肺结核病患者痰涂片及痰培养检测结果分析

目的 分析肺结核患者痰涂片及痰分离培养抗酸杆菌检验情况,为确诊和控制结核病提供科学诊断依据。方法 2008-06/2011-05四川省双流县结核病门诊就诊的可疑肺结核（可疑者）2 418例及化疗期间肺结核患者（治疗者）649例,总计3 067例,分别对每例就诊者进行痰涂片和培养检测。结果 3 067例就诊者中查出抗酸杆菌阳性777例,总阳性率为25.33%（777/3067）,其中痰涂片阳性（涂阳）524例,痰培养阳性（培阳）651例,阳性率分别为17.09%和21.23%。2 418例可疑者涂阳383例,培阳619例,阳性率分别为15.84%（383/2418）和25.60%（619/2418）,培阳高于涂阳,差异有统计学意义（P〈0.01）。649例肺结核治疗者涂阳141例,培阳32例,阳性率分别21.73%（141/649）和4.93%（32/649）,涂阳高于培阳,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 可疑肺结核者痰培阳高于涂阳,而肺结核治疗者涂阳高于培阳,痰涂片抗酸杆菌检测特异性高而敏感性低,分离培养敏感性、特异性均较高。     

婴幼儿下呼吸道肺炎克雷伯菌感染及其耐药性研究

目的 了解婴幼儿下呼吸道感染肺炎克雷伯菌情况及耐药性,研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的基因型特征.方法 采集患儿下呼吸道临床标本分离培养肺炎克雷伯菌;纸片扩散法(K-B法)检测菌株对常用抗生素的敏感度;耐药表型筛查产ESBLs菌株;PCR检测ESBLs基因(blaTEM,blaSHV,blaCTX-M和blaOXA).结果 645例病例分离不重复肺炎克雷伯菌60株(9.3％);检出病例主要为新生儿及2岁以下婴儿(73.3％);临床表现主要为肺炎(73.0％)和支气管炎(20.6％).药敏试验结果显示分离菌株对青霉素、头孢菌素及阿莫西林/克拉维酸耐药较严重.检出产ESBLs肺炎克雷伯菌29株(48.3％),表现出多重耐药但对碳青霉烯类及β-内酰胺酶抑制剂复合物较敏感.PCR扩增CTX-M、TEM和SHV基因的阳性率分别为89.7％、55.2％和34.5％,未检出OXA基因;69.0％的菌株同时携带两种及两种以上ESBLs基因型.结论 婴幼儿下呼吸道肺炎克雷伯菌感染表现出年龄、性别差异;临床分离株对常用β-内酰胺类药物耐药性较高;产ESBLs菌株比例较高,以CTX-M型为主,多数菌株同时携带两种以上ESBLs基因型.     

拟杆菌属实时荧光定量PCR的建立

[目的]建立拟杆菌属TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,为拟杆菌属的快速检测以及相关研究提供有用的工具.[方法]从GenBank中下载拟杆菌属细菌16S rRNA基因序列并进行同源性比较,选择保守区段进行引物和探针的设计.对反应条件进行优化后,通过重组质粒建立标准曲线,并对建立的方法进行灵敏度、特异性、重复性评价.[结果]所建立的实时荧光定量PCR直线回归方程的决定系数R为0.9957,检测灵敏度达到10'cfu/ml,检测时间不超过2 h,批内与批问5次重复性试验的变异系数CV均在1.19%～2.21%之间.[结论]所建立的拟杆菌属Taq-Man实时荧光PCR具有快速、定量、简便、准确的特点,为临床拟杆菌感染的快速诊断、肠道拟杆菌属的快速计数提供了有力的技术支持.     

拟杆菌作为粪便污染指示微生物的初探

目的 通过外环境中拟杆菌属菌量与大肠菌群存活菌量之间的相关性分析,探讨拟杆菌作为粪便污染指示微生物,并采用实时荧光定量PCR实现快速检测的可能性.方法 用大肠菌群最大或然数(most probable number,MPN)计数法和实时荧光定量PCR法分别定时检测模拟水样中大肠菌群的存活菌量及拟杆菌属菌量,探讨二者的污染检出时限和相关性.同时分别检测在3个时间点采集4个位点的12份河流水样,比较二者的检出情况.结果 MPN计数法检测大肠菌群需要72 h,而实时荧光定量PCR法检测拟杆菌不超过3 h;室内外模拟水样大肠菌群污染检出时限分别为＞40 d和9 d,而拟杆菌的污染检出时限分别为13 d和5 d;室外模拟水样拟杆菌属菌量(从第1天的8.3×106拷贝/ml下降到第5天的小于检出限104拷贝/ml)和大肠菌群存活菌量(从第1天的大于4.3×106MPN/100 ml下降到第5天的2.4×103 MPN/100 ml)之间呈正相关;12份河水水样两种方法检出均为阳性,符合率为100%,均说明二者对粪便污染的检测结果具有很好的一致性.结论 拟杆菌有可能作为粪便污染的指示微生物,并通过实时荧光定量PCR实现快速检测.

Abstract：

Objective To explore the possibility of Bacteriodes spp. as fecal contamination indicator bacteria with real-time quantitative PCR (RT-PCR) assay through analyzing the correlation between Bacteriodes spp. and coliform group in external environment. Methods Quantity of coliform group and Bacteriodes in water samples were detected by most-probable-number method (MPN) and RT-PCR,respectively, and their detection correlation was evaluated with linear correlation analysis. Both methods were also applied to detect the contaminated time limits and river water samples collected at four sampling sites in three different times. Results Seventy two hours were needed for the numeration of coliform group with MPN method,while RT-PCR could detect Bacteriodes within 3 hours. The contaminated time limit of indoor and outdoor water samples of coliform group was more than 40 days and 9 days, and Bacteriodes 13 days and 5 days,respectively. Also,the positive correlation between the quantity of Bacteroides and coliform group in outdoor water samples was obtained,the quantity of Bacteroides was from 8. 3 × 106 copise/ml to less than 104 copise/ml during the first day to the fifth day,while coliform group was 4. 3 × 106 MPN/100 ml to 2.4 × 103 MPN/100 ml. A 100% coincidence rate of the detection results with both methods was also observed. These results indicated that the detection results of both methods had perfect consistency. Conclusion Bacteriodes spp. can be potentially used as fecal contamination indicator bacteria with RT-PCR rapid detection.     

四川省非结核分枝杆菌耐药分析

目的 探讨非结核分枝杆菌(non - tuberculosis mycobacterium,NTM)的流行病学特征和耐药现状,为NTM肺病的防治策略提供科学依据.方法 对2002 - 2011年四川省结核病参比实验室收集的分枝杆菌进行药物敏感性检测及菌种鉴定.对确诊为NTM病例进行流行病学分析.结果 2002 - 2011年四川省结核病参比实验室对2356个分枝杆菌菌株进行菌种鉴定,确诊为NTM的为251株,占10.65％,其中245株对异烟肼、对氨基水杨酸钠、乙胺丁醇、利福平、链霉素等常用抗结核药物存在不同程度的耐药,耐药率高达97.60％,且大多菌株同时对多种抗结核药物耐药.结论 四川省NTM对抗结核药物的耐药率高,研究、探索抗NTM的新药及更为有效的诊断方法是当务之急.