低表达miR-33a诱导胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药

背景与目的：胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤。由于其对一线化疗药物吉西他滨的耐受,往往导致预后较差。MicroRNA(miRNA,miR)是一类非编码小RNA,参与肿瘤的多种生物学功能。miR-33a作为代谢相关的miRNA被广泛研究,而与耐药之间关系的报道较少。该研究通过探讨miR-33a参与胰腺癌吉西他滨耐药及其作用解析,为胰腺癌化疗提供新的理论依据。方法：采用原位杂交方法检测胰腺癌组织中miR-33a的表达情况;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各胰腺癌细胞系中miR-33a的表达情况。利用SW1990和Miapaca-2胰腺癌亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株(SW1990^res,Miapaca-2^res)及miR-33a稳定表达细胞株(SW1990-miR-33a,Miapaca-2-miR-33a、SW1990^res-miR-33a和Miapaca-2^res-miR-33a);采用细胞毒性实验检测miR-33a的表达对胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的影响。结果：miR-33a在胰腺癌组织样本中普遍低表达。与HEK293T正常人胚肾细胞相比,其在各胰腺癌细胞系中均呈低表达。miR-33a过表达可以增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,能有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。结论：miR-33a在胰腺癌组织中低表达,导致胰腺癌患者对吉西他滨获得性耐药。增加miR-33a表达,从而增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,为开发新型胰腺癌分子靶向治疗药物,联合化疗提供新的理论依据。     

ELISA高通量筛选PIM靶向抑制剂的研究

背景与目的：Pim家族是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因,包括Pim-1、Pim-2、Pim-3。研究发现,Pim能够抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,导致肿瘤发生。本研究利用ELISA反应原理建立高通量筛选体系,对Pim抑制剂进行筛选,为药物的应用和解决恶性肿瘤临床治疗的难题提供研究基础。方法：通过计算机辅助药物设计的手段,以蔓生百部碱母核三环酰胺作为核心结构合成系列衍生物;利用Pim重组蛋白和Bad重组蛋白可以与Ni2+特异性结合的亲和层析原理进行重组蛋白的纯化精制;利用ELISA方法,通过Pim激酶磷酸化促凋亡蛋白分子Bad在112位丝氨酸的反应,建立筛选Pim靶向抑制剂的体系。结果：0.01 mmol/L的IPTG在37℃条件下,诱导Bad蛋白2 h,可以获得最大量的可溶性Bad重组蛋白;0.02%的阿拉伯糖在37℃条件下,诱导Pim-1、Pim-2、Pim-3蛋白3 h,可以获得最大量的Pim重组蛋白;ELISA结果显示,Pim激酶与Bad底物之间的作用存在剂量依赖性反应关系,进而成功建立药物筛选体系;初步筛选出低分子化合物T-18,在体外能有效抑制Pim激酶活性。结论：利用ELISA反应原理建立的筛选药物方法,是一种经济、简单、快速、高效、敏感的筛选手段,并初步筛选出小分子化合物T-18,能够抑制Pim激酶活性,阻断Pim对凋亡蛋白分子Bad的磷酸化过程,进而抑制肿瘤的发生。     

异常高表达TCTP通过上调Bcl-xL抑制胰腺癌细胞的细胞凋亡

背景与目的：胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,病死率高,5年生存率<5%,目前尚无很好的治疗方法。翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)是一个生长相关的蛋白质,有促进肿瘤生长,抗细胞凋亡的作用,目前有研究显示TCTP在肝癌、结直肠癌中异常高表达,但其在胰腺癌中的相关研究报道较少。本研究通过对TCTP在胰腺癌细胞中的表达及其生物学作用机制分析,致力于寻找新的肿瘤分子靶点,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法：采用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中TCTP表达情况;RT-PCR检测胰腺癌细胞株中TCTP的mRNA表达,Western blot方法检测胰腺癌细胞株中TCTP和Bcl-xL蛋白表达水平;免疫荧光染色方法检测TCTP在胰腺癌细胞中的定位;小分子RNA干扰技术沉默胰腺癌细胞中TCTP表达后,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测胰腺癌细胞的细胞周期和细胞凋亡等生物学指标。结果：与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中TCTP异常高表达,并且主要位于胰腺癌细胞的细胞质中;不同胰腺癌细胞株中TCTP也呈高表达;siRNA沉默胰腺癌细胞中的TCTP,显著抑制细胞的增殖速度和细胞周期进程,促进细胞的凋亡;在胰腺癌细胞中Bcl-xL表达与TCTP表达呈正相关,沉默TCTP可以下调Bcl-xL的蛋白表达。结论：异常高表达TCTP,通过上调Bcl-xL抑制细胞凋亡,从而促进胰腺癌的发生和发展。     

氟化物对人多形核白细胞SOD活力变化的影响

目的　通过测定超氧化物歧化酶（SOD）活力变化,观察刀豆蛋白A（ConA）及与NaF对多形核中性粒细胞（PMN）超氧阴离子自由基（