实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达

目的 建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGS mRNA表达的方法,研究MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异,并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGS mRNA表达水平的变化.方法 用SYBR Green Ⅰ为荧光染料,以β-actin作参照,建立检测FPGS mRNA的实时荧光定量PCR方法.根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价.并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达.结果 建立的标准曲线Ct值与模板浓度有良好的线性关系,FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0.996 8和0.998 7,斜率分别为-3.595和-3.740,批内CV为1.27%～2.95%,批间CV为3.82%;熔解曲线均呈单个特异峰,扩增效率相似(斜率为0.021 7);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞中FPGS mRNA相对含量分别为(3.51±0.66)和(0.16±0.01),A549亲本细胞(S)中FPGS mRNA相对含量为(1.00±0.31),差异有统计学意义(F=64.45,P＜0.01);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞间FPGS mRNA相对含量差异有统计学意义(q=9.29,P＜0.01).白血病患者应用MTX治疗耐药后,FPGS mRNA表达水平为(0.35±0.04),用药前为(1.00±0.44),差异有统计学意义(t=8.83,P＜0.01).结论 建立的实时荧光定量PCR检测FPGS mRNA的方法重复性好、特异度高,可用于FPGSmRNA含量分析.MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA表达发生了变化,MTX 2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用.     

柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其六种代谢产物

目的 建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链( MTXPG)的方法.方法 采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈( V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样,进样...     

专职卒中救治团队对急性脑梗死静脉溶栓及介入取栓质量的影响

目的 探讨专职卒中救治团队对急性脑梗死静脉溶栓及介入取栓治疗质量的影响。方法 回顾性连续纳入济宁医学院附属医院经卒中绿色通道给予静脉溶栓和介入取栓治疗的急性脑梗死患者为研究对象,其中对照组纳入2018年6月1日至2020月5月31日即专职卒中救治团队成立前的2年内收治的急性脑梗死静脉溶栓患者355例及介入取栓患者85例;2020年6月1日开始成立专职卒中救治团队,由脑血管病专业方向的神经内科医师、神经外科医师、急诊护士及神经内外科护士组成,有全职科主任和护士长,独立的病房,专门收治需静脉溶栓和(或)介入取栓治疗的超急性期脑梗死患者,以自成立专职卒中救治团队至2022年5月31日2年内收治的急性脑梗死静脉溶栓患者757例及介入取栓患者277例为观察组。比较两组患者静脉溶栓率、就诊至开始静脉溶栓治疗的时间(DNT)、就诊至介入取栓股动脉穿刺时间(DPT)、DNT≤60 min达标率、DPT≤90 min达标率、静脉溶栓并发症发生率、介入取栓并发症发生率、介入取栓患者住院病死率、介入取栓血管再通率等。结果 观察组及对照组静脉溶栓及介入取栓患者年龄、性别、高血压病、糖尿病、冠心病、吸烟、饮酒等...     

淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型

目的:研究中药淫羊藿苷(icariin,ICA)作用甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药肺癌A549细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值.方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC_(50)).采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX 组和A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率,并观察其集落形态.细胞划痕实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力.Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:MTT结果显示,无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC_(50)值为35.50±1.85 μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25 μmol/L)有了一定程度的下降.软琼脂实验发现,A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.09,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.07(P<0.05).划痕实验显示,72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05).Transwell实验显示,A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞.结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用.     

人绒毛膜促性腺激素注射前血清孕激素升高的持续时间对体外受精-胚胎移植的影响

目的:探讨在控制性促排卵(COS)过程中人绒毛膜促性腺激素(h CG)注射前孕激素水平升高的持续时间对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的影响。方法:选取2012年1月—2014年12月在安徽医科大学附属省立医院生殖医学中心行IVF-ET或胞浆内单精子注射(ICSI)-ET助孕的1 132例不孕症患者的临床资料。根据h CG注射日血清孕激素水平分4组:A1组h CG注射日孕激素水平3.18 nmol/L,共521例;A2组h CG注射日孕激素水平3.18~6.36 nmol/L,共338例;A3组h CG注射日孕激素水平6.36~7.95 nmol/L,共197例;A4组h CG注射日孕激素水平7.95 nmol/L,共76例。根据h CG注射前(包括h CG注射日及前一日)血清孕激素水平持续2天在同一范围的患者分为3组:B1组孕激素水平3.18 nmol/L,共220例;B2组孕激素水平3.18~6.36 nmol/L,共116例;B3组孕激素水平6.36 nmol/L,共62例。对上述各组的临床资料进行回顾性分析,比较各组患者的促排卵效果及周期妊娠结局。结果:h CG注射日不同孕激素水平的4组患者年龄、不孕年限、促性腺激素(Gn)天数、Gn用量、获卵数、正常受精率、可移植胚胎率和优质胚胎率的比较差异均无统计学意义(均P0.05)。A4组与A1组比较,胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率和活产率差异均具统计学意义(均P0.008)。与B1组相比,B2组和B3组的胚胎种植率、临床妊娠率及活产率下降,差异有统计学意义(均P0.017),B3组的生化妊娠率也比B1组低,差异有统计学意义(P0.017)。结论:COS过程中,h CG注射日孕激素水平7.95 nmol/L及h CG注射前连续2天孕激素水平≥3.18 nmol/L对IVF-ET的妊娠结局具有负面影响。     

脑脊液实验室检测指标在神经梅毒诊断中的临床意义

目的 统计分析梅毒患者脑脊液标本的实验室检测结果,探讨其在神经梅毒诊断中的临床意义。方法 回顾性分析中国科学技术大学附属第一医院2020年3月至2022年2月收治的121例人类免疫缺陷病毒（HIV）阴性梅毒患者脑脊液标本相关资料,对患者脑脊液标本进行梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、脑脊液免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、脑脊液白细胞计数和脑脊液生化检测,并将结果进行统计分析;绘制受试者工作特征（ROC）曲线,探讨脑脊液实验室检测指标对神经梅毒的诊断价值。结果 在121例梅毒患者中,58例被确诊为神经梅毒。该58例患者脑脊液TPPA均阳性,其中TRUST阳性29例（50.0%）,白细胞升高49例（84.5%）、蛋白升高35例（60.3%）、免疫球蛋白IgG升高56例（96.6%）、IgA升高32例（55.2%）、IgM升高41例（70.7%）。与非神经梅毒患者相比,神经梅毒患者脑脊液白细胞计数、生化蛋白及免疫球蛋白均明显升高（P<0.05）。ROC曲线结果显示,脑脊液免疫球蛋白IgG诊断神经梅毒的曲线下面积最大,诊断效能最高,其次...     

染色体平衡易位八例

例1 男，29岁，结婚2年，其妻妊娠3次，均于60～70天无诱因阴道流血，B超提示胚胎停止发育行清宫术，孕期无有毒有害物质及放射线接触史。染色体核型：46，XY，t（1；11）（p36；∷13）（1qter→1p36∷11q13→11qter；11pter→11q13：：1p36→1pter）（图1a）。其妻染色体核型正常。     

血清淀粉样蛋白A在脑出血中的发病机制和临床意义的研究进展

血清淀粉样蛋白A(SAA)是近年来被深入研究的一种急性期蛋白, 广泛应用于多种感染性和非生物致炎性疾病的诊断、治疗效果监测及预后评估。近年来SAA与脑梗死及动脉粥样硬化关系的研究相对较多, 但SAA与脑出血的研究较少, 本文主要综述SAA在脑出血中的发病机制和临床意义的研究进展。     

Luminex液相芯片技术测定氨甲喋呤对映体耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体

目的 探讨氨甲喋呤(MTX)对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性.方法 用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株,用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷...