病毒性心肌炎细胞感染模型的建立

目的 建立病毒性心肌炎细胞感染模型。方法 以柯萨奇Ｂ３ｍ病毒感染新生ＳＤ大鼠的培养心肌细胞,观察感染后细胞病变、搏动情况及超微结构的变化,检测培养液中心肌酶的改变,测定ＤＮＡ含量。结果 培养的ＳＤ大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇Ｂ３ｍ病毒后,逐步出现细胞病变,细胞停止搏动,电镜下可国胞线粒体肿胀,肌原纤维紊乱,Ｚ线模糊,髓质体增多,细胞周期分析显示细胞受阻于Ｇ１期。结论 该模型可作为体外研究病毒性心肌炎     

α烯醇化酶靶向RNA干扰对原代培养乳鼠心肌细胞能量代谢及收缩功能的影响

目的采用RNA干扰技术抑制培养大鼠心肌细胞α烯醇化酶的表达，探讨α烯醇化酶对心肌细胞能量产生和收缩功能的影响。方法针对α烯醇化酶基因，化学合成3对小片段干扰RNA（siRNA）（分别为针对α烯醇化酶mRNA406-425位点的序列1，针对α烯醇化酶mRNA656～675位点的序列2及针对α烯醇化酶mRNA754～773位点的序列3）并转染原代培养的WKY大鼠心肌细胞。采用Real—time RT-PCR和Western blot技术分别在mRNA和蛋白水平检测α烯醇化酶的表达情况，筛选其中沉默效应最好的序列（序列1）转染心肌细胞，即RNA干扰实验组，以未转染siRNA的心肌细胞为对照组，荧光素荧光素酶法检测细胞ATP水平，视频跟踪计算机测定系统测定细胞收缩反应，参数包括最大收缩幅度（dL），最大收缩速度（dL／dtmax）。结果针对α烯醇化酶mRNA 406-425位点的siRNA显著下调α烯醇化酶mRNA和蛋白的表达，并且呈剂量和时间依赖关系，200nmol／L可达到最大沉默效应，其下调α烯醇化酶mRNA和蛋白表达的最大效应分别出现在转染后24h和48h。α烯醇化酶沉默后细胞ATP产生减少（3．55×10^-7nmol／mg蛋白），dL[（0．82±0．02）μm]和dL／dtmax[（2．7±0．3）μm／s]下降。结论应用siRNA技术靶向α烯醇化酶mRNA406～425位点可有效下调心肌细胞a烯醇化酶的表达，使细胞产能减少，收缩功能下降。     

利用蛋白转导技术将α-烯醇化酶导入心肌细胞的实验研究

目的探讨将外源α-烯醇化酶导入心肌细胞的可行性,为后续的蛋白功能研究奠定基础。方法原代培养WKY乳鼠心肌细胞,将纯化的α-烯醇化酶与蛋白转导载体Charoit共孵育后转染心肌细胞,同时设置阳性对照β-半乳糖苷酶转染组,光镜下计数转染阳性细胞的百分率;蛋白免疫印迹检测细胞总蛋白中α-烯醇化酶的表达;荧光共聚焦显微镜下观察α-烯醇化酶的亚细胞定位。结果Charoit能够将外源蛋白成功导入原代培养的心肌细胞中,光镜下可见β-半乳糖苷酶的导入效率约为81%,Western blot结果表明外源α-烯醇化酶成功导入了心肌细胞,免疫荧光显示导入的外源α-烯醇化酶与内源α-烯醇化酶相似,主要定位于胞浆。结论利用Charoit介导的蛋白转导技术能够成功将外源α-烯醇化酶导入心肌细胞。     

利用蛋白转导技术将α-烯醇化酶导入心肌细胞的实验研究

目的 探讨将外源α-烯醇化酶导入心肌细胞的可行性,为后续的蛋白功能研究奠定基础.方法 原代培养WKY乳鼠心肌细胞,将纯化的α-烯醇化酶与蛋白转导载体Charoit共孵育后转染心肌细胞,同时设置阳性对照β-半乳糖苷酶转染组,光镜下计数转染阳性细胞的百分率;蛋白免疫印迹检测细胞总蛋白中α-烯醇化酶的表达;荧光共聚焦显微镜下观察α-烯醇化酶的亚细胞定位.结果 Charoit能够将外源蛋白成功导入原代培养的心肌细胞中,光镜下可见β-半乳糖苷酶的导入效率约为81%,Western blot结果表明外源α-烯醇化酶成功导入了心肌细胞,免疫荧光显示导入的外源α-烯醇化酶与内源α-烯醇化酶相似,主要定位于胞浆.结论 利用Charoit介导的蛋白转导技术能够成功将外源α-烯醇化酶导入心肌细胞.     

人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

通过测定细胞的凋亡率 ,内源性NO的水平和iNOSmRNA的表达及半胱天冬酶 3的活性 ,探讨人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡诱导作用的可能机理 .结果表明多巴胺 (0 .15～ 0 .60mmol·L- 1)可诱导PC12细胞凋亡 ,预先经过 10 μmol·L- 1Rg 1处理后 ,PC12细胞的凋亡率显著下降 (P <0 .0 0 1) ,同时NO2- 水平和iNOSmRNA表达水平及半胱天冬酶 3活力较单纯多巴胺处理组明显降低(P <0 .0 0 1) .结果提示 ,Rg1减少细胞内源性NO的生成及抑制半胱天冬酶 3的活化可能是Rg1对抗多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要机理 .     

人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及可能机制。 方法 :采用PC12细胞为模型 ,以不同浓度的DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测PC12细胞的亚二倍体峰 ,按Griess法测定NO代谢产物NO2 ·的浓度 ,并观察人参皂甙Rg1(10 μmol/L)预防性给药对其影响。 结果 :0、0 15、0 30、0 45和 0 6 0mmol/LDA处理组的凋亡率分别为 1 6 1±0 18、40 6 0± 1 74、46 6 7± 1 45、5 4 49± 1 6 1和 6 4 39± 1 6 0 % ,与Rg1预防组 0 73± 0 11、1 16± 0 0 9、1 35± 0 0 7、1 5 3± 0 10和 1 6 1± 0 12 %比较均有显著性差异 (P <0 .0 1) ;DA处理组的NO2 ·浓度分别为 1 82± 0 0 5、3 5 7± 0 0 2、8 82± 0 0 4、18 0 0± 0 0 7和 2 7 34± 0 0 9μmol/L ,与Rg1预防组的 1 0 0± 0 0 7、1 36± 0 0 7、1 2 5± 0 0 4、3 39± 0 11和 3 82± 0 11μmol/L比较亦都有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :NO生成增多可能是DA诱导PC12细胞凋亡的重要信号分子 ,人参皂甙Rg1可抑制NO生成 ,防止DA诱导PC12细胞凋亡     

板蓝根对实验性病毒性心肌炎心肌细胞的保护作用研究

板蓝根是临床上公认的有较好抗病毒作用的中药。本研究利用柯萨奇Ｂ3病毒(ＣＶＢ3)感染鼠心肌细胞,制成病毒性心肌炎模型,探讨板蓝根的抗ＣＶＢ3作用及其心肌细胞保护作用。1材料与方法:将6个不同浓度(10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%)的板蓝根溶液(广东永康药业股份有限公司产品,批号960814)各1ｍｌ与等体积104.5ＴＣＩＤ50/ｍｌ的ＣＶＢ3(Ｎａｎｃｙ株)37℃作用1小时后,10倍系列稀释,在96孔板上滴定ＣＶＢ3对培养的ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌａｙ种大白鼠乳鼠(福建闽兴实验动物中心提供)心肌细胞的ＴＣＩＤ50。实验分组:正常培养细胞组、病毒…     

人参皂苷Rg1对PC12细胞凋亡保护作用的可能机制

目的探讨人参皂苷Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法用流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白表达率,RT-PCR分析bcl-2和baxmRNA表达水平,荧光分光光度计法检测CPP32活力.结果经10μmol·L^-1Rg1预处理后,由多巴胺诱导的PC12细胞凋亡受到明显的抑制.同时,Bcl-2蛋白和mRNA表达增加,Bax蛋白和mRNA表达减少,CPP32活力明显下降.结论Rg1可抑制多巴胺诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能通过调节Bcl-2与Bax蛋白的比值和抑制CPP32的激活而起作用.     

α烯醇化酶靶向RNA干扰对原代培养乳鼠心肌细胞能量代谢及收缩功能的影响

目的 采用RNA干扰技术抑制培养大鼠心肌细胞α烯醇化酶的表达,探讨α烯醇化酶对心肌细胞能量产生和收缩功能的影响.方法 针对α烯醇化酶基因,化学合成3对小片段干扰RNA(siRNA)(分别为针对α烯醇化酶mRNA 406～425位点的序列1,针对α烯醇化酶mRNA 656～675位点的序列2及针对α烯醇化酶mRNA754～773位点的序列3)并转染原代培养的WKY大鼠心肌细胞.采用Real-time RT-PCR和Western blot技术分别在mRNA和蛋白水平检测α烯醇化酶的表达情况,筛选其中沉默效应最好的序列(序列1)转染心肌细胞,即RNA干扰实验组,以未转染siRNA的心肌细胞为对照组,荧光素荧光素酶法检测细胞ATP水平,视频跟踪计算机测定系统测定细胞收缩反应,参数包括最大收缩幅度(dL),最大收缩速度(dL/dtmax).结果 针对α烯醇化酶mR-NA 406～425位点的siRNA显著下调α烯醇化酶mRNA和蛋白的表达,并且呈剂量和时间依赖关系,200 nmol/L可达到最大沉默效应,其下调α烯醇化酶mRNA和蛋白表达的最大效应分别出现在转染后24 h和48 h.α烯醇化酶沉默后细胞ATP产生减少(3.55×10-7 nmol/mg蛋白),dL[(0.82±0.02)μm]和dL/dtmax[(2.7±0.3)μm/s]下降.结论 应用siRNA技术靶向α烯醇化酶mRNA 406～425位点可有效下调心肌细胞α烯醇化酶的表达,使细胞产能减少,收缩功能下降.     

肌肉骨骼减少症干预进展

肌肉骨骼减少症比单纯的骨质疏松或肌少症更容易造成跌倒、骨折风险增加、生活质量下降等不良预后，因此探索安全有效的干预措施非常必要。而目前针对该综合征的干预措施的总结仍较少，部分干预还处于研究阶段。该综述针对肌肉骨骼减少症总结了目前和未来可能的干预治疗手段。