3‘—甲基—4—二甲氨基偶氮苯对大鼠肝脏磷脂代谢的影响

探讨３‘－甲基－４－二甲氨基偶氮苯诱发大鼠肝癌过程中肝脏磷脂代谢的变化。用３’－Ｍｅ－ＤＡＢ诱发Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝癌，同时辅以低胆碱饮食，ＴＬＣ分离磷脂组分，Ｒｏｕｓｅｒ法测定第６，９，１２，１６，２０周肝脏中总磷脂及各磷脂组分含量。结果：发现诱癌组总磷脂和磷脂酰胆碱的含量不断下降，且两者变化一致；     

骨纤维结构不良和骨化性纤维瘤的组织病理及免疫组化研究

对140例骨纤维结构不良和70例骨化性纤维瘤的临床资料及组织病理进行了复习,其中对近期病例中各15例的组织。作了6种有关的免疫组化染色进行观察。本文对骨纤维结构不良和骨化性纤维瘤的诊断、鉴别诊断及其病变的性质进行了讨论。还对6种免疫组化染色在显示某些组织成分,特别对骨连结蛋白在显示骨母细胞及新生骨质的意义作了探讨。     

逆转录病毒介导的HSV-TK基因对人骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨骨肉瘤基因治疗的可行性。方法 采用逆转录病毒介导的HSV-TK基因转移和GCV治疗的方法进行研究。结果 成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK;采用DOTAP将其转入PA317细胞中进行包装,筛选,并进行病毒滴度测定。收获病毒上清体外感染骨肉瘤细胞株OS732和SAOS-2。分别用PCR和RNA斑点杂交的方法证明假病毒中不含有复制活性病毒,HSV-TK基因已整合到宿主细胞基因组中,并获得表达,MTT比色法测定结果显示GCV对OS732TK和SAOS-2TK细胞均有明显的杀伤作用。且前者强于后者,旁观者效应在高细胞密度接种条件下强于低细胞密度,在SAOS-2细胞中的作用强于OS732。结论 HSV-TK/GCV基因治疗系统可为骨肉瘤的治疗提供新途径。     

骨肉瘤中Rb、p16、CDK4、cyclinD1蛋白的表达及其意义

目的 探讨骨肉瘤中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ４、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组化方法对４０例骨肉瘤组织中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达状况进行检测。结果 ４０例骨肉瘤Ｒｂ、ｐ１６蛋白表达缺失分别为７２．５％（２９／４０和）２２．５％（９／４０）;１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤中的８例ｐ１６阴性,２９例ｐＲｂ阴性的骨肉瘤中２８例ｐ１６阳性;５２．５％（２１／４０     

苦味酸天狼星红偏光法观察软骨性肿瘤的胶原改变

软骨性肿瘤胶原的分布和类型会发生改变〔1〕,我们采用苦味酸天狼星红偏光法 ,观察软骨性肿瘤中Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变 ,试图寻找一种简便、灵敏的研究方法。1　材料与方法1.1　标本　取自中山医科大学病理学教研室 1984～ 1998年病理档案石蜡标本软骨瘤 18例 ,骨软骨瘤 19例 (图 1) ,软骨肉瘤 2 8例 ,用正常软骨 6例做对照。1.2　苦味酸天狼星红染色　切片厚 4μｍ ,脱蜡至水 ,0 1%苦味酸天狼星红液浸染 1ｈ ,自来水稍冲洗 ,苏木精复染胞核5～ 10ｍｉｎ ,脱水、透明、封固〔2〕。1.3　偏光镜观察　用普通显微镜加一对偏振片 (包括起偏镜片和…     

外源性野生型p53基因对人骨肉瘤细胞株生物学特性的影响

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胰腺囊腺癌的临床影像评价

目的：胰腺囊腺癌是一种低度性肿瘤，临床非常少见，本文着探讨其影像学特点及临床应用价值。材料方法：分析1例手术和病理证实的胰腺囊腺癌的影像学的表现，腹平检查7例，上消化道检查8例，B超及CT检查11例。结果：腹部平片上消化道检查可见胃体缓压移位，B超可以显示肿瘤大小，位置轮廓及了解厚薄，分离情况。增强后囊肿不强化，囊壁实性结节及分离均可见明显强化。结论：熟悉胰腺囊腺癌的影像直接间接征象及临床特点，有利于其诊断及鉴别诊断。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果：成功地将重组野性型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，在ｇｐｔ选择培养基中培养两周后，分离生长出阳性细胞克隆；经ＰＣＲ证实外源性ｐ５３基因在瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代；当向培养液中加入１μｍｏｌ／Ｌ地塞松（Ｄｅｘ）后，８ｈ即可用免疫组化方法检测到ｐ５３蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变，转染后的瘤细胞凋亡率高达９０％。结论：当人骨肉瘤细胞株中重组野生型ｐ５３基因诱导过表达时，瘤细胞呈现凋亡，本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结     

Rb基因增强HSV-TK/GCV系统"旁观者效应"的机制研究

目的：探讨Rb和HSV－TK基因共转染增强HSV－TK／GCV系统“旁观者效应”的可能性及其机制。方法：构建含长度为1．65kb Rb基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rb，用DOTAP将pcDNA3.1-Rb以及携带HSV－TK基因的质粒tgCMV/HyTK分别或共同导入骨肉瘤细胞株OS732。应用RT－PCR和Northern blot检测TK和Rb基因的表达；用细胞计数、流式细胞仪分析和软琼脂克隆形成实验观察细胞的生长状况；用半定量RT－PCR法、Western Blot和罗氏黄荧光传输法检测裂隙连接蛋白基因Connexin43的表达和细胞间裂隙连接信息通讯的能力；用MTT法和混合共培养实验分别检测各种细胞对GCV的敏感性HSV－TK／GCV系统的“旁观者效应”。结果：成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Rb；得到三种转基因的细胞株OS732TK、OS732Rb、OS732RbTK；并在mRNA水平检测到OS732TK和OS732RbTK细胞内HSV－TK基因的表达，在OS732Rb和OS732RbTK细胞内存在内源性和外源性Rb基因的表达；与OS732相比，OS732Rb和OS732RbTK细胞的形态发生改变，其生长速度减慢，软琼脂形成集落能力降低，细胞周期阻滞于G0G1期；OS732Rb细胞的Tonnexin43表达和细胞间信息通讯能力增强；仅TK阳性细胞OS732TK和OS732RbTK的存活率与GCV的浓度存在剂量依赖性关系，但在与TK阴性细胞混合共培养实验中，OS732和OS732Rb细胞增显示对GCV的敏感性，在相同处理条件下，OS732Rb细胞的存活率明显低于OS732细胞。结论：Rb基因通过抑制骨肉瘤细胞的生长和提高细胞间信息通讯能力来增强HSV－TK／GCV系统的“旁观者效应”。