弓形虫ITS-1序列PCR诊断方法的建立

目的本文旨在为弓形虫感染的临床病例检测建立特异性PCR诊断方法。方法本研究以弓形虫ITS-1序列为种特异性遗传标记,采用有限稀释法稀释速殖子DNA,经PCR扩增,检测该方法的敏感性;用同一引物扩增鸡柔嫩艾美耳球虫原虫和弓形虫,检测PCR方法的特异性。人工感染小鼠和家兔,用组织触片法和PCR方法检测感染动物的组织,并检测10头临床疑似病猪的肺脏、肺门淋巴结、脾脏、肾脏和肝脏等组织,比较两者的敏感性。结果该PCR方法最低可以检测1pg弓形虫速殖子DNA(相当于10个速殖子的DNA);鸡柔嫩艾美耳球虫原虫未扩增出特异条带,仅弓形虫出现特异条带(300bp)。组织触片和PCR方法对人工感染小鼠组织DNA的检出率均为87.5%(7/8),对人工感染家兔的检出率分别为50%(3/6)和66.7%(4/6),对临床疑似弓形虫病猪检测的阳性率均为20%,两种方法的检查结果基本一致。结论本试验结果表明,PCR技术可以作为弓形虫感染动物的诊断与检测方法。     

Ghrelin对大鼠胃黏膜上皮细胞胃酸分泌的调节作用

目的:探讨Ghrelin 对胃外分泌功能的作用. 方法:从断奶大鼠中获得新鲜胃黏膜组织. 分离培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h 后,实验组换为分别含有1×10-4 、1×10-3 、1×10-2 和1× 10-1 μmol/L Ghrelin 的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin 的正常新鲜培养液. 继续培养4 h,收集培养液和细胞,分别测定细胞的相对活性(MTT 法)、培养液中胃蛋白酶活性、细胞中H+-K+-ATPase mRNA 表达和活性. 结果:实验组中细胞的相对活性与对照组相比没有发生明显的变化;1×10-3 μmol/L Ghrelin 可显著提高胃蛋白酶的活性(P<0.05). 1×10-3 μmol/L Ghrelin 可显著增加细胞中H+K+-ATPase mRNA 的表达(P <0.05),1×10-4 和1 ×10-3 μmol/L Ghrelin 明显增加了胃黏膜上皮细胞中H+-K+-ATPase 的活性(均P<0.05). 结论:Ghrelin 体外作用于胃黏膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌.