日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫小鼠CD11c~+CD8_α~-DC对过敏性哮喘的抑制作用

目的研究日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫小鼠CD11c+CD8α-树突状细胞(DC)亚群对卵清白蛋白(OVA)诱发的过敏性哮喘的抑制作用。方法 BALB/c小鼠经腹腔及足垫注射SEA 50μg/只,每周1次,共4次。用抗体包被的免疫磁珠分离小鼠脾CD11c+CD8α+DC与CD11c+CD8α-DC亚群。另取18只BALB/c小鼠,随机分为4组,A组为健康对照组,B组为OVA致敏单纯哮喘组,C组为过继转移SEA免疫CD11c+CD8α+DC组,D组为过继转移SEA免疫CD11c+CD8α-DC组。C、D组小鼠分别经尾静脉过继转移5×105个CD11c+CD8α+DC和5×105个CD11c+CD8α-DC,1h后B、C、D组小鼠同时用OVA诱发哮喘,4周后剖杀,取肺组织,做病理切片,经苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺部炎症变化。结果 A组小鼠肺组织无炎症反应;B组小鼠肺组织炎症反应广泛且严重,在支气管及肺泡周围有大量炎性细胞浸润;C组小鼠肺组织炎症反应仍较明显;D组小鼠肺组织炎症反应较B、C组显著减轻,仅有少量炎细胞浸润。4组小鼠按照Underwood标准进行病理评分,总分分别为0、14.00±1.00、12.33±0.58和7.20±1.30,差异有统计学意义(P<0.05)。结论日本血吸虫SEA免疫小鼠CD11c+CD8α-DC亚群对过敏性哮喘有抑制作用。     

过继转移日本血吸虫感染鼠DC亚群对过敏性哮喘肺组织病理改变及CCL2表达的抑制作用

目的通过过继转移日本血吸虫感染鼠树突状细胞(DC)亚群,探讨DC亚群在抑制过敏性哮喘中的作用。方法用CD8α和CD11c磁珠分离纯化日本血吸虫感染鼠DC亚群,分别获得CD8α-CD11c+DC和CD8α+CD11c+DC。将24只BALB/c小鼠随机分为4组:A组为健康对照组,CD8α-DC/OVA组(B组)为过继转移日本血吸虫感染鼠DCCD8α-CD11c+亚群并诱发过敏性哮喘组,CD8α+DC/OVA组(C组)为过继转移日本血吸虫感染鼠DC CD8α+CD11c+亚群并诱发过敏性哮喘组,OVA组(D组)为单纯诱发过敏性哮喘组。B、C两组小鼠分别经尾静脉过继转移5×105 DC亚群,1h后B、C和D组均开始诱发哮喘。4周后处死小鼠,取左肺做病理切片和免疫组织化学染色,观察炎症变化,检测肺组织CCL2表达情况。结果与C组和D组比较,B组肺部炎症显著减轻,按照Underwood标准,A、B、C和D等4组总评分分别为0、7.67±2.34、11.17±1.47和11.75±2.22,差异有统计学意义(P<0.05)。4组小鼠肺组织CCL2平均吸光度值分别为0.0327±0.0154、0.3967±0.0250、0.5274±0.0281和0.5631±0.0282,差异有统计学意义(P<0.05)。结论日本血吸虫感染鼠CD8α-CD11c+DC亚群对过敏性哮喘小鼠肺组织病理改变及CCL2的表达有抑制作用。     

蛋白芯片在心血管疾病研究中的现状与进展

多年来,人们一直在寻找、探索各种新的检测手段和方法,试图阐明在心血管疾病的发生发展中蛋白质的作用机制。目前大多数研究仍依赖于较大样品量的低通量技术,面对庞杂的心血管疾病遗传信息,传统的单蛋白研究已不适用于细胞、组织中单个蛋白的研究,必须借助于高通量的方法对相关     

流式细胞术检测小鼠脾细胞内细胞因子刺激方案的筛选

目的建立流式细胞术检测小鼠细胞内细胞因子的方法。方法取5只BALB/c小鼠建立哮喘模型,4周后处死,制备脾脏单个核淋巴细胞悬液,分别按A、B、C3个刺激方案培养。A方案组:用25ng/mlPMA、1μg/mlIonomy-cin以及10μg/mlBFA刺激4h;B方案组用50ng/mlPMA、1μg/mlIonomycin以及10μg/mlBFA刺激4h;C方案组用3μg/mlConA刺激2d,加入10μg/mlanti-CD3、2μg/mlanti-CD28和10μg/mlBFA后继续刺激5h。培养后各组细胞悬液根据检测目的分成若干检测管,结合固定破膜处理技术,进行细胞表面抗原CD4及细胞内因子IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ染色,用流式细胞仪分析,比较不同刺激条件下各种细胞内因子的表达情况。实验设未刺激对照、激活对照、胞内染色对照及同型对照。结果 A方案组中5只鼠的细胞内因子表达率IL-4为(5.96±1.199)%,IFN-γ为(7.98±3.939)%,IL-10为(4.78±2.366)%,IL-5表达率均低于1%;B方案组中5只鼠的细胞内因子表达率IL-4为(5.76±1.108)%,IFN-γ为(7.44±2.269)%,IL-10为(4.50±1.560)%,IL-5表达率均低于1%;C方案组5只鼠IL-10、IL-5表达率分别为(3.14±0.288)%和(6.82±1.996)%。结论 25ng/mlPMA、1μg/mlIonomycin及10μg/mlBFA刺激4h的方案较适合小鼠淋巴细胞IL-4、IFN-γ的检测;3μg/mlConA刺激2d,加入10μg/mlanti-CD3、2μg/mlanti-CD28和10μg/mlBFA继续刺激5h的方案适合IL-5、IL-10的检测,并且均是从单个核细胞水平对细胞内因子进行检测。