结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验对淋巴结结核的辅助诊断价值研究

目的 探讨评价结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）对淋巴结结核的辅助诊断价值.方法 本研究募集北京胸科医院2011年7月至2013年12月收治住院的淋巴结肿大患者185例,最终分为确诊结核性淋巴结组（51例）、非结核性淋巴结疾病组（105例）,其余诊断不明确或临床诊断淋巴结结核患者予以剔除.所有患者均行外周血T-SPOT.TB及免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体.采用SPSS 17.0进行统计学分析,非正态分布的计量资料数据用中位数（上下四分位数）[M（P25,P75）]表示,两组间斑点形成个数（SFCs）数据比较采用Mann WhitneyU检验,组间样本率的比较采用x2检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 T-SPOT.TB和免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体的敏感度分别为92.2％（47/51）和60.8％（31/51）,特异度分别为79.0％（83/105）和77.1％（81/105）,T-SPOT.TB敏感度显著高于免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体方法,差异有统计学意义（x2=13.95,P＜0.01）.结核分枝杆菌特异抗原刺激下结核性淋巴结组SFCs中位数为242个（57,621个）/106外周血单个核细胞（PBMCs）,非结核性淋巴结疾病组SFCs中位数为0个（0,20个）/106 PBMCs,结核性淋巴结组SFCs数量显著高于非结核性淋巴结疾病组,应用Mann Whitney U检验,两组间差异具有统计学意义（U=472.0,P＜0.01）.在T-SPOT.TB结果阳性的69例患者中,47例结核性淋巴结患者SFCs的M（P25,P75）为280个（98,684个）/106 PBMCs,显著高于对照组22例非结核性淋巴结疾病患者SFCs的M（P25,P75）52个（35,93个）/106 PBMCs（U=146.5,P＜0.01）.结论 T-SPOT.TB方法在淋巴结结核的诊断中有着较高的敏感度,有可能成为淋巴结结核辅助诊断的一项重要手段.     

复苏因子薄层琼脂快速培养法诊断结核性胸膜炎的应用研究

目的 建立胸腔积液结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)复苏因子薄层琼脂(Rpfs-TLA)快速培养法并评估其临床应用价值。方法 收集2016年7月至2018年11月北京胸科医院103例结核性胸膜炎和34例其他胸膜疾病患者的胸腔积液,经过离心、消化处理后进行M.tb复苏因子薄层琼脂和普通薄层琼脂培养,比较Rpfs-TLA与普通TLA培养M.tb的阳性率、平均报阳时间、菌落形成单位数的组间差异。结果 胸腔积液Rpfs-TLA培养组和普通TLA对照组M.tb的阳性率分别为43.7%和29.1%,差异有统计学意义(χ²=54.56,P<0.001)。Rpfs-TLA培养显微镜下微菌落与肉眼可视菌落平均报告时间为11.87 d和18.13 d,差异有统计学意义(t=31.82,P<0.001)。Rpfs-TLA与普通TLA培养显微镜下微菌落的平均报告时间为11.87 d和20.60 d,差异有统计学意义(t=16.62,P<0.001)。Rpfs-TLA诊断结核性胸膜炎的灵敏度为43.7%,特异度为100%,准确度...     

涂阳肺结核患者密切接触者结核感染及危险因素分析

目的了解涂阳肺结核患者密切接触者结核感染情况及影响因素。方法采用T-SPOT.TB试剂盒检测与76例涂阳肺结核患者的243例密切接触者结核潜伏感染(LTBI)情况,采用Pearsonχ2检验分析LTBI的影响因素。结果 248例密切接触者中活动性肺结核检出率为2.02%,在243例密切接触者(剔除5例活动性肺结核患者)中T-SPOT.TB的阳性率为46.9%,经单因素分析显示于涂阳肺结核患者确诊前2个月内接触者及夫妻关系的密切接触者,LTBI危险性高,且差异有统计学意——分别为(χ2=6.925,P=0.006)和(χ2=8.447,P=0.038)。结论与涂阳肺结核患者密切接触者较普通人群结核感染发生率高,且不同接触人群LTBI发生比率不同。     

儿童社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染现状与耐药性监测分析

目的调查儿童社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)感染现状及耐药谱,为临床合理使用抗生素提供试验依据。方法对本院2011年1月-2012年10月间儿科临床标本中检出的金黄色葡萄球菌鉴定和药敏试验结果进行回顾性分析。结果 60株金黄色葡萄球菌中检出CA-MRSA 23株,CA-MRSA检出率为38.3%。CA-MRSA耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(CA-MSSA),未检出对万古霉素、替考拉宁及呋喃妥因耐药菌株。结论 CA-MRSA不仅对β-内酰胺类耐药,而且对氨基糖苷类、大环内酯类等抗菌素也有较高的耐药率。应加大对CA-MRSA耐药性监测力度,合理使用抗菌素,减缓CA-MRSA产生。     

北京市昌平区某高校大学新生结核潜伏感染调查

目的 调查大学新生结核潜伏感染情况,以便采取预防性措施。 方法 2010年10月随机纳入北京市昌平区某高校入学新生TST≥10 mm的健康受试者420例,应用ELISPOT检测经抗原刺激后分泌IFN-γ的效应T淋巴细胞(即斑点形成细胞,SFCs)数量,并对ELISPOT阳性者进行为期3年的结核感染发病情况监测。 结果 ELISPOT检测LTBI总的阳性率为41.2%,在BCG接种(阳性率41.5%)和未接种(阳性率40.0%)中差异无统计学意义(χ²=0.064, P=0.447),在TST直径10~14、15~19和≥20 mm组间(37.6%、45.4%和64.3%)差异有统计学意义(χ²=8.408, P=0.015),173例未治疗的 ELISPOT+/TST+者经3年的ATB监测,发病率为0。 结论 北京市昌平区某高校大学新生LTBI比率高,但仅以ELISPOT和TST双阳性者为预防性治疗指标,尚不足够。     

γ-干扰素释放试验中两种细胞计数方法的对比分析

目的比较Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪和显微镜人工镜检两种计数方法对外周血单个核细胞(PBMC)悬液的计数结果,探讨Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪用于γ-干扰素释放试验(T-SPOT.TB)中细胞定量的可行性。方法随机抽取T-SPOT.TB检测中的60份血液标本,对其外周血单个核细胞悬液,分别用人工显微镜和Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪计数PBMC,同时进行T-SPOT.TB检测,对结果进行比较分析。结果人工显微镜和Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪两种计数方法相关性好(r=0.967);细胞悬液用人工显微镜计数所得PBMC浓度为(6.03±2.18)×109/L,用Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪计数所得PBMC浓度为(6.10±2.34)×109/L,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);按两种计数方法所得T-SPOT.TB检测结果一致性好。结论 Muse cell analyzer自动细胞分析仪计数可取代人工显微镜计数法用于T-SPOT.TB检测中对细胞悬液中PBMC的计数。     

不同抗原酶联免疫斑点检测技术对结核性胸膜炎辅助诊断价值的比较

目的 探讨结核分枝杆菌不同抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)对结核性胸膜炎的辅助诊断价值.方法 分离55例结核性胸膜炎患者和43例恶性胸腔积液患者的胸腔积液单个核细胞(PEMCs),经早期分泌抗原靶6 kD(ESAT-6)、培养滤液蛋白10 kD (CFP-10)、ESAT-6/CFP-10融合蛋白(E/C)...     

肺结核患者痰和血浆IFN-γ含量检测的临床意义探讨

目的探讨肺结核患者痰和血浆中γ-干扰素（interferon-gamma,IFN-γ）水平在结核病诊断、鉴别诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）分别检测44例活动性肺结核患者（PTB）、36例正常对照者、18例肺癌患者痰和血浆中IFN-γ含量。结果结核分枝杆菌潜伏感染者（LTBI）痰和血浆IFN-γ含量与健康人相接近（P〉0.05）;肺结核患者血浆IFN-γ含量显著高于正常对照及肺癌患者（P值均〈0.05）,肺结核患者痰中IFN-γ含量显著低于正常对照及肺癌患者（P值均〈0.01）;肺结核患者痰IFN-γ含量低于血浆IFN-γ含量;痰及血浆中IFN-γ的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.90和0.91,当痰中IFN-γ诊断临界值为21.40 pg/ml时,敏感度85.71%、特异性82.35%;当血浆IFN-γ诊断临界值为27.91 pg/ml时,敏感度71.43%、特异性94.12%。结论痰和/或血浆中IFN-γ可以作为肺结核诊断（尤其是菌阴肺结核）、鉴别诊断的重要辅助指标之一。     

结核分枝杆菌对氨基水杨酸耐药相关基因的筛选及鉴定

目的筛选二线抗结核药物对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid,PAS)的耐药相关基因。方法构建H37Rv转座子文库,筛选PAS耐药克隆,随机引物PCR扩增转座子插入突变基因。在PAS耐药菌株中鉴定耐药相关基因的突变情况。结果构建了较完整的H37Rv转座子文库,并筛选出201个PAS耐药克隆,经测序找到4个可能的PAS耐药相关基因,分别是Rv1534、pknF、ndh、papA1。papA1基因检测到一个无义突变,为papA1基因339位C→T点突变。结论酰基转移酶基因papA1可能为PAS耐药相关基因。     

结核分枝杆菌复苏因子对结核性胸腔积液中结核分枝杆菌生长促进作用的探索

目的探讨结核分枝杆菌复苏因子（resuscitationpromotingfactor,Rpf）对结核性胸腔积液中病原菌生长的促进作用,以期提高临床标本体外培养阳性率,缩短培养时间。方法选择2012年10月至2013年10月期间北京胸科医院62例结核性胸膜炎患者,抽取胸腔积液经过离心处理后分别接种于改良罗氏培养基,以及含高、低浓度Rpf的MiddleBrook7H11固体培养基（简称“7H11培养基”）和生理盐水7H11培养基（生理盐水阴性对照组）中,每隔3d观察菌落形成情况,阳性者行抗酸染色（AFB）、PCR扩增试验及DNA测序进行菌种鉴定,观察比较高、低浓度Rpf对Mtb的促进生长作用。利用统计软件SPSS17．0进行统计学分析。Rpf培养组与改良罗氏培养组,以及Rpf培养组与生理盐水阴性对照组Mtb培养阳性率比较采用配对计数资料的x2检验;不同浓度Rpf培养组与生理盐水阴性对照组可视菌落平均时间（d）和阳性菌落数量比较采用配对样本t检验。以P〈0．05为差异有统计学意义。结果（1）结核性胸腔积液改良罗氏培养组中的Mtb培养阳性率为16．1％（10／62）,含Rpf的7H11培养基中的Mtb培养阳性率为43．5％（27／62）,两者比较差异具有统计学意义（x2=12．84,P〈0．01）;（2）含高、低浓度Rpf7H11培养基的可视菌落形成时间各为（20．92±0．58）d和（21．69±0．50）d,两组间差异无统计学意义（t=0．085,P〉0．05）,但显著快于生理盐水对照组（不含Rpf）的（38．08±0．94）d（t值分别为10．19、9．91,P值均GO．001）;（3）含高、低浓度Rpf的7H11培养基菌落形成单位数各为（34．12±4．06）×10^2和（37．27±5．63）×10^2,两组间差异无统计学意义（t=0．45,P〉0．05）,但显著多于生理盐水对照组（3．77±0．88）×10^2（t值分别为5．88、7．30,P值均〈0．001）。结论接种结核性胸腔积液后,含Rpf的7H11培养基较改良罗氏培养基可提高Mtb的培养阳性率,并缩短培养时间。