HLA-B常用分型方法的应用分析

目的探讨血清学、序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法和多聚酶链反应寡聚核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)技术3种方法在HLA-B位点分型的应用价值。方法研究样本30份,为等待肾移植供、受者外周血。血清学方法采用单克隆抗体一步法、PCR-SSP采用微量SSP法,PCR-SSOP为反向杂交。结果所有样本用3种方法进行HLA-B分型均获得成功,分型结果血清学方法与PCR-SSP不相合率为13%,PCR-SSOP与PCR-SSP不相合率为3%。结论血清学分型方法误差率较高、分辨率低,但成本不高,最为快速简便。PCR-SSP和PCR-SSOP分型方法特异性好,准确率高。SSP适用于少量标本,而SSOP虽耗时长,却可同时检测大批量的样本。     

肾移植受者BK病毒感染的临床诊断

目的 探讨肾移植受者BK病毒感染的诊断方法、监测指标.方法 采集234例肾移植受者的血、尿样本,行BKV尿沉渣细胞学计数与实时荧光定量PCR检测方法.结果 234例受者的尿Decoy细胞、BK病毒尿症与病毒血症的阳性率分别为33.3%、33.3%和16.2%.尿Decoy细胞阳性者Decoy细胞中位数水平为6个/10HPF,BKV DNA阳性者尿液和外周血BKV中位数水平分别为7.62×103 copy/ml和7.61×103 copy/ml.尿液BKV阳性率较外周血明显升高(P=0.000).尿液Decoy细胞计数与尿液BKV含量相关(γ=0.59,P=0.000),但尿液和外周血中BKV含量无明显相关性(P=0.14).结论 肾移植受者易发生BKV再活化,定量尿沉渣细胞学检测简单、易行、敏感,可以做为BKV活化的指标,间接反映肾脏病理情况,也可检测血、尿BKV DNA了解病毒活化情况、筛查BKV相关的移植肾肾病.     

H-2Kb基因转移诱导小鼠心肌移植免疫耐受

目的探讨H-2Kb基因转移诱导小鼠心肌移植免疫耐受的可行性。方法通过逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将供体小鼠(C57BL/6)的H-2Kb基因(小鼠MHC-类基因)导入到受体小鼠(BALB/c)的造血细胞。结果H-2Kb基因可以稳定地整合进小鼠造血细胞的基因内,并在受体内表达较长时间。正常对照小鼠的心肌移植物平均存活时间(MST)为9.4±1.84d。诱导耐受组小鼠的心肌移植物MST为45.7±6.001d,比对照组明显延长(P<0.05)。结论H-2Kb基因转移诱导了供体特异性的免疫耐受,为临床移植控制排斥反应提供了一种新的方法     

HLA—DR两种分型方法的比较

目的 探讨肾移植供受体HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型方法的优缺点。方法 对已作HLA-DR血清学分型的供受体标本,进行PCR-SSP基因分型法作HLA-DR抗原分型;并对4例血清学分型为HLA-DR一个位点,而PCR-SSP为两个位点的受者,重新抽血作HLA-DR血清学业分型。结果 血清学法耗时80min,PCR-SSP法耗时145min;血清学方法误差率（不包括重新血清学分型的例数）为11.3%(受者14.7%,供者8.0%).重新作血清学分型的4例中,有1例结果为两个们点,与PCR-SSP结果一致,其余与原结果相同.结论 改进的血清学方法暂时还适合我国尸体供肾快速配型的需要.PCR-SSP法分型具有准确、简便、快速的优点,随着其方法学的不断发展将逐步取代血清学方法在HLA-DR分型中的应用。     

肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值

目的 探讨血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)、神经元特异烯醇化酶(NSE)和细胞角蛋白19(CYFRA21-1)联合测定对肺癌诊断的临床意义.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测90例肺癌患者,90例良性肺部疾病和100名健康人血中的TuM2-PK、NSE和CYFRA21-1的浓度.结果 肺癌组3种指标水平均明显高于良性肺疾病组和健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);TuM2-PK诊断肺癌的敏感度为68.9%,特异度为91%;TuM2-PK和NSE联合检测肺癌的阳性率最高为81%.结论 TuM2-PK可作为一种新肺癌标志物应用,TuM2-PK和NSE联合检测可以提高对肺癌的阳性诊断.     

胃癌腹膜种植瘤动物模型的构建

目的建立稳定实用的人胃癌鼠腹膜种植瘤模型。方法通过对裸鼠和SCID鼠腹腔注射胃癌细胞株AGS、NCI—N87和SNUl6构建腹膜种植瘤模型,比较不同细胞株模型成功率和生存期的差异。结果裸鼠腹腔种植5×106个AGS、NCI—N87和SNUl6细胞腹膜瘤形成率分别是（3／8、6／8和2／8;SCID鼠腹腔种植5×106个AGS、NCI—N87和SNUl6细胞,腹膜瘤形成率分别是0／6、6／6和6／6。SCID鼠腹膜瘤模型中位生存期：NCI—N87细胞组（10x10。）为74d;SNUl6细胞3个不同剂量组（10×106、20×106和40×106）分别为95、78和44d。结论SCID鼠腹腔种植（20—40）×106个SNUl6细胞可以构建稳定实用的胃癌腹膜种植瘤模型。     

肾移植受者BK病毒感染的检测方法及免疫抑制方案对BK病毒活化的影响

目的 探讨肾移植术后受者BK病毒感染的检测方法及免疫抑制方案对BK病毒活化的影响.方法 选择1999年1月至2007年1月问进行肾移植术的200例受者为研究对象,其中100例基础免疫抑制方案为他克莫司(FK506)十霉酚酸酯(MMF)的受者作为密切观察组;另100例基础免疫抑制方案不同、但在年龄和术后是否发生急性排斥反应方面与密切观察组受者相一致(按1:1匹配)的受者作为对照观察组.在肾移植术后平均15.3个月时,分别采集所有受者的血、尿样本,行BK病毒尿沉渣Decoy细胞计数与BK病毒DNA含量的检测.分析和比较尿Decoy细胞计数、尿BK病毒含量及血BK病毒含量之间的关系;比较两组Decoy细胞、BK病毒尿症与BK病毒血症阳性率的差异.结果 200例受者的尿Decoy细胞、BK病毒尿症与病毒血症的阳性率分别为:34.0%、36.0%和16.5%.尿Decoy细胞计数与尿BK病毒含量呈正相关(r=0.714,P＜0.001),但尿液和外周血中BK病毒含量无明显相关性(P＞0.05).密切观察组的尿Decoy细胞、BK病毒尿症与BK病毒血症的阳性率分别为49%、50%和24%,对照观察组上述指标的阳性率分别是19%、22%和9%,两组的差异有统计学意义(P＜0.01).结论 尿沉渣Decoy细胞计数方法简单、易行并敏感,可以做为BK病毒活化的指标;血、尿BK病毒DNA的检测可进一步了解病毒活化情况、筛杳BK病毒相关的移植肾肾病.FK506+MMF的组合免疫抑制方案易发生BK病毒的活化,受者术后需进行密切观察和相关的检测.     

肾移植受者BK病毒的感染特点

Objective To investigate the characteristics of BK virus (BKV) infection in renal transplant recipients. Methods A total of 243 renal recipients from our clinic within 48 months after transplantation were enrolled as the trial group and 82 healthy people as the control group. Urine and peripheral blood samples of these two groups were harvested for urinary sediment BKV cytology by Decoy cell counting and BKV DNA by real-time PCR. Results The positive rates of urinary Decoy cell, BKV viruria and viremia were 35.4%, 36.6% and 16.9% in trial group, and 4.9%, 20.7% and 2.9% in control group, respectively. In trial group, the medians of urinary Decoy cell, urinary BKV and peripheral blood BKV were 6/10 HPF, 1.00×104 copy/ml and 6.87×103 copy/ml respectively, while in control group, they were 2/10 HPF, 1.10×104 copy/ml and 2.24×1(3 copy/ml. Compared with the healthy people, the positive rates and the levels of BKV DNA in urine and peripheral blood of recipients were significantly higher. The amount of urinary Decoy cells was positively correlated to urinary BKV load (r=0.636, P＜0.01). Conclusions BKV replication is easier to happen in renal recipients as compared to healthy people. Counting of urinary Decoy cells is convenient, useful and sensitive to evaluate BK viruria and viremia in renaltransplant recipients. BKV DNA detection in urine and peripheral blood can be used to screen the evidence of BK reaction in order to prevent irreversible graft damage by BKV.[ Key words ] Kidney transplantation; BK virus; Kidney diseases; Decoy cells     

催化信号扩增法检测人巨细胞病毒被膜磷蛋白65的实验分析

目的建立一种新型的快速诊断肾移植受者人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染的方法。方法采用免疫组织化学催化信号扩增法，通过抗HCMV被膜磷蛋白65（pp65）单克隆抗体AAC10对外周血WBC中的HCMVpp65抗原进行标记识别，并与荧光定量PCR（FQ-PCR）方法进行比较。结果检测的102例肾移植受者中，血浆HCMVDNA阳性66例，HCMVpp65抗原阳性56例，血浆HCMVDNA阴性患者中无pp65阳性，两种方法检测的符合率为90．2％，相关性好（r=0．831）；HCMV病患者31例，两者均阳性；同时检测40名健康者，结果pp65抗原全为阴性。结论催化信号扩增法敏感、简便，能更准确地反映HCMV感染的活动状况，有助于肾移植术后HCMV病的早期诊断，并可指导抗病毒治疗。     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测及其在肾移植的临床应用

目的建立一种快速、简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）活动性感染的方法。方法运用免疫组织化学的催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒磷蛋白（phosphoprotein,pp65）,并与抗HCMV-IgM检测法、巨细胞病毒信使核糖核酸（pp67-mRNA）检测法作比较。结果检测53例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性26例,IgM抗体阳性17例,pp67-mRNA检测阳性27例,pp65抗原阳性细胞指数为（71±45）个／2×10^5个白细胞（WBC）,而有症状的CMV病16例,抗原阳性细胞指数为（83±46）个／2×10^5个WBC。pp65的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别是100％、73．0％、61．5％和100％。结论该法敏感,简便,可作为肾移植术后HCMV病的早期诊断,并可指导抗病毒治疗。