MicroRNA-181b诱导血管内皮细胞衰老和功能异常的机制研究

目的研究micro RNA-181b（mi R-181b）和胰岛素样生长因子1受体（Insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R）参与血管内皮细胞衰老和血管新生的调节机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,传代培养计算细胞群体倍增水平（Population doublings,PDL）,将PDL≤8 HUVECs定义为年轻细胞,PDL≥44 HUVECs定义为衰老细胞,并检测mi R-181b和IGF1R在年轻（PDL8）和年老（PDL44）HUVECs中的表达。PDL8 HUVECs过表达或抑制mi R-181b后,分别用MTS比色法、划痕（Wound healing）和成管（Tube formation）实验检测内皮细胞的增殖、迁移、成管等血管新生能力。采用双荧光素酶报告系统法检测mi R-181b对IGF1R转录后水平的调控。此外,给予缺氧刺激,观察缺氧应激条件下mi R-181b对IGF1R表达的调控作用。结果过表达mi R-181b可抑制PDL8内皮细胞的增殖能力22%（P〈0.001）、迁移能力23%（P〈0.001）,对成管能力没有显著影响（P〉0.05）。与PDL8HUVECs比较,mi R-181b在PDL44衰老内皮细胞中上调64%（P=0.046）,IGF1R的m RNA和蛋白水平分别下调39%和45%（P=0.004,P=0.014）。荧光素酶活性实验显示mi R-181b可与IGF1R的3’UTR结合,但过表达mi R-181b对IGF1R的表达水平无显著影响（P〉0.05）。在缺氧应激条件下,mi R-181b可上调IGF1R的表达（P=0.005）。结论 Mi R-181b抑制血管内皮细胞增殖、迁移等血管新生能力,这一作用与mi R-181b在缺氧应激条件下上调血管发育相关基因IGF1R的表达相关,其机制仍需进一步研究。     

血管紧张素Ⅱ通过活性氧调控ACE和ACE2的表达

目的研究血管紧张素II(Angiotensin II,Ang II)是否通过活性氧(Reactive oxygen species,ROS)调控人肾小管上皮细胞(Human kidney tubular epithelial cell line,HK-2)中血管紧张素转换酶(Angiotensin I converting enzyme,ACE)及血管紧张素转换酶2(Angiotensin I converting enzyme 2,ACE2)的表达。方法首先给予HK-2细胞不同浓度的Ang II刺激以检测ACE及ACE2表达的变化;然后给予细胞不同浓度的Ang II,在不同时间点,用2’7’-二氯双乙酸盐(2’7’-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH)标记结合细胞内的ROS,流式细胞仪检测ROS水平;最后,我们给予细胞ROS抑制剂二苯基氯化碘(diphenyleneiodonium chloride,DPI),分别检测ROS、ACE及ACE2的表达。结果Ang II诱导肾小管上皮细胞内ACE表达上调,ACE2表达下调。另外,Ang II会引起细胞内ROS产生增多,且与刺激浓度和刺激时间相关。DPI能抑制Ang II诱导的ROS产生,并且抑制Ang II对ACE及ACE2的调控作用。结论 Ang II通过诱导人肾小管上皮细胞产生ROS从而调控ACE以及ACE2的表达。