Ⅰ型登革病毒感染后不同病程病毒核酸及其IgM抗体的变化规律

目的 探讨Ⅰ型登革病毒感染后病毒核酸及其IgM抗体在患者体内的变化规律,为指导临床快速、准确地诊断登革热提供理论支持.方法 回顾性分析2014年7-11月收集的Ⅰ型登革病毒感染者临床资料和血清标本,应用实时荧光定量RT-PCR和ELISA法分别检测病毒核酸和IgM抗体,分析不同病程两者的变化规律.结果 共检出222例阳性患者,其中病毒核酸阳性137例,IgM抗体阳性146例,两者同时阳性61例.病程急性期(发病l～5d)病毒核酸阳性率为75％ ～ 100％,IgM抗体阳性率在发病第1～2天较低,但第3～5天快速升高至50％ ～ 70％;进入恢复期(发病6～10 d)病毒核酸阳性率即快速降低,8d后仅20％左右,但IgM抗体阳性率显著升高达95％～100％.急性期和恢复期病毒核酸与IgM抗体检测结果构成比差异有统计学意义(x2=63.41,P＜0.05).结论 Ⅰ型登革病毒感染者急性期病毒核酸阳性率在75％以上.恢复期IgM抗体阳性率在95％以上.根据病程合理选择检测方法,可提高登革热的诊断效率.     

基孔肯雅病毒定量反转录聚合酶链式反应绝对定量检测方法的建立

目的 建立检测基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR快检方法，为其实验室诊断与定量分析提供技术方法。方法 基于基孔肯雅及其相近虫媒病毒基因组序列的系统比对分析，筛选、鉴定基孔肯雅病毒特异性核酸序列，并以人GAPDH基因为内参照，设计引物、探针，采用L₉(3⁴)正交实验确定最佳反应条件，建立基于TaqMan探针法的基孔肯雅病毒qRT-PCR快检方法，并详细分析所建立方法的灵敏度、特异度、重复性及覆盖面。以克隆的检测靶标核酸片段为阳性品，制作标准曲线，建立绝对定量方法。结果 经系统优化，建立了基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR定性、定量检测方法，反应体系包括：基孔肯雅病毒、GAPDH内参照检测引物探针，RT/Taq酶混合液，反应缓冲液及阴阳性参考品。所建立方法与ECSA亚型ROSS株、IOL分支LR2006株，亚洲型181/25株以及2010东莞流行株均可获得阳性结果，而与所试其他18种黄病毒、甲病毒、布尼安属相近虫媒病毒无交叉反应，检测下限为580拷贝/mL。定量分析表明，在5.80×10²～5.80×10^10<...     

黄热病毒NS1蛋白的制备及免疫原性鉴定

目的 原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus, YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法 以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印记、免疫荧光和酶联免疫吸附实验验证其免疫原性。结果 成功构建重组质粒pQE30-YFV NS1,制备纯化可溶性YFV NS1蛋白;该重组YFV NS1蛋白与登革病毒、黄热病毒、乙脑病毒、西尼罗河病毒免疫小鼠腹水及寨卡病毒NS1、YFV NS1蛋白免疫小鼠血清均发生反应,重组YFV NS1蛋白免疫小鼠血清与YFV感染细胞超声上清也发生反应。结论 获得高纯度YFV NS1重组蛋白,且具有较好的免疫原性,含天然NS1蛋白表位,为基于NS1黄热病毒早期抗原诊断方法和蛋白功能研究奠定基础。     

基孔肯雅热IgG抗体胶体金快速检测试纸条初步评价

<正>基孔肯雅热由基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)引起,通过蚊虫叮咬在人群中传播,全球约有40个国家流行,其典型临床症状有高热、头痛、肌肉关节痛、出血和出疹等[1]。我国多为输入性的散发病例[2]。2010年10月在广东省东莞市首次暴发聚集性疫情[3],导致数百人发病。本研究基于前期筛选的CHIKV特异性重组抗原CHIK23[4],采用免疫层析技术建立检测CHIKV IgG抗体的快速检测试纸条,同时