DNMT3a基因shRNA质粒表达载体的构建及其沉默作用

目的以DNMT3a mRNA保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列(HK),并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p Gensil-1中,构建p Genesil-1-DNMT3a-shRNA、p Genesil-1-HK-shRNA重组质粒。方法应用转化技术将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中,通过卡那霉素抗性筛选出阳性菌落后提取质粒进行酶切和测序鉴定,应用质粒转染技术转染耐顺铂肺腺癌A549细胞(A549-DDP),利用RT-PCR技术检测转染重组质粒24、48、72 h后DNMT3a的沉默效率。结果测序结果与合成序列一致,重组质粒不能够被PstⅠ切开,转染p Genesil-1-DNMT3a-shRNA能够明显抑制DNMT3a的表达,抑制率分别达到25.5%,56.2%,63.4%,且呈明显时间依赖性,而p Genesil-1-HKshRNA无明显抑制作用。结论成功构建了DNMT3a基因shRNA及HK质粒真核表达载体,为进一步实验研究奠定了基础。     

肺癌患者血清肿瘤标志物与EGFR突变相关性研究

目的探究肺癌患者血清细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、鳞状上皮细胞抗原(SCC)浓度与EGFR(表皮生长因子受体)基因突变的关系,为EGFR基因突变提供可靠的预测指标。方法收集174例肺癌患者术前血清及术后肺癌组织;电化学发光法检测血清肿瘤标志物浓度,利用突变扩增阻滞系统(ARMS)检测肺癌组织EGFR基因突变;分析EGFR突变与肺癌患者临床病理特征的关系;分析血清肿瘤标志物与肺癌患者EGFR突变的关系。结果 174例肺癌患者中,78例发生突变,其中以19号外显子缺失(19-del)和21号外显子L858R突变为主;女性肺癌患者EGFR突变率显著高于男性患者(χ2=34.027,P=0.000),腺癌患者EGFR突变率显著高于鳞癌患者(χ2=34.027,P=0.002),非吸烟患者EGFR突变率显著高于吸烟患者(χ2=40.397,P=0.000);EGFR野生型肺癌患者血清CYFR21-1、NSE、SCC浓度显著高于EGFR突变者[4.80(2.50,8.30)ng/mL vs.2.50(1.90,4.60)ng/mL,P=0.000;13.05(10.63,18.35)U/L vs.11.00(9.20,13.10)U/L,P=0.010;1.00(0.70,1.58)ng/mL vs.0.70(0.55,1.00)ng/mL,P=0.000]。结论EGFR突变多发生在非吸烟女性腺癌患者,血清肿瘤标志物作为EGFR基因突变的预测指标具有一定的临床应用价值,值得扩大样本量进一步研究。     

三种血清标志物联合检测在早期肝细胞肝癌中的诊断价值

目的 探讨血清高尔基体蛋白73(GP73)、α-L岩藻糖苷酶(AFU)和甲胎蛋白(AFP)联合检测对早期肝细胞癌(HCC)的诊断价值.方法 收集2016年3月至2017年3月该院肝病患者222例,根据疾病类型分为早期HCC组(74例)、晚期HCC组(27例)、肝硬化组(74例)、慢性乙型肝炎组(47例),另选取同期体检健康者49例作为健康对照组.分别测定各组血清AFP、AFU和GP73水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价3项指标单独和联合检测对早期HCC的诊断价值.结果 早期HCC组GP73、AFU和AFP水平均明显高于肝硬化组、慢性乙型肝炎组和健康对照组(P＜0.05).在肝癌筛查时,AFP单独诊断的ROC曲线下面积(AUC)为0.910(95％CI:0.864～0.936),两项指标联合时GP73和AFP联合诊断的AUC最大[0.925(95％CI:0.889～0.950)],灵敏度最高(95.0％).在鉴别诊断早期HCC与肝硬化时,单独诊断以GP73的AUC最大[0.842(95％CI:0.746～0.879)],特异度最高(86.5％);两项指标联合时GP73和AFU联合诊断的AUC最大[0.901(95％CI:0.788～0.907)].结论 GP73与AFP联合检测可以提高HCC筛查的诊断效能,GP73和AFU联合诊断能够提高早期HCC诊断效能,对于早期HCC和肝硬化的鉴别诊断具有重要意义.     

胸腔积液和腹水清蛋白检测假性增高1例

正胸腔积液和腹水总蛋白测定是鉴别渗出液和漏出液的重要指标之一~([1]),一般认为胸腔积液和腹水总蛋白高于25g/L为渗出液,低于25g/L则为漏出液~([2])。清蛋白在胸腔积液和腹水中的检测主要用于提示血清-清蛋白梯度,能够比较真实地反映门静脉压力,有利于提高胸腔积液和腹水性质鉴别的准确性~([3-4])。基于溴甲酚绿的比色法检测清蛋白水平操作简单,特异性强,目前在国内常用于清蛋白的水平检     

FSTL1在急性冠脉综合征患者血清中的表达水平及临床意义

目的观察卵泡抑素样蛋白-1(FSTL1)在不同类型的急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清中的水平变化及其临床诊断价值。方法收集临床确诊的ACS患者(ACS组)98例,分为ST段抬高型心肌梗死组(STEMI组)34例、非ST段抬高型心肌梗死组(NSTEMI组)28例、不稳定心绞痛组(UA组)36例,同时选取冠状动脉造影结果阴性的患者20例作为对照组。用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定4组血清中FSTL1的水平,分析FSTL1与其他指标的相关性及诊断价值。结果 ACS各组血清FSTL1水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。ACS组血清FSTL1水平与心肌肌钙蛋白(cTNT)、Gensini评分和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平成正相关,相关系数(r)分别为0.210、0.236、0.219。FSTL1诊断ACS的ROC曲线下面积(AUC)可达0.910(95%CI:0.832~0.988),但次于cTNT。FSTL1最佳界值为5.65μg/L,特异度84.2%,灵敏度77.5%。FSTL1联合cTNT和HDL对诊断ACS的效能最高,AUC=0.945(95%CI:0.909~0.981)。结论 ACS患者血清的FSTL1水平与炎性反应及冠状动脉狭窄程度存在一定的相关性,对于判断患者冠状动脉狭窄的严重程度及预后具有一定的临床价值。     

三种贝类的脂类成分及其营养价值评价

<正>贝类中脂类成分含量大约在2%左右,但是在脂肪酸组成中,n-3多不饱和脂肪酸(主要是EPA和DHA)含量相当丰富。EPA(二十碳五烯酸)具有明显降低血浆中的三酰甘油和胆固醇,改善机体脂质代谢,抗炎抗癌和提高免疫力作用[1];DHA(二十二碳六烯酸)则促进大脑发育,预防老年     

二十二碳六烯酸-磷脂对正常小鼠脂质代谢的影响

目的 探讨二十二碳六烯酸-磷脂(DHA-PC)对正常小鼠脂质代谢的调节作用.方法 从鸢乌贼卵中提取制备DHA-PC,其中DHA含量为30%.采用添加量为1%和4%的DHA-PC饲喂正常小鼠3W,以大豆磷脂和DHA为对照组,分别测定血清和肝脏中的脂质水平以及肝脏和大脑中的脂肪酸组成.结果 与大豆磷脂对照组比较,DHA-PC两个剂量组均可以显著降低小鼠血清和肝脏中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量(P＜0.05;P＜0.01),同时能够提高肝脏以及大脑中DHA含量.与DHA对照组比较,不同添加量的DHA-PC能够显著降低肝脏中的TC以及TG含量(P＜0.05;P＜0.01).结论 DHA-PC可以有效改善正常小鼠的血脂水平.     

6 种化学发光系统检测肿瘤标志物的应用评估分析

目的　探讨6 种化学发光系统检测甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、总前列腺特异抗原（tPSA）、游离前列腺特异性抗原（fPSA）、糖类抗原CA199（CA199）、糖类抗原CA153（CA153）和糖类抗原CA125（CA125）仪器参数、西格玛值（σ）、可比性及临床可接受程度。方法　收集6 种系统的检测速度,试剂仓位,开展项目数等硬件参数,使用单位半年质控数据,计算各系统检测项目的精密度及σ 值。以Roche E602 电化学发光系统为参考系统,根据EP9-A2 文件的要求,对检测结果进行方法比对和偏倚评估。结果　① 比较6 种检测系统的检测速度,试剂仓位,软件功能等参数,6 种检测系统基本满足临床需求。② Roche E602 与A厂家比较,多数检测项目σ 值多数高于6σ 水平;B,D 和E 三家厂家检测项目σ 值基本处于优秀水平（5~6）;C 厂家多个项目小于4σ 水平,存在较大差距。③除B厂家外,其它厂家与Roche E602 多数项目偏移超过1/2 TEa,临床不可接受。结论　实验室同时存在多种不同品牌化学发光检测系统检测同一检验项目时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性能,以保证检验结果的可比性。