左金丸抗幽门螺杆菌感染的分子网络调控机制研究

目的基于网络药理学和生物信息学方法探究左金丸抗幽门螺杆菌(Hp)感染的分子网络调控机制。方法通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)检索左金丸化学成分,筛选并预测其入血活性成分和作用靶点,检索疾病数据库中与Hp感染相关的作用靶点,构建左金丸成分靶点与疾病靶点的交互网络,获得左金丸抗Hp的特征性基因;通过DAVID6.8数据库对上述特征性基因进行GO功能富集和KEGG通路富集分析;利用Cytohubba筛选出左金丸抗Hp感染的关键靶点。结果通过TCMSP筛选、预测得到左金丸32个入血活性成分和197个作用靶点。GO分析共得到199条富集结果,其中生物过程包含炎症反应、RNA信号转录、信号传导等152条,细胞组分包含细胞核、细胞外基质、蛋白复合物等19条,分子功能包含细胞因子活性、DNA结合、ATP结合等28条。KEGG分析结果显示,Jak-STAT信号通路、T细胞受体信号通路、细胞周期信号通路、Wnt信号通路等65条通路与左金丸抗Hp感染密切相关。经Cytohubba筛选得到CXCL8、IL10、IL4、VEGFA、MMP9等10个关键基因。结论左金丸抗Hp感染具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点,可为其活性成分研究和抗Hp药效及机制研究提供依据。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠的影响

目的探讨黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、埃索美拉唑组(4.17 mg/kg)及黄芪建中汤低、高剂量组(9.27、18.54 g/kg)。采用番泻叶(10 m L/kg)联合游泳力竭法建立脾胃虚寒证候模型,无水乙醇(10 m L/kg)联合阿司匹林肠溶片(200 mg/kg)建立胃溃疡模型。观察并记录大鼠的整体状态、体质量、进食量、饮水量和肛温,肉眼及HE染色观察胃黏膜组织形态学损伤,测量胃液总酸度和胃蛋白酶活性,ELISA法检测大鼠血清IL-4、IL-10、NO和TNF-α水平,qRT-PCR和免疫组化法分别检测TLR-2、MyD88 mRNA及蛋白表达。结果与模型组比较,黄芪建中汤组大鼠体质量、进食量、饮水量和肛温均上升(P<0.05,P<0.01),溃疡指数下降(P<0.01),胃酸总酸度和胃蛋白酶活性均降低(P<0.01),血清TNF-α水平下降(P<0.05、P<0.01),IL-4、IL-10和NO水平上升(P<0.05、P<0.01),胃组织中TLR-2、MyD88 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01)。结论黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠有显著的疗效,其作用机制可能通过调节TLR-2/MyD88信号通路,影响炎性因子表达,下调黏膜攻击因子水平,从而加速胃黏膜溃疡修复。     

丹参对视网膜色素变性病理过程Müller细胞特征性基因变化及关键蛋白表达的影响

目的基于网络药理学和生物信息学方法探讨丹参(SM)通过干预Müller细胞(MC)特征性基因和关键蛋白表达治疗视网膜色素变性(RP)的分子机制。方法运用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)检索、筛选SM的入血活性成分和作用靶点;通过GEO数据库获取正常和RP小鼠MC差异表达基因;通过疾病数据库检索RP相关的基因靶点;采用Cytoscape构建MC差异表达基因和疾病靶点、成分靶点的蛋白质-蛋白质交互作用网络并提取交集;运用DAVID数据库对特征性基因进行基因本体和KEGG通路分析;采用cytoHubba分析筛选关键蛋白靶点。结果检索得到与SM相关的化学成分202个,依据ADME参数筛得活性成分65个,其中入血活性成分13个,进一步检索配对得到这些成分可能作用的靶点117个;从芯片数据中分析得到正常和RP小鼠MC中差异表达基因242个;从疾病数据库获得与RP密切相关的靶点206个;提取交集得到85个SM影响RP病理过程MC的特征性基因;这些基因主要涉及转录调控、凋亡信号通路调控、DNA核内复制调节等生物学过程,分子功能主要包括转录辅激活子活性、蛋白激酶活性、核心启动子结合等,富集于细胞核、核质、转录因子复合物、Rb-E2F复合体等区域,主要与剪接体信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控信号途径、细胞周期调控通路等有关;分析筛选出SM干预RP病理过程MC中的8个关键蛋白靶点。结论 SM药效作用的物质基础为隐丹参酮、木犀草素、丹参酮ⅡA等13个化学成分;其所干预的RP病理过程MC特征性基因与剪接体信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控信号途径、细胞周期调控通路等机制相关,关键靶点包括RB1、E2F1、TFDP1等8个蛋白。     

胃癌发病关键基因调控网络构建及其靶向治疗中药活性成分筛选研究

目的 通过生物信息学方法分析与胃癌发病密切相关的基因调控网络,探讨其在胃癌预后中的价值,并进一步挖掘靶向治疗胃癌的中药活性成分。方法 通过GEO数据库获取GSE103236胃癌芯片数据,对芯片数据进行均一化处理,分析胃癌组织与正常胃组织的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）;应用Metascape数据库对DEGs进行基因本体论（genetic ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路分析;通过String数据库构建DEGs蛋白交互作用网络;采用Cytohubba筛选关键基因,分析关键基因表达程度与患者的预后及免疫细胞浸润的相关性;运用CTD数据库筛选能靶向作用于关键DEGs的中药活性成分。结果 共获得45 015个胃癌组织与正常组织的DEGs,其中显著性DEGs 176个。它们与细胞周期过程调控、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases,MAPK）级联调控等生物过程密切相关,集中于细胞外区域、细胞外泌体等细胞组分,主要参与胰岛素样生长因子结合、Wnt蛋白结合等细胞功能。KEGG分析发现显著性DEGs主要参与环磷酸酰胺（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositide 3-kinases/protein kinase B,PI3K/Akt）信号通路、癌症转录失调、p53信号级联等信号通路。筛选出TIMP1、SPP1、APOE、APOB、FGA、FGG、CYR61、IGFBP1、CHGB、SCG3 10个关键基因。这些基因表达异常均与免疫细胞的大范围浸润存在极高的相关性,其中TIMP1、IGFBP1、CYR61、FGG、APOE、APOB 6个关键基因的异常表达显著影响患者的生存率。进一步挖掘出桦木酸、长春新碱、丹参酮等30个可能靶向治疗胃癌的中药活性成分。结论 筛选出10个与胃癌发病密切相关的核心基因,并分析了这些核心基因与胃癌患者预后及免疫细胞浸润的相关性;挖掘出30个可能用于胃癌靶向治疗的中药活性成分;研究结果可为胃癌生物标志物的筛选、胃癌的防治及预后分析提供思路和参考。     

基于关键基因与核心microRNA探讨大黄-黄连药对抗Hp感染的分子机制

目的:基于生物信息学和网络药理学探究大黄-黄连药对(RRRCR)治疗Hp感染胃肠道疾病的分子机制,阐明其靶向作用的核心基因及关键microRNA.方法:通过TCMSP数据库筛选RRRCR的活性成分及作用靶点;通过GEO数据库检索Hp感染胃黏膜上皮的基因表达谱芯片数据;通过R软件对芯片数据进行均一化处理并分析差异表达基因...     

基于Raf/MEK/ERK 信号通路探讨黄芪建中汤治疗大鼠脾胃虚寒型十二指肠溃疡的作用机制

目的探讨黄芪建中汤通过Raf/MEK/ERK 信号通路治疗大鼠脾胃虚寒型十二指肠溃疡（DU）的作用机 制。方法将60 只SD 大鼠随机分为正常对照组、模型组、埃索美拉唑组（4.17 mg·kg-1）以及黄芪建中汤高、 低剂量组（18.54、9.27 g·kg-1）。采用“苦寒泻下+劳倦过度”法联合阿司匹林、无水乙醇构建脾胃虚寒型DU 大鼠模型。灌胃给药,每天1 次,连续4 d。观察大鼠十二指肠黏膜损伤情况并计算溃疡指数和治疗指数;采 用HE 染色法观察十二指肠黏膜组织病理形态学改变;采用酶联免疫吸附试验检测十二指肠组织中前列腺素 E2（PGE2）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;免疫荧光法检测十二指肠黏膜磷酸化丝氨 酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Raf）、磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶激酶1/2（p-MEK1/2）、磷酸化细胞外信号调节激 酶1（p-ERK1）蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠的十二指肠溃疡指数显著升高（P < 0.01）;小 肠绒毛脱落,隐窝脓肿,小肠绒毛长度和隐窝深度均显著降低（P < 0.01）;肠黏膜PGE2、IL-10 含量均明显降 低（P < 0.01）,TNF-α 含量显著增加（P < 0.01）;肠黏膜p-Raf、p-MEK1/2 和p-ERK1 蛋白表达量均明显增 加（P < 0.01）。与模型组比较,黄芪建中汤各剂量组的大鼠十二指肠溃疡指数均明显降低（P < 0.01）;肠黏膜 损伤得到明显改善,黏膜形态趋于完整,小肠绒毛长度和隐窝深度均明显增加（P < 0.01）;肠黏膜PGE2 和 IL-10 含量均明显提高（P < 0.01）,TNF-α 含量显著降低（P < 0.01）;肠黏膜p-Raf、p-MEK1/2 和p-ERK1 蛋 白表达均显著下调（P < 0.01）。结论黄芪建中汤对脾胃虚寒型DU 大鼠具有治疗作用,其机制可能与调控 PGE2、TNF-α、IL-10 等炎症介质水平,抑制Raf/MEK/ERK 信号通路活化有关。     

从筋膜理论探讨张仲景葛根剂的运用思路

通过研习成都中医药大学陈潮祖教授阐发的筋膜理论,提出可以从葛根缓急止痛、解痉止呕、解痉止泻、解痉平喘探讨张仲景《伤寒杂病论》中葛根汤、葛根加半夏汤、桂枝加葛根汤、葛根芩连汤、奔豚汤中葛根的临床运用思路,为阐述葛根系列方剂提供理论依据,为拓展葛根系列方剂的临床运用提供新的思路。     

脾阳虚证动物模型构建及模型评价的研究概述

从中医单因素造模法、西医单因素造模法、中医复合因素造模法、中西医结合复合因素造模法概述了中医学脾阳虚证候的造模方法;从宏观评价指标、形态学指标、功能性指标、细胞分子指标综述了脾阳虚证候模型成功构建的评价方法;尽管脾阳虚证动物模型的建立现已取得一定成果,但仍存在一些问题尚待解决。选择更加贴合临床实践的脾阳虚证候模型,建立更加标准、更具特异性的模型评价体系仍是中医脾胃藏象学说未来研究的方向。     

基于Citespace的视网膜色素变性的文献计量学分析

目的 基于文献计量学探究近20年国内外关于视网膜色素变性（RP）的研究现状和热点前沿。方法 分别检索中国知网数据库（CNKI）和Web of Science核心数据库（WoSCC）有关RP实验研究和临床研究的文献,利用Citespace进行可视化分析。结果 共筛选出2 277篇文献,CNKI和WoSCC中分别检索出354篇中文文献和1 923篇英文文献,年度发文量总体呈上升趋势。湖南中医药大学第一附属医院和伦敦大学分别是CNKI和WoSCC中发文量最大的机构。彭清华和彭俊是CNKI中发文量最大的作者,Tsang Stephen H是WoSCC中发文量最大的作者。由关键词分析可知WoSCC文献的研究重点是遗传学和基因组学研究,而CNKI文献的研究重点是中医药治疗。结论 本研究利用Citespace软件对RP研究领域的现状进行分析,明确当前的研究热点和前沿,为关注该领域的研究者提供了新思路和理论参考。