单核细胞增生李斯特菌药敏及部分菌株的血清和PFGE分型分析

目的 了解2016年全国10家儿童医院单增李斯特菌感染的临床及其病原学特征.方法 搜集临床病例信息、分析分离菌株病原学特征和药敏结果;对部分菌株采用血清分型,脉冲场凝胶电泳技术和多位点序列分型方法进行分子分型.结果 13株菌株中,5种抗生素药敏试验结果有1株分离株对庆大霉素中介,其他菌株对5种抗生素均敏感.通过临床信息...     

2017年山东省三个城市食源性腹泻中胃肠炎病毒的病原谱特征分析

目的分析山东省三个城市食源性腹泻病例中胃肠炎病毒病原谱的分布和流行特征。方法于2017年1—12月,以山东省济南、烟台和临沂市的6家哨点医院为研究现场,收集1397例食源性腹泻病例的粪便标本,同时获取其基本信息和临床症状。采用双重荧光定量RT PCR分别检测如病毒基因Ⅰ组(NoV GⅠ)和Ⅱ组(NoV GⅡ)、札如病毒(SaV)和人星状病毒(HAstV),采用单重荧光定量RT PCR检测轮状病毒A组(RVA),采用荧光定量PCR检测肠道腺病毒(EAdV),对病毒的特异性片段进行测序、分型。比较不同特征病例胃肠炎病毒阳性率以及阳性和阴性病例间临床症状的差异。结果年龄M(P25,P75)为23(1,42)岁;以男性为主,占57.48%(803例);≤5岁儿童居多,占36.36%(508例)。胃肠炎病毒阳性率为33.93%(474例),济南、临沂和烟台市分别为32.03%(147/459)、41.54%(189/455)和28.57%(138/483)(P<0.001);NoV GⅡ组的阳性率最高,为16.54%(231例),5月(24.75%,50/202)和6月(19.59%,38/194)出现高峰,以GⅡ.P16/GⅡ.2型(48.28%,56/116)为主。阳性病例中,44.51%(211/474)出现呕吐症状,高于阴性病例(34.13%,315/923),差异有统计学意义(P<0.001)。结论山东省食源性腹泻病例中男性、5岁以下儿童居多;NoV GⅡ流行强度较高,发病高峰为春夏季,病毒性胃肠炎临床症状不典型。     

2015-2017年聊城市腹泻病例中沙门氏菌分子分型及耐药性研究

目的 对2015-2017年聊城地区主动监测哨点医院腹泻患者中分离到的沙门氏菌进行病原学分析,了解沙门氏菌的感染现状及血清型分布、分子分型特征和耐药情况。方法 对2015-2017年分离自腹泻患者的41株沙门氏菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药物敏感性测试,并用BioNumerics软件分析菌株之间的相似度,用微量肉汤稀释法进行菌株耐药性检测。结果 腹泻患者中沙门氏菌总分离率为7.16%,且不同年龄段分离率存在差异。分离的沙门氏菌共有8个血清型,其中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌分别为18株和7株,为优势血清型;PFGE分析发现41株菌共产生了34种不同的PFGE带型,相同血清型的沙门氏菌的PFGE带型比较相近,不同血清型的PFGE带型具有多态性,未发现菌株成簇存在现象。测试菌株对四环素耐药率最高为73.17%,多重耐药率达68.29%,发现6株携带不同耐药基因类型的产广谱β-内酰胺酶的鼠伤寒沙门氏菌。结论 聊城地区沙门氏菌具有一定的血清型及遗传的多样性,高耐药和多重耐药现象严重,应加强病例及环境联合耐药监测。     

2018年浙江省余姚市一起伊桑吉沙门菌引起的食源性疾病暴发事件调查

目的研究2018年浙江省余姚市发生的一起因食用被伊桑吉沙门菌污染的烤鸭引起的食源性疾病暴发事件,了解病原的生物学特性、分子分型及药敏特征。方法使用国家标准对可疑食品样本进行致病菌检测,对收集的沙门菌进行系统生化和血清型鉴定,利用纸片扩散法进行药敏试验,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和全基因组测序（WGS）方法进行分子分型分析,通过查阅患者就诊记录和回访进行流行病学、临床和实验室调查。结果经流行病学调查和实验室检测确认为一起因食用被伊桑吉沙门菌污染的烤鸭引起的食源性疾病暴发事件,共分离到3株伊桑吉沙门菌,均为单耐药株（耐复方新诺明）。 3株菌PFGE带型完全一致,均为ST216型,全基因组多位点序列分型（wgMLST）分析发现2株患者分离株存在1个差异等位基因,但均携带126种已知毒力基因和1个氨基糖苷类耐药基因aac（6）-Iaa。结论此次事件为一起因食用被ST216型伊桑吉沙门菌污染的烤鸭引起的食源性疾病暴发事件,为余姚市首次报道。     

重组缩短的葡萄球菌类肠毒素X蛋白克隆表达及催吐活性评价

目的 分析缩短的葡萄球菌类肠毒素X(truncated Staphylococcal enterotoxin-like toxin X,tSElX)氨基酸多态性,对其进行克隆表达纯化并对催吐活性进行评价。方法 将tselx序列与本课题组前期完成测序的145株CC398菌株基因组序列及NCBI数据库进行比对分析。设计引物扩增tselx目的基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序鉴定。经限制性内切酶BamHⅠ和EcoR Ⅰ双酶切后将目的片段构建于质粒pGEX-6P-1及pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后,IPTG诱导蛋白表达。将以包涵体形式表达的蛋白进行变性和复性,用亲和层析法和超滤法对表达产物进行纯化。将纯化的tSElX蛋白以250 μg/kg喂饲普通狨猴,观察呕吐反应。结果 tselx基因在我国不同来源(患者、健康人群和动物)的145株CC398菌株均存在。我国菌株编码蛋白的氨基酸序列同源性为100.0%,与4株美国菌株的同源性分别为97.8%(1株)和98.9%(3株)。通过两套表达系统及不同诱导条件,tSElX均以包涵体形式表达。通过变性及复性,获得高纯度的可溶性重组蛋白tSElX。在250 μg/kg剂量下tSElX蛋白不能引起普通狨猴的呕吐反应。结论 tSElX氨基酸序列在CC398菌株中普遍存在,且具有一定保守性。高纯度的可溶性tSElX重组蛋白在250 μg/kg剂量下不具有普通狨猴催吐活性。     

2013-2016年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的血清型、耐药性及分子分型分析

  目的   了解分离于2013-2016年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的主要血清型、耐药谱和分子分型特点。   方法   采用微量肉汤稀释法测定LM抗生素敏感性, 使用玻片凝集法和PCR方法确定其血清型, 利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)进行分子分型。   结果   191株LM对8种抗生素总体基本敏感, 四环素耐药率最高(15/191, 7.85%), 8种抗生素耐药性连续监测4年无差异(P=1.000);血清型1/2a占38.82%(66/170), 1/2b占18.82%(32/170), 1/2c占42.36%(72/170); SDSRZXDZ016、S2014L031和SDSRZX030带型共占33.78%, 呈明显聚集性, 为优势带型; 优势ST型为ST9、ST8和ST121, 占81.18%(69/85), 临床常见ST3, ST7和ST87占8.23%(7/85), 未发现新ST型。   结论   2013-2016年分离于山东省的食源性LM菌株对所测定的大多数抗生素敏感, 但已经发现耐四环素和红霉素菌株; 优势血清型为1/2c和1/2a, 未发现易引起李斯特菌病暴发的4b血清型; SDSRZXDZ016、S2014L031和SDSRZX030为山东省2013-2016年PFGE优势带型; 主要ST型为ST8、ST9和ST121, 临床常见的ST3、ST7和ST87型均从食品中分离到, 应予以重视。     

山东省2011-2014年志贺氏菌分子分型及耐药性分析

  目的  通过对山东省2011-2014年分离的志贺氏菌（Shigella）进行血清、毒力基因、分子分型和药敏等分析,了解山东省志贺氏菌的特性及流行趋势。  方法  用玻片凝集法进行血清分型,PCR方法扩增相关毒力基因,用脉冲场凝胶电泳技术进行分子分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株抗生素敏感性。  结果  44株志贺氏菌主要为福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）（54.55%）和宋内志贺氏菌（Shigella sonnei）（43.18%）。ipaH、set1、sen、ial毒力基因携带率分别为100%、43.18%、56.82%、50.00%。经脉冲场凝胶电泳分型（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）,福氏志贺氏菌被分为18种带型,且总体相似度偏低;宋内志贺氏菌被分为14种带型,且89.47%的菌株相似度在90%以上。44株志贺氏菌对15种抗生素中的14种均存在不同程度的耐药。93.18%的菌株为多重耐药菌株。  结论  山东省志贺氏菌以福氏和宋内血清群为主,毒力基因携带率高,有聚类分布出现,耐药严重,应加强对志贺氏菌菌型、溯源和耐药性的监测。     

血流感染金黄色葡萄球菌分子生物学特征

目的 了解血流感染金黄色葡萄球菌分子分型、毒力基因及耐药基因携带情况,为临床诊疗提供依据。方法 收集2018-2020年山东省某医院血流感染金黄色葡萄球菌,通过全基因组测序(WGS)和生物信息学分析得到多位点序列分型(MLST)、毒力基因和耐药基因。微量肉汤稀释法测试对常用抗菌药物耐药性。利用核心基因组多位点序列分型(cgMLST)分析菌株间相关性。结果 共收集62株血流感染金黄色葡萄球菌,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)15株,检出7种STs,优势型别为ST59;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株47株,检出11种STs,以ST22最多见。检出31种毒力基因和16种肠毒素基因。耐药基因携带率高达98.4%(61/62),检出率最高的耐药基因为blaZ(83.9%,52/62),其次为erm(c)(41.9%,26/62)、mecA(24.2%,15/62)。MRSA耐药基因检出率高于MSSA。对青霉素(96.8%,60/62)、红霉素(82.2%,51/62)、克林霉素(45.2%,28/62)耐药率较高。对利奈唑胺(1.6%,1/62)、替加环素(1.6%,1/62...     

一起由宋内志贺菌引起食物中毒的病原菌检测分析

目的通过实验室检测分析一起食物中毒的病原菌。方法按GB/T 4789.36—2008、GB 4789.4—2010、GB4789.10—2010、GB 4789.5—2012《食品安全国家标准食品微生物学检验》中的方法,对24份患者吃剩的食物、12份患者大便进行肠出血性大肠埃希菌O157∶H7、沙门菌、金黄色葡萄球菌、志贺菌的分离培养及生化鉴定;同时采用多重PCR检测技术对24份患者吃剩的食物进行以上项目的检测。并对检出的志贺菌菌株进行血清凝集试验、药敏试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 24份患者吃剩的食物中检出宋内志贺菌1株,12份患者大便中检出宋内志贺菌8株,9株宋内志贺菌PFGE基因图谱相似性系数≥0.98。结论由宋内志贺菌Ⅰ相导致了这起食物中毒的发生。建议各级卫生监督部门要加大监督检查力度,从而减少食物中毒的发生,切实保障儿童身体健康。