升高程度与病情严重程度相关，且两者相互之间呈正相关。结论 Eotaxin在哮喘的发病过程中对气道的嗜酸粒细胞炎症有影响作用。ECP可作为支气管哮喘气道炎症发生发展的重要指标之一。动态监测血清Eotaxin、ECP的变化。可以较好地反映气道嗜酸粒细胞炎症的反应过程。     

120例小儿病毒性肺炎的临床特征及影响因素分析

目的探究小儿病毒性肺炎的临床特征及其影响因素,为病毒性肺炎患儿的临床治疗提供参考。方法回顾性分析2017年1月-2018年12月该院收治的120例病毒性肺炎患儿的临床治疗情况,将120例患儿纳入观察组,另选取同期入院体检的健康儿童120例为对照组,分析病毒性肺炎患儿感染病毒构成情况、主要临床表现、T淋巴细胞亚群各项指标水平及影响因素。结果120例患儿病毒感染构成比分析结果显示,单一感染91例,占75.83%,混合感染29例,占24.17%。其中单一感染以呼吸道合胞病毒(RSV)感染为主,共26例,占21.67%,混合感染以流感病毒(IFV)、副流感病毒(PIV)感染为主,共11例,占9.17%。对120例患儿临床表现分析结果显示,咳嗽多见于RSV肺炎,IFV、RSV混合感染肺炎及PIV、RSV混合感染肺炎均占100.00%;喘息多见于RSV肺炎及IFV、RSV混合感染肺炎,分别占80.77%、85.71%;发热多见于IFV、腺病毒(ADV)混合感染肺炎,IFV、RSV混合感染肺炎及PIV、ADV混合感染肺炎,均占100.00%;哮鸣音多见于RSV肺炎及PIV、RSV混合感染肺炎,分别占84.62%、100.00%。观察组患儿CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平明显低于对照组,而CD8^+水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。早产、被动吸烟、食物或药物过敏均是患儿发病的影响因素。结论病毒性肺炎患儿感染较为复杂,且混合感染较为常见,患儿感染后免疫功能低下,因此应合理规避导致患儿患病的影响因素,针对患儿病情及时采取积极有效的治疗以提高患儿治疗效果。     

119例非小细胞肺癌中CCR9的表达及其预后分析

目的：探讨 CC 族趋化因子受体9( C-C chemokine receptor 9, CCR9)在非小细胞肺癌( non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其预后判断的价值。方法应用免疫组化PV-9000两步法检测119例NSCLC及相应癌旁正常肺组织中CCR9蛋白的表达,并分析CCR9表达与临床病理特征及患者总生存率的关系。结果 CCR9在NSCLC中的阳性率(54.6%)明显高于癌旁正常肺组织(10．1%)( P <0．05);CCR9表达与 NSCLC 病理组织类型、淋巴结转移、p-TNM 分期有关( P <0．05)。 Kaplan-Meier生存分析显示肺癌中CCR9蛋白表达与患者术后总生存率呈负相关(Log-rank=9．917,P=0．002)。单因素生存分析显示,淋巴结转移、p-TNM分期、CCR9蛋白表达与NSCLC患者术后总生存率有关( P<0．05)。多因素生存分析显示,CCR9是NSCLC患者术后总生存率的独立预测因素(RR=0．447,95%CI：0．201~0．993,P<0．05)。结论 CCR9阳性患者预后较差,其可作为NSCLC患者预后判断的新生物学标志物。     

化疗中预防性使用rhG-CSF对中性粒细胞减少的干预作用随机研究

目的 :1 .观察实体瘤化疗周期中预防性应用rhG CSF对中性粒细胞数量减少干预作用的效果。 2 .观察rhG CSF的不良反应。方法 :采用单盲随机、自身交叉对照研究方法 ,对 69例经病理学证实的胃癌等实体瘤患者进行研究 ,在治疗周期 (A周期 )末次化疗给药 48h后 ,按 5μg/kg剂量皮下注射rhG CSF ,每天 1次 ,共用 7～ 1 4d ;隔日查中性粒细胞、白细胞、血红蛋白、血小板数值。结果 :治疗周期中 (A周期 )中性粒细胞绝对值 (ANC)明显高于对照周期 (B周期 ) ,ANC减少持续天数、中性粒细胞减少性发热及抗生素使用频率A周期明显低于B周期 ,有显著性差异 (P <0 .0 5) ;中性粒细胞的双峰分别出现在用rhG CSF后第 4、1 0d ,B周期则无双峰现象。A、B周期中Hb、Plt值无明显差异。不良反应主要是乏力、感冒样症状、骨肌肉疼痛、注射局部反应和发热。结论 :预防性使用rhG CSF能有效地防止中性粒细胞减低、中性粒细胞减少性发热及感染的发生 ,不良反应可以耐受     

CCR9在非小细胞肺癌患者外周血CD4+ T淋巴细胞中的表达及其对趋化活性的影响

目的：探讨CC族趋化因子受体9（ CCR9）在非小细胞肺癌（ NSCLC ）肿瘤免疫机制中的作用。方法采用流式细胞术检测42例NSCLC患者和30名健康人手术前后T细胞亚群以及外周血中CD4＋T淋巴细胞表面CCR9的表达情况,计数各组细胞表达的百分率。免疫磁珠分选外周血CD4＋T淋巴细胞,采用transwell实验检测并分析CCL25/CCR9对CD4＋T淋巴细胞迁移的影响。结果 NSCLC患者外周血T淋巴细胞亚群均降低,术后外周血CD4＋T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋比值均明显高于术前[（49.11±8.32） vs （46.17±8.71）,P＝0.031和（1.66±0.09） vs （1.44±0.06）,P＝0.001];术前CD4＋CCR9＋T淋巴细胞的百分率低于术后[（3.33±1.11） vs （6.57±1.92）,P＜0.05]和健康对照组[（3.33±1.11） vs （11.06±1.37）,P＜0.05]。在CCL25诱导下,NSCLC患者外周血CD4＋T淋巴细胞趋化指数（CI）为3.14,明显低于健康对照组的3.83（ P＜0.05）。经过anti-CCR9单抗处理后,CD4＋T淋巴细胞的CI为0.62,与未经anti-CCR9 mAb处理者相比明显降低（ P＜0.05）。结论 NSCLC患者外周血T淋巴细胞调节机制紊乱,CL25/CCR9相互作用可介导外周血CD4＋T淋巴细胞迁移,NSCLC患者外周血淋巴细胞中CCR9低表达,影响淋巴细胞迁移,可能与肿瘤逃避免疫监视的机制有关。手术可以逆转CD4＋T淋巴细胞表面CCR9的表达变化, CCR9可能作为评价肺癌治疗后免疫重建的指标。     

FW-LIGHT酸化水生成系统的工作原理及常见故障

<正>酸化水具有较强的氧化能力和快速杀灭微生物作用,是一种新型的环保型消毒剂^[1],比其它消毒剂更安全、价格低廉、制取简单(原料仅为自来水和工业盐,可实现现场制取,大规模供应即时生成,即时使用),同时能够杀灭包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)、细菌芽孢在内的各种病原微生物^[2-4],被广泛使用在灭菌前的手工清洗手术器械、内镜的消毒、手、皮肤等消毒中^[5-10],而且对环境无污染,使用后可还原为自来水。     

高通量测序在脓毒症患者病原学诊断中的应用价值及测序结果的影响因素

目的 评估高通量测序在脓毒症患者病原学诊断中的应用价值,并分析影响测序结果的因素。方法 纳入59例脓毒症患者,收集其病原体检测结果,比较高通量测序和血培养的检测结果。比较高通量测序阳性和阴性患者的临床资料,并采用Logistic回归模型分析影响高通量测序结果的因素。结果 高通量测序检出30种病原菌,血培养仅检出4种细菌和2种真菌。高通量测序检出阳性率为50.8%(30/59),高于血培养的13.6%(8/59)(P<0.05)。与高通量测序阴性的患者相比,高通量测序阳性的患者中,女性比例更高,使用血管活性药物的例数更少(均P<0.05)。中性粒细胞比例是高通量测序阳性的影响因素(P<0.05),其中中性粒细胞比例升高时高通量测序阳性的概率增加。结论 相比于传统血培养,高通量测序更有助于有效识别脓毒症患者的致病菌。当患者机体对感染存在一定反应、循环功能稳定或组织灌注较好时,阳性检出率较高。     

miR-142-5p通过影响上皮间质转化抑制肺腺癌H1650细胞的侵袭与迁移

目的：探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition,EMT）的影响及其作用机制。方法：收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切 除并经病理证实的107例肺腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,以及人肺腺癌细胞系H1650、HCC827、 A549、 H1975、PC9和人 支气管上皮细胞BEAS-2B, 用qPCR实验检测肺腺癌组织及细胞中miR-142-5p的表达水平及其与患者临床特征的关系。分别用 miR-142-5p模拟物（mimics）、miR-阴性对照质粒（miR-NC）转染H1650细胞后, 用CCK8、细胞划痕愈合和Transwell侵袭实验分 别检测H1650细胞的增殖、侵袭和迁移能力。使用生物信息学工具预测miR-142-5p的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验 证miR-142-5p对靶基因的调控作用,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶5（cyclin-dependent kinase 5,CDK5）及EMT 相关蛋白的表达水平。结果：肺腺癌组织及细胞系中miR-142-5p表达水平显著低于癌旁组织及BEAS-2B细胞（均P<0.01）;107 例肺腺癌组织中, 61例（57.01%）低表达miR-142-5p,其表达水平与患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关（均P<0.01）。转染 miR-142-5p模拟物后, H1650细胞中miR-142-5p高表达,细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低（均P<0.05或P<0.01）。生物信息 学工具预测CDK5是miR-142-5p的靶基因,经双荧光素酶报告基因验证,miR-142-5p可显著降低H1650细胞中CDK5的表达水 平,显著提高E-cadherin表达,降低N-cadherin和Snail的表达水平（均P<0.01）。结论：miR-142-5p在肺腺癌组织和细胞中呈低表 达状态,其通过下调CDK5表达影响EMT抑制H1650细胞的侵袭与迁移能力。