RNA干扰沉默Livin基因对裸鼠移植瘤生长的影响

目的 利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白基因Livin基因在人肺腺癌细胞株SPC-A-1中的表达,探讨Livin基因表达沉默对SPC-A-1裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以慢病毒为载体,将携带针对Livin基因短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)及无关序列片段的shRNA转染SPC-A-1细胞,转染成功后将转染Livin shRNA的SPC-A-1细胞(实验组)、转染无关序列的SPC-A-1细胞(阴性对照组)及未转染任何序列的SPC-A-1细胞(空白对照组)分别接种于BALB/C裸鼠右腋皮下,复制SPC-A-1裸鼠皮下移植瘤模型,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间、成瘤率、瘤体体积及重量,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;RT-PCR、免疫组织化学法分别检测Livin mRNA及蛋白的表达情况,原位末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测移植瘤组织凋亡情况.结果 与空白对照组、阴性对照组比较,实验组裸鼠移植瘤成瘤时间晚,瘤体生长缓慢(F=70.509,P＜0.01),体积抑瘤率达(59.5±3.4)%;瘤体重量明显减轻(F=12.821,P＜0.01),瘤重抑瘤率达(71.1±5.6)%.实验组Livinα mRNA表达水平为(37.2±1.6)%,Livinβ mRNA表达水平为(29.4±1.1)%,明显低于空白对照组[(63.3±3.8)%,(53.2±3.4)%]及阴性对照组[(66.1±2.6)%,(52.3±3.1)%],差异有统计学意义(Fα=45.309,Fβ=30.076,均P＜0.01).实验组Livin蛋白表达水平为(15.3±2.8)%,明显低于空白组的(51.3±2.1)%和阴性对照组的(52.5±2.5)%(F=78.92,P＜0.01).实验组瘤组织细胞凋亡明显增多,凋亡率为(35.4±3.2)%,明显高于空白对照组的(5.4±1.3)%和阴性对照组的(8.6±1.5)%,差异有统计学意义(F=14.509,P＜0.01).结论 沉默SPC-A-1细胞中Livin基因表达可有效抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,Livin基因有望成为肺癌治疗的靶点之一.

Abstract：

Objective To explore the in vivo inhibitory effect of Livin gene silencing by RNA interference on xenograft of lung adenocarcinoma SPC-A-1 cells in BALB/C nude mice. Methods Three different BALB/C nude mice models were established by subcutaneously inoculating differently treated SPC-A-1 cells into 3 nude mice groups: the blank control group was inoculated with blank SPC-A-1 cells,while the negative group was inoculated with cells transfected with lentivirus-delivered negative shRNA, the experimental group was inoculated with cells with lentivirus-delivered Livin shRNA. Then the growth of tumors was observed, and the volume and weight of the tumors were measured at different time points. The curve of tumor growth was then described, and the inhibition rate was calculated. Livin gene expression in the tumor tissues was determined by RT-PCR and Inmunohistochemistry. Cell apoptosis of tumor tissues was detected by TUNEL. Results Slower tumor growth, smaller tumor volume and lighter tumor weight were observed in the experimental group as compared to the blank and negative groups ( F = 70. 509, P ＜ 0. 01; F = 12. 821, P ＜ 0. 01 ). The inhibition rate of tumor volume was ( 59. 5 ± 3.4 ) % , and the inhibition rate of tumor weight was (71. 1 ±5.6)%. Livinα mRNA and Livinβ mRNA expressions in the experimental group were significantly lower than the 2 control groups [ ( 37. 2 ± 1.6 ) % versus ( 63.3 ± 3.8 ) % , ( 66. 1 ±2.6)% ;(29.4±1.1)% versus (53.2 ±3.4)% ,(52.3 ±3. 1)% (Fα =45.309, P ＜0.01 ;Fβ =30.076,P ＜ 0. 01 ) ] . Livin protein expression level was also significantly lower than the blank and the negative groups [ ( 15.3 ± 2. 8 ) % versus(51.3 ± 2. 1 ) %, ( 52. 5 ± 2. 5 ) %, F = 78. 92, P ＜ 0. 01 ]. The apoptosis rate in the experimental group was significantly higher than that in the 2 control groups [ ( 35.4 ± 3.2 ) %versus(5.4±1.3)%,(8.6 ± 1.5)%,F= 14.509, P＜0.01]. Conclusion The lentivirus-delivered Livin shRNA was shown to inhibit the proliferation of transplantation tumor of lung carcinoma effectively, and Livin may be a target for gene therapy in lung cancer.     

RNAi沉默livin基因对裸鼠移植瘤生长及Ki67蛋白表达的影响

目的利用慢病毒携带的livin基因短发夹RNA(shRNA)干扰裸鼠移植瘤中Livin蛋白表达,探讨其对肺腺癌裸鼠移植瘤生长及Ki67蛋白表达的影响。方法建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,待移植瘤长至100mm3左右时,以携带livin基因shRNA慢病毒载体注入移植瘤,观察肿瘤生长情况。用免疫组织化学方法检测各组Livin蛋白、Ki67蛋白表达,分析二者相关性。结果 livin基因shRNA干预组与空白对照组和阴性载体对照组相比,瘤体生长减缓,移植瘤质量明显减小(P<0.01),Livin蛋白、Ki67蛋白的表达明显降低(P<0.01,P<0.01),且Livin蛋白与Ki67蛋白的表达呈正相关(r=0.54,P<0.01)。结论利用livin基因shRNA可抑制移植瘤生长,Livin蛋白表达明显降低,Ki67蛋白的表达也降低,两者呈显著正相关。     

多层螺旋CT联合支气管镜诊治老年患者支气管异物的临床分析

目的探讨多层螺旋CT联合支气管镜对老年患者支气管异物的诊治价值。方法回顾性分析28例老年患者支气管异物的临床表现、肺部CT影像表现、支气管镜下特征及治疗方法。结果主要临床表现为发热、咳嗽、咳脓痰、喘鸣、胸闷、咯血。常误诊为肺炎、肺癌、肺结核、支气管扩张等疾病,误诊时间1m～5年。17例肺部多层螺旋CT检查可见异物的直接表现,28例均经支气管镜成功钳出异物。23例镜下直接见到异物,2例异物被肉芽组织包埋,3例吸净脓性分泌物夹除脓苔后见到异物,3例经第2次气管镜检查取出异物,1例异物合并支气管肺癌。结论联合多层螺旋CT及支气管镜检查有助于老年患者支气管异物的诊治。     

慢病毒载体在RNA干扰中的应用

慢病毒载体是以人类免疫缺陷1型病毒为基础发展起来的基因治疗载体.区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力.该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久件表达.在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的基因治疗效果.RNA干扰技术是近年来发展起来的新技术,通过产生针对特定基因的小分子干扰RNA,能高效特异地抑制特定基因的表达,在探查基因功能和治疗人类疾病方面有广阔的应用前景.     

鼻咽癌放疗后局部复发MRI动态增强灌注成像23例分析

目的:探讨鼻咽癌放疗后局部复发的MRI动态增强灌注成像的时间-信号变化特征。方法:回顾性分析总结经病理及临床证实的鼻咽癌放疗后局部复发23例,测量动态增强不同时间病灶区相对信号强度,分析复发病灶的时间-信号强度变化的曲线特征。结果:鼻咽癌放疗后复发病灶在动态增强灌注成像延时后100～140s达到强化峰值,时间一相对信号强度变化曲线特征表现为速升-缓升-缓降。结论:动态增强MRI灌注成像对鼻咽癌放疗后复发的诊断具有重要的临床价值。     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的采用人肺腺癌SPC—A-1细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,为体内研究肺腺癌发病机制及靶向治疗提供工具。方法通过直接皮下注射细胞悬液法建立裸鼠皮下移植瘤模型,以每只2×10^6SPC-A-1细胞数接种于5只裸鼠右前肢腋窝皮下,观察成瘤时间、移植瘤长径、短径、重量、体积及病理形态等情况。结果5只裸鼠均成瘤,平均成瘤时间为7d,28d后瘤体平均长径为（19．20±3．85）mm,平均短径为（14．94±2．78）mm,平均瘤体体积为（2144．10±1237．72）mm^3,平均瘤重为（1．37±0．60）g。镜下见大多数移植瘤包膜完整,瘤细胞腺样排列,呈腺癌形态,部分瘤块中央还可见局灶性坏死。结论成功建立裸鼠皮下人SPC-A-1肺腺癌模型,有利于后续体内实验。     

女性肺癌组织中Ki 67、P53表达与临床的相关性研究

目的观察女性肺癌组织中Ki67和p53表达水平与临床的关系。方法统计手术切除的女性肺癌标本,应用免疫组织化学方法检测肺癌组织中Ki67、p53的表达水平,并随访不同表达水平的Ki67、p53对预后的影响。结果 Ki67蛋白阳性率为76.79%,P53蛋白阳性率为73.21%,Ki67蛋白表达在女性肺癌不同病理类型、肿瘤分期、有无淋巴结转移上有显著性差异(P0.05),分期晚、淋巴结转移、非腺癌组表现出高Ki67表达,而本研究发现P53表达在年龄、分期、淋巴结有无转移、女性肺癌病理类型上均无统计学差异。结论 Ki67蛋白表达对临床女性肺癌诊断和预后判断可提供有效的分子生物学依据,Ki67蛋白阳性者预后差。