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目的:研究肝细胞癌组织中Ⅲ胶原的细胞来源及其基因表达。方法:6例正常肝组织及23例肝细胞癌组织Ⅲ型胶原免疫组化染色采用卵白素—生物素—过氧化物酶法,2例正常肝及9例肝细胞癌组织胶原是因表达检测采用原位核酸杂交技术。结果:正常肝组织及癌旁肝组织非活动性肝病的胶原合成处于静止状态,癌旁活动性肝病时可见间质细胞胶原蛋白及基因表达。癌组织中胶原表达明显增强,癌细胞胶原合成强于间质细胞。结论:①癌旁肝组织合成胶原可能是肝病活动的结果,肝细胞不参与胶原合成;②癌组织中胶原主要来源于癌细胞。 相似文献
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目的:构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)cDNA的重组质粒。方法:利用化学合成引物,进行PCR,对人G-CSFcDNA5AUG侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后,重组人表达载体pED,构建成质粒PED-GCSF,用DEAE-Dextran法转染COS7细胞,ELISA法定量测定rhG-CSF表达水平。结果:转染COS7细胞后48h收集的上清rhG-CSF表达量为5 相似文献
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目的:构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)cDNA的重组质粒。方法:利用化学合成引物,进行PCR,对人G-CSFcDNA5'AUG侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后,重组入表达载体pED,构建成质粒pED-GCSF,用DEAE-Dextran法转染COS7细胞,ELISA法定量测定rhG-CSF表达水平。结果:转染COS7细胞后48h收集的上清rhG-CSF表达量为52ng/ml,72h为230ng/ml,显示rhG-CSF获得了暂时性高表达。结论:pED-GCSF是一个能在哺乳动物细胞中高效表达rhG-CSF的真核表达质粒。 相似文献
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目的:使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达。方法:利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO和pEF-EPO,分别用DEAE-dextran法转染COS7细胞,作瞬时高表达,选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染CHO-dhfr-细胞,加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择,作稳定性高表达。结果:pED-EPO和pEF-EPO转染COS7细胞后72h表达量分别为17.8和21.0ng/ml,pEF-EPO转染CHO-dhfr-细胞,随着MTX浓度的增加,CHO-dhfr+的克隆数减少,而混合克隆的EPO表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株,其3d表达量为16μg/ml。结论:rhEPO在CHO细胞中获得了高表达 相似文献
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