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目的 观察围妊娠期小鼠胰岛β/α细胞量、细胞增殖、Survivin表达变化以及大鼠胰岛细胞瘤细胞株INS-1干扰Survivin表达后催乳素刺激细胞增殖的变化,探讨Survivin与妊娠期胰岛细胞扩增的关系.方法 采用免疫组化染色法检测C57 BL/6雌性小鼠非妊娠对照组(NP)和妊娠10.5、14.5、18.5 d(P10.5、P14.5、P18.5)、产后4、8 d(AP4、AP8)(每组各25只)胰岛β/α细胞量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量聚合酶链反应及Western blotting法检测Survivin mRNA和蛋白的表达.采用脂质体转染siRNA方法干扰INS-1细胞Survivin的表达,催乳素刺激后检测细胞周期.多组数据组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用最小差异显著性分析.结果 妊娠期胰岛β/α细胞量均显著增加,高峰在P18.5,与NP组相比,β细胞量增长2.1倍(3.84±0.38比1.81 ±0.09,t =4.75,P<0.05),α细胞量增长1.6倍(0.92±0.13比0.56 ±0.08,t =2.69,P<0.05),至AP8恢复至NP水平.妊娠期小鼠胰岛细胞增殖显著增加,高峰在P14.5,与NP组相比,增殖指数增长2.7倍(23.07±1.88比7.72±1.12,t=10.89,P<0.05),产后恢复正常.Survivin mRNA表达水平在妊娠期明显增高,高峰在P14.5,与NP组相比,增长6.7倍(6.69±1.61比1.00 ±0.00,t =4.57,P<0.05),产后恢复正常.P10.5时Survivin蛋白开始表达,高峰在P14.5,与P10.5相比增长3.6倍(3.63±0.26比1.00±0.00,t=9.98,P<0.05),P18.5时表达逐渐下降,P20.5时表达消失.催乳素可显著刺激INS-1细胞增殖,而siRNA干扰INS-1细胞Survivin表达后,细胞增殖受阻.结论 妊娠期小鼠胰岛细胞出现明显扩增,并伴有Survivin的动态表达.Survivin介导催乳素刺激的胰岛β细胞扩增作用. 相似文献
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目的 观察新生期小鼠胰岛细胞凋亡的变化特点并分析细胞凋亡相关基因的表达差异,初步探讨相关机制.方法 采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,以磷脂结合蛋白V-绿色荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.透射电镜观察胰岛细胞凋亡形态,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(Tunel)/胰岛素免疫荧光双染法检测凋亡.采用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因mRNA的表达.采用Western blotting技术检测促凋亡基因和抗凋亡基因的表达.多组间统计数据比较采用单因素方差分析.结果 (1)新生期小鼠胰岛细胞凋亡率在3周时显著增加,明显高于1周和8周[分别为(10.53±2.61)%、(1.80±0.69)%、(3.26±0.94)%,F=32.09,P<0.01].透射电镜结果显示新生第3周小鼠胰岛细胞核出现凋亡早期改变.3周时Tunel/胰岛素双阳性细胞数明显高于1周和8周.(2)新生期小鼠胰岛细胞凋亡相关基因的表达呈动态变化,3周时,促凋亡基因Fas和FasL的mRNA表达均明显高于1周和8周(分别为1.53±0.21、1.00±0.00、0.46±0.24,F=24.85,P<0.01;2.63±0.56比1.00±0.00、0.52±0.14,F=32.77,P<0.01),抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达明显低于1周和8周(分别为0.30±0.23、1.00±0.00、1.71±0.00,F=78.06,P<0.01).(3)3周时,Fas、FasL和裂解的Caspase-3蛋白表达均明显高于1周和8周(分别为2.05±0.16、1.00±0.00、0.59±0.24,F=61.47,P<0.01;3.54±0.86、1.00±0.00、0.72±0.26,F=27.04,P<0.01;5.74±0.59比1.00±0.00、3.11±0.20,F=128.79,P<0.01);Bcl-2蛋白表达明显低于1周和8周(0.62±0.13比1.00±0.00、1.90±0.10,F=151.08,P<0.01).结论 Fas/FasL以及Bc1-2介导的细胞凋亡信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞凋亡的调控. 相似文献
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目的:探讨新生期小鼠胰岛分离纯化方案?方法:采用胰腺局部充盈?胶原酶Ⅴ消化,对比不同消化时间及单纯显微镜下手挑胰岛或Histopaque-1077纯化对胰岛得率的影响,并通过胰岛素/胰高血糖素双染后流式细胞术检测胰岛β和α细胞构成比例?结果:在1 mg/ml酶浓度下,1周和3周小鼠胰岛的最适消化时间分别为23 min(胰岛/胰腺38.11 ± 2.78)和25 min(胰岛/胰腺66.06 ± 2.61)?1周以直径< 50 μm胰岛居多(P < 0.01),而3周以50~99 μm者居多(P < 0.01)?单纯手挑组胰岛得率显著高于Histopaque-1077纯化组(P < 0.05)?所得胰岛存活率和纯度均> 90%,且存在β和α细胞构成比例的动态变化(P < 0.05)?结论:胰腺局部充盈?胶原酶Ⅴ消化后镜下手挑胰岛是一种较好的新生期小鼠胰岛分离纯化方法,消化时间和纯化方法是其重要影响因素? 相似文献
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目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)、视网膜母细胞瘤样蛋白1(p107)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 (1)小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周(P<0.05);单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍(P<0.01);而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍(P<0.01),8周与3周无明显差异.(2)1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少(81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P<0.05),而G2/M期显著增多(13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P<0.05),细胞增殖指数明显增加(P<0.05).(3)8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周(P<0.01);3周和8周时p107 mRNA显著低于1周(P<0.05),而p130 mRNA显著高于1周(P<0.05),E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周(均P<0.01);8周时E2F-3 mRNA显著低于1周(P<0.05);而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.(4)8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低(均P<0.05).结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控. 相似文献
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目的 探讨老年2型糖尿病周围神经病变患者的三维步态分析特点。 方法 选取符合纳入标准的60岁以上的2型糖尿病周围神经病变患者20例(神经病变组)和无周围神经病变的2型糖尿病患者20例(糖尿病组),并招募年龄相匹配且无2型糖尿病病史的健康志愿者20例(健康对照组)作为研究对象,使用瑞典Qualisys动作捕捉系统对3组受试者进行三维步态测试,采集并分析其步长、步速、步宽、步频、步幅、双足支撑相时间、单足支撑相时间、足底峰值压力及时间等数据特点。 结果 神经病变组的步长、步速、步频、步幅均较糖尿病组和健康对照组下降(P<0.05);神经病变组与糖尿病组和健康对照组相比较,双足支撑相时间延长,单足支撑相时间缩短,且差异均有统计学意义(P<0.05);神经病变组足底第一峰值压(P1)和第二峰值压(P2)、第二峰值出现时间(T2)较糖尿病组和健康对照组增加,且差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 老年2型糖尿病周围神经病变患者出现明显步态异常,步行稳定性下降,足底压力增强,足底受压时间增加。 相似文献
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L细胞作为肠道内分泌细胞的一种,零散分布于胃肠道,分泌胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(GLP-2)、多肽YY(PYY)等多种重要的肽类激素,可以促进胰岛素分泌、控制食欲,有利于控制血糖和体质量。近年研究显示, 相似文献
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