In-Cell Western检测细胞纤连蛋白

目的：利用In-Cell Western技术建立检测细胞纤连白（cFN）的方法.方法：对微孔培养的成骨样细胞进行固定封闭后,使用单克隆抗体对FN进行标记,经红外荧光二抗育后使用Odysssey系统对细胞进行扫描成像和数据分析.在此基础之上优化了固定剂、通透化、封闭剂和一抗浓度.果：免疫印迹法证实了In-Cell Western方法检测的特异性,当MG-63细胞密度低于90%汇合度（细胞数约1.6×10^4/孔）时,信号与细胞密度呈现较好的线性关系,最低每孔4×10^3个MG-63细胞的cFN可被检出.结论：成功地建立了一种快速、经济且高通量的cFN检测方法并将其应用于细胞外基质研究.     

人骨肉瘤MG-63细胞自分泌可溶性纤连蛋白参与细胞形态维持

目的:探讨MG-63细胞自分泌可溶性纤连蛋白(FN)在细胞形态维持中的作用。方法:将培养24 h MG-63细胞随机分成对照组、更换新鲜培养基组(不含自分泌可溶性FN)、更换培养MG-63细胞24 h的条件培养基组(含自分泌可溶性FN)和更换添加FN的新鲜培养基组(添加FN),在0.5 h、1 h和2 h观察细胞形态;采用ELISA法检测新鲜和条件培养基中可溶性FN含量;采用免疫荧光方法观察细胞微丝骨架和不溶性FN的分布变化。结果:检测新鲜和条件培养基可溶性FN浓度结果表明,条件培养基中可溶性FN含量明显高于新鲜培养基(P0.01);与对照组相比,不含自分泌可溶性FN组细胞0.5 h时回缩明显,由梭形变成圆形,1 h时开始重新铺展,2 h时形态恢复明显;含自分泌可溶性FN组和添加FN组细胞形态没有明显变化;观察细胞微丝骨架和不溶性FN分布发现,与对照组相比,不含自分泌可溶性FN组细胞0.5 h时应力纤维解聚,细胞外纤丝状FN明显减少。结论:细胞自分泌可溶性FN可能通过参与调节不溶性FN和微丝骨架的重构,参与细胞形态调节。     

糖皮质激素与骨

糖皮质激素在临床上应用广泛,但所致的骨质流失、代谢失调等不良反应也限制了其使用.本文对糖皮质激素对骨及其细胞的生理和病理生理作用进行综述,并对其不良反应发生的分子机制进行讨论.