胆管细胞免疫生物学研究进展

哺乳动物的胆道系统由大小不一的胆管交织形成,胆管细胞即胆道上皮细胞（bile duct epithelia,BDE）参与胆管构成。胆管起始于肝小叶,随后各分支汇集于较大的胆管,最终汇入肝外胆道。既往认为胆管细胞仅为柱状上皮细胞,被动参与肝脏功能的调节。近20年来的研究表明,胆管细胞不仅主动参与肝脏的病理生理过程,且具有重要的调节功能。胆管细胞仅占肝脏细胞的4％～5％,却能分泌每日输出胆汁量的近40％。     

94例不明原因肝功能异常患者临床与肝组织病理学分析*

目的 通过分析不明原因的肝功能异常患者的临床特征、病因、诊断、肝活检组织病理学特点,以提高疑难肝病的诊断水平。 方法 2015年1月~2017年3月以肝功能异常入院的患者2195例,排除明确诊断者后,94例诊断不明者被纳入研究。采用电化学发光法测定抗巨细胞病毒IgM和IgG,采用多重薇珠流式免疫荧光发光法、间接免疫荧光法、ELISA法、免疫印迹法等测定抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（ASMA）、抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)、抗肝肾微粒体抗体-1（LKM-1）、抗肝细胞胞质-I型抗体（LC-1）、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(SLA/LP)、抗中性粒细胞胞浆抗体,采用原子吸收光谱法测定血清铜、血清铁、24 h尿铜,采用化学发光法和免疫比浊法测定铁蛋白、转铁蛋白、转铁饱和度,常规行腹部影像学和肝活检检查。 结果 在94例肝功能异常患者中,非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）40例（42.6%）、自身免疫性肝病（AIH、PBC）22例（23.4%）、药物性肝损害（DILI）20例（21.3%）,其它依次为隐匿性慢性乙型肝炎3例（3.2%）,良性复发性胆汁淤积、Wilson病、血色病、淋巴瘤、巨细胞病毒感染、Oddi括约肌功能障碍（SOD）、Kwashiorkor综合征、肌营养不良各1例（8.5%）,原因不明1例（1.1%）。 结论 在所谓的不明原因的肝功能异常患者中,以NAFLD、ALD和DILI最常见,而遗传代谢性肝病和其他少见病也占一定的比例,应引起临床医师的重视,开阔诊断思路。     

活化大鼠肝星状细胞新表达甘丙肽2型受体拮抗甘丙肽增殖抑制作用

目的:探讨甘丙肽受体在肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)中表达和对细胞增殖的影响.方法:使用胶原酶原位灌注法分离大鼠原代HSC体外培养,半定量RT-PCR法检测静止期(0 wk)和培养活化(1 wk)HSC中甘丙肽及其3种受体(GalR1、GalR2和GalR3)表达变化.大鼠HSC-T6细胞株体外培养,免疫荧光法检测GalR2蛋白在HSC-T6细胞中表达;给或不给GalR2中和抗体(5μg/mL),MTT法观察不同浓度甘丙肽(0-10000 nmol/L)干预后甘丙肽对HSC增殖和活力的影响.结果:成功分离大鼠原代HSC和体外培养.静止期及活化的HSC均可检测到甘丙肽及GalR3 mRNA表达,但无GalR1 mRNA表达,而GalR2 mRNA在活化HSC中表达.细胞免疫荧光法进一步证实GalR2蛋白在HSC-T6中表达.甘丙肽处理时,HSC-T6增殖水平在1、10、100和1000 nmol/L甘丙肽时分别下降至对照组的86.7%(t=3.976,P=0.028)、83.1%(t=4.45,P=0.012)、78.1%(t=5.75,P=0.006)和73.1%(t=5.38,P=0.008);给予GalR2中和抗体联合干预时,HSC-T6增殖抑制在甘丙肽1和10 nmol/L时即降至相应对照组67.9%(t=5.11,P=0.015)和73.1%(t=6.56,P=0.003),与相应浓度甘丙肽组相比,分别下降21.7%(t=3.35,P=0.028)和12.6%(t=2.78,P=0.049).结论:HSC活化时新表达GalR2拮抗GalR1介导的甘丙肽对HSC增殖抑制作用.     

甘丙肽在高脂饮食诱导脂肪性肝病大鼠循环中动态变化

目的探讨甘丙肽在高脂饮食诱导脂肪性肝病大鼠循环中的变化,及其水平与脂肪因子相关性。方法高脂饲料喂养建立大鼠NAFLD模型,于第5、9和14周分别腹主动脉采血处死动物,留取血清与肝组织标本。HE染色观察肝组织病理学变化;ELISA法检测血清甘丙肽、瘦素、胰岛素、肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞趋化因子(MCP)-1和白细胞介素(IL)-1β水平变化;RT-PCR法检测肝脏组织甘丙肽及其受体在发病过程中变化;Spearman相关分析检测各节点甘丙肽与其他脂肪因子相关关系。结果病理显示,高脂饮食5周大鼠肝细胞脂肪变性明显,9周形成单纯性脂肪肝,14周出现明显脂肪性肝炎。与正常对照相比,血清甘丙肽在第5周和第14周均明显升高(P<0.05),而第9周时无差异。相关分析显示,第5周时,模型组甘丙肽与瘦素(r=-0.78)、胰岛素(r=-0.65)、IL-1β(r=-0.82)和TNF-α(r=-0.74)均呈显著负相关(P均<0.05),而与MCP-1呈正相关(r=0.70,P<0.05)。第14周,甘丙肽与瘦素(r=0.90)呈正相关,与胰岛素(r=-0.81)、TNF-α(r=-0.89)、MCP-1(r=-0.84)、IL-1β(r=-0.79)呈负相关。RT-PCR结果显示,GalR2 mRNA仅在14周大鼠肝组织中表达。结论大鼠血清甘丙肽在高脂饮食诱导肝脂肪变早期显著增高,在单纯脂肪肝形成时降至正常,而至脂肪性肝炎阶段再次升高并伴随GalR2重新表达。升高的甘丙肽水平与瘦素、MCP-1等炎性脂肪因子呈密切相关关系。甘丙肽可能通过调节脂肪因子水平与相关炎症反应等参与NAFLD发病。     

肝内胆汁淤积的基础和临床研究现状

胆汁淤积(cholestasis)因胆汁摄取、合成或分泌障碍引起,也可因胆道梗阻形成[1]。引起胆汁淤积的病因多样,肝细胞、胆管细胞以及肠道的胆汁酸转运体密切参与胆汁淤积的发病,近年来的研究以此为靶点取得诸多进展,并为胆汁淤积的诊断和治疗提供了新的思路和方法。胆汁酸的代谢一、胆汁酸的肠肝循环胆汁酸的肠肝循环是人体维持胆汁代谢平衡的重要生理过程,由于胆汁酸在体内多以复合物的形式存在,其转运过程为主动耗能过程,因此需要     

18α甘草酸对I型胶原转录水平的调控

目的探讨18α甘草酸(18αGL)对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的I型胶原的调控作用。方法采用40%CCl4皮下注射方法建立肝纤维化大鼠模型,分为正常组、肝纤维化模型组和18αGL干预组。采用免疫组织化学和实时PCR分析I型胶原表达情况。Signal-Net网络分析发现与I型胶原组分COL1A1和COL1A2直接相关的基因,实时PCR分析18αGL干预后相关基因表达情况。结果 18αGL能够改善纤维化大鼠I型胶原相关COL1A1和COL1A2的mRNA水平,并且能减少I型胶原的分布。Signal-Net网络分析发现与COL1A1和COL1A2直接相关的基因中,与TGF-β/Smad、Rho/rock、MAPK、PDGF和MMP等信号通路相关,动物体内18αGL可引起RAC、RHOA、HSPB、SMAD3、SP-1和MMP2、MMP9转录水平的下调。结论 18αGL能够显著减少纤维化大鼠肝脏I型胶原的表达,并且从多通路抑制I型胶原COL1A1和COL1A2表达,从而可以多层次,多靶点的改善胶原和影响肝纤维化进程。     

慢性乙型肝炎肝纤维化患者肝组织基因表达谱和功能分类

目的采用基因芯片技术分析与慢性乙型肝炎肝纤维化相关的基因表达谱。方法采用AffymetrixU133A基因芯片技术对139份不同纤维化Scheuer分期的肝组织,进行mRNA基因表达谱检测分析,并应用GeneSpring10软件系统行统计分析。结果 139份慢性乙型肝炎肝纤维化样本按S0-S4分期分为5组:(S0:48;S1:23;S2:37;S3:17;S4:14)。差异基因聚类分析显示肝纤维化分期不同,组间的基因表达也存在差异,提示基因表达谱与组织纤维化分期具有较好的一致性。S1-S4组分别与S0组比较,差异基因共有1451个(p≤5×10-6)。S4组与S0组比较,差异倍数大于2倍的上调差异基因共174个,下调差异基因共45个。在上调的174个基因中,从基因功能分类看,结构分子活性(包括细胞外基质,膜或胶原成分)相关基因改变最多为58个,占26.7%;其次是信号传导活性相关基因26个,占12.0%;第三是细胞黏附分子活性相关基因24个,占11.1%;以上3大类共占基因总数的49.8%。结论随着乙型肝炎肝纤维化程度进展,肝组织中大量结构分子,信号转导分子和细胞黏附分子活性相关的基因呈现活跃的表达上调,因而转录和翻译后产生出大量相应具有促纤维化形成活性的蛋白质和酶类。这些活性高度改变的基因是许多炎性反应、免疫反应和细胞增殖/凋亡信号通路的关键酶类和中间产物,诱发或加剧了肝纤维化的发生、发展。     

乙型肝炎和丙型肝炎相关终末期肝病的抗病毒处理策略

HBV和HCV是终末期肝病的重要致病因素,抗病毒治疗是阻止病情进展并降低相关疾病病死率的重要手段.但乙型肝炎和丙型肝炎的抗病毒治疗方案和预后存在很大差异,且疾病的不同阶段抗病毒治疗方案也各不相同.因此现重点探讨乙型肝炎和丙型肝炎相关终末期肝病的抗病毒治疗.